Questa ricerca è stata sostenuta dalle sovvenzioni-in-Aid per la Ricerca Scientifica della Società giapponese per la promozione della scienza (JSP), Grant-in-Aid dal Ministero della Pubblica Istruzione, Cultura, Sport, Scienza e Tecnologia in Giappone, Grants-in- aiuto BIRD e CREST del Giappone Scienza e della Tecnologia Agenzia, Grant-in-Aid da Neuroinformatica Giappone Center (NIJC), RIKEN e da Grant-in-Aid per la ricerca scientifica sulle Settori prioritari-Integrativa Brain Research (Shien) - da MEXT in Giappone. Ringraziamo O&#39;hara &amp; Co. e Mariko Hayashi per la loro assistenza nella creazione di questo film.

Protocollo <ol><li> L&#39;apparecchio utilizzato per la prova più elevata labirinto è nella configurazione di un + e comprende due braccia aperte (25 x 5 x 0,5 cm) di fronte all&#39;altro e da due bracci perpendicolari chiuso (25 x 5 x 16 cm) con un centro piattaforma (5 x 5 x 0,5 cm). Le braccia aperte sono una piccolissima (0,5 cm) a parete per diminuire il numero di cadute, mentre le braccia chiuse hanno una alta (16 cm) a parete per racchiudere il braccio. L&#39;intero apparato è di 50 cm sopra il pavimento (Ohara &amp; Co., Tokyo) e si trova in un serbatoio vuoto circolare (100 cm di diametro, 35 cm di altezza, normalmente utilizzati per l&#39;attività di Morris water maze) per proteggere i topi che cadono o tentativo di fuga durante l&#39;esperimento. L&#39;apparecchio è realizzato in materiali plastici. La piattaforma è bianco e le pareti sono trasparenti. C&#39;è una variazione di materiali e colori degli apparati di più elevata labirinto. </li><li> I topi sono alloggiati con un 12-h luce / ciclo scuro (luci accese alle 7:00), come descritto in precedenza (Takao &amp; Miyakawa, 2006a). Test del comportamento è effettuata 9:00-6:00. Tutti i topi sperimentali vengono trasferiti al comportamento test sala 30 minuti prima di iniziare il primo trial di abituare alla condizione della sala prove comportamento. L&#39;ordine delle prove è controbilanciato tra genotipi. Ci sono due fini della prova, prova pratica con un animale. Uno è quello di assicurarsi che tutto va bene con il sistema di registrazione. Un altro è quello di mantenere la condizione di test il più uniforme possibile. Vale a dire, il mouse prima in tutta la seduta sarebbe stato un po &#39;diversa esperienza con gli altri (cioè, nessun rumore prima fatta da operazioni di collaudo e senza spunti odori provenienti da studi precedenti), senza una prova pratica. Gli animali siano mantenuti secondo le linee guida del Comitato di Ricerca Animale dell&#39;Università di Kyoto. </li><li> La sala collaudo comportamento (170 x 210 x 200 cm, Ohara &amp; Co., Tokyo) è insonorizzata e il livello di illuminazione è mantenuta a 100 lux. Un mouse è posizionato nella zona centrale del labirinto con la testa rivolta verso un braccio chiuso. Il test labirinto più elevato viene registrato con una videocamera collegata a un computer, che è controllato da un dispositivo remoto. Il numero di voci (una voce è definito come il centro di massa del mouse entra al braccio) in ogni braccio e il tempo speso nei bracci aperti sono registrati e queste misure servono come indice di ansia comportamento simile. </li><li> I topi sono autorizzati a muoversi liberamente nel labirinto per 10 min. Ogni topo riceve una prova della nostra batteria di test. L&#39;applicazione utilizzata per l&#39;acquisizione e l&#39;analisi dei dati comportamentali (immagine EP) è basato sul programma di pubblico dominio J immagine (sviluppato da Wayne Rasband presso l&#39;Istituto Nazionale di Salute Mentale e disponibile <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">http://rsb.info.nih.gov/ ij /</a> ), che è stato modificato da Tsuyoshi Miyakawa (disponibile tramite O&#39;Hara &amp; Co., Tokyo, Giappone). </li><li> La distanza percorsa, il numero di voci in ogni braccio, il tempo trascorso in ogni braccio, e la percentuale di inserimenti nelle braccia aperte sono calcolati dal programma PE immagine. </li><li> Dopo ogni prova, tutte le armi e la zona centro vengono puliti con acqua eccellente ipocloroso, che è un efficace agente di rimozione degli odori e ha un odore relativamente debole di se stessa rispetto ad altre soluzioni di pulizia, per evitare un pregiudizio basato su stimoli olfattivi. Così possiamo effettuare i test in condizioni controllate per quanto riguarda stimoli olfattivi. </li></ol>

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	<li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light/dark+transition+test+for+mice.">Light/dark transition test for mice.</a> J Vis Exp. , (2006).</li><li>Aiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+liaison+for+integrative+brain+research.">Mouse liaison for integrative brain research.</a> Neurosci Res. 58, 103-104 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+knockout+mouse+project.">The knockout mouse project.</a> Nat Genet. 36, 921-924 (2004).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+gene-to-behavior+pathways+in+psychiatric+disorders:+the+use+of+a+comprehensive+behavioral+test+battery+on+genetically+engineered+mice.">Investigating gene-to-behavior pathways in psychiatric disorders: the use of a comprehensive behavioral test battery on genetically engineered mice.</a> Ann N Y Acad Sci. 1086, 144-159 (2006).</li><li>Takao, K., Yamasaki, N., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+brain-behavior+phenotyping+of+genetically-engineered+mice+on+research+of+neuropsychiatric+disorders.">Impact of brain-behavior phenotyping of genetically-engineered mice on research of neuropsychiatric disorders.</a> Neurosci Res. 58, 124-1232 (2007).</li><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's Wrong With My Mouse? Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. , 240 (2007).</li><li>Rodgers, R. J., Dalvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anxiety,+defense+and+the+elevated+plus-maze.">Anxiety, defense and the elevated plus-maze.</a> Neurosci Behav Rev. 21, 801-810 (1997).</li><li>Handley, S. L., Mithani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+alpha-adrenoceptor+agonists+and+antagonists+in+a+maze-exploration+model+of+'fear'-motivated+behaviour.">Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 324, 1-5 (1984).</li><li>Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+open:closed+arm+entries+in+an+elevated+plus-maze+as+a+measure+of+anxiety+in+the+rat.">Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat.</a> J Neurosci Meth. 14, 149-167 (1985).</li><li>File, S. E., Pellow, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+triazolobenzodiazepines+in+two+animal+tests+of+anxiety+and+in+the+holeboard.">The effects of triazolobenzodiazepines in two animal tests of anxiety and in the holeboard.</a> Br J Pharmac. 86, 729-7235 (1985).</li><li>Lister, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+plus-maze+to+measure+anxiety+in+the+mouse.">The use of a plus-maze to measure anxiety in the mouse.</a> Psychopharmacology. 92, 180-185 (1987).</li><li>Miyakawa, T., Yagi, T., Kagiyama, A., Niki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radial+maze+performance,+open-field+and+elevated+plus-maze+behaviors+in+Fyn-kinase+deficient+mice:+further+evidence+for+increased+fearfulness.">Radial maze performance, open-field and elevated plus-maze behaviors in Fyn-kinase deficient mice: further evidence for increased fearfulness.</a> Brain Res Mol Brain Res. 37, 145-150 (1996).</li><li>Manabe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+cadherin-11+adhesion+receptor+enhances+plastic+changes+in+hippocampal+synapses+and+modifies+behavioral+responses.">Loss of cadherin-11 adhesion receptor enhances plastic changes in hippocampal synapses and modifies behavioral responses.</a> Mol Cell Neurosci. 15, 534-546 (2000).</li><li>Miyakawa, T., Yamada, M., Duttaroy, A., Wess, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivity+and+intact+hippocampus-dependent+learning+in+mice+lacking+the+M1+muscarinic+acetylcholine+receptor.">Hyperactivity and intact hippocampus-dependent learning in mice lacking the M1 muscarinic acetylcholine receptor.</a> J Neurosci. 21, 5239-5250 (2001).</li><li>Seeger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M2+muscarinic+acetylcholine+receptor+knockout+mice+show+deficits+in+behavioral+flexibility,+working+memory,+and+hippocampal+plasticity.">M2 muscarinic acetylcholine receptor knockout mice show deficits in behavioral flexibility, working memory, and hippocampal plasticity.</a> J Neurosci. 24, 10117-10127 (2004).</li><li>Morishima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+cocaine+responsiveness+and+impaired+motor+coordination+in+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+2+knockout+mice.">Enhanced cocaine responsiveness and impaired motor coordination in metabotropic glutamate receptor subtype 2 knockout mice.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102, 4170 (2005).</li><li>Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junctions+in+Schwann+cells+of+peripheral+myelinated+axons:+a+lesson+from+claudin-19-deficient+mice.">Tight junctions in Schwann cells of peripheral myelinated axons: a lesson from claudin-19-deficient mice.</a> J Cell Biol. 169, 527-538 (2005).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFAT+dysregulation+by+increased+dosage+of+DSCR1+and+DYRK1A+on+chromosome+21.">NFAT dysregulation by increased dosage of DSCR1 and DYRK1A on chromosome 21.</a> Nature. 441, 595-600 (2006).</li><li>Hattori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environments+influence+depression-related+behavior+in+adult+mice+and+the+survival+of+newborn+cells+in+their+hippocampi.">Enriched environments influence depression-related behavior in adult mice and the survival of newborn cells in their hippocampi.</a> Behav Brain Res. 180, 69-76 (2007).</li><li>Niemann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+ablation+of+NMDA+receptor+subunit+NR3B+in+mouse+reveals+motoneuronal+and+non-motoneuronal+phenotypes.">Genetic ablation of NMDA receptor subunit NR3B in mouse reveals motoneuronal and non-motoneuronal phenotypes.</a> Europ J Neurosci. 26, 1407-1420 (2007).</li><li>Sano, H., Nagai, Y., Miyakawa, T., Shigemoto, R., Yokoi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+social+interaction+in+mice+deficient+of+the+striatal+medium+spiny+neuron-specific+phosphodiesterase+10A2.">Increased social interaction in mice deficient of the striatal medium spiny neuron-specific phosphodiesterase 10A2.</a> J Neurochem. 105, 546-556 (2008).</li><li>Horii, Y., Yamasaki, N., Miyakawa, T., Shiosaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+anxiety-like+behavior+in+neuropsin+(kallikrein-related+peptidase+8)+gene-deficient+mice.">Increased anxiety-like behavior in neuropsin (kallikrein-related peptidase 8) gene-deficient mice.</a> Behav Neurosci. 122, 498-504 (2008).</li><li>Fukuda, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+protocadherin-&#945;,+A+isoforms+in+mice+changes+contextual+fear+conditioning+and+spatial+working+memory.">Down-regulation of protocadherin-&#945;, A isoforms in mice changes contextual fear conditioning and spatial working memory.</a> Eur J Neurosci. , .</li><li>Ikeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+YWHAE,+a+gene+encoding+14-3-3epsilon,+as+a+possible+susceptibility+gene+for+schizophrenia.">Identification of YWHAE, a gene encoding 14-3-3epsilon, as a possible susceptibility gene for schizophrenia.</a> Behav Neurosci. , .</li><li>Korte, S. M., De Boer, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+animal+model+of+state+anxiety:+fear-potentiated+behaviour+in+the+elevated+plus-maze.">A robust animal model of state anxiety: fear-potentiated behaviour in the elevated plus-maze.</a> Eur J Phamacol. 463, 163-175 (2003).</li><li>Hogg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+validity+and+variability+of+the+elevated+plus-maze+as+an+animal+model+of+anxiety.">A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety.</a> Pharmacol Biochem Behav. 54, 21-30 (1996).</li><li>Holmes, A., Parmigiani, S., Ferrari, P. F., Palanza, P., Rodgers, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+profile+of+wild+mice+in+the+elevated+plus-maze+test+for+anxiety.">Behavioral profile of wild mice in the elevated plus-maze test for anxiety.</a> Physiol Behav. 71, 509-516 (2000).</li><li>Tsujimura, A., Matsuki, M., Takao, K., Yamanishi, K., Miyakawa, T., Hashimoto-Gotoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+lacking+the+kf-1+gene+exhibit+increased+anxiety-+but+not+despair-like+behavior.">Mice lacking the kf-1 gene exhibit increased anxiety- but not despair-like behavior.</a> Front. Behav. Neurosci. 10, (2008).</li><li>Nakajima, R., Takao, K., SM, H. u. a. n. g., Takano, J., Iwata, N., Miyakawa, T., Saido, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+Behavioral+Phenotyping+of+Calpastatin-Knockout+Mice.">Comprehensive Behavioral Phenotyping of Calpastatin-Knockout Mice.</a> Molecular Brain. , .</li><li>Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+calcineurin+knockout+mice+exhibit+multiple+abnormal+behaviors+related+to+schizophrenia.">Conditional calcineurin knockout mice exhibit multiple abnormal behaviors related to schizophrenia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 8987-8992 (2003).</li><li>Yamasaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factor+analyses+of+large-scale+data+justify+the+behavioral+test+battery+strategy+to+reveal+the+functional+significances+of+the+genes+expressed+in+the+brain.">Factor analyses of large-scale data justify the behavioral test battery strategy to reveal the functional significances of the genes expressed in the brain.</a> , (1985).</li><li>Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+mouse+behavior:+interactions+with+laboratory+environment.">Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment.</a> Scienc. 284, 1670-1672 (1999).</li></ol>

Tutte le procedure sono state approvate con l&#39;uso degli animali e del Comitato cura dell&#39;Università di Kyoto.

Sebbene il genoma del topo è stato sequenziato, le funzioni della maggior parte dei geni non sono noti. Tecniche di modificazione genetica consentono la cancellazione o la manipolazione di altri di uno specifico gene nei topi (Austin et al, 2004;.. Aiba et al, 2007). L&#39;influenza di un dato gene in un comportamento specifico può essere determinato da condurre analisi del comportamento dei topi mutanti (Takao e Miyakawa, 2006b;. Takao et al, 2007). La prova più elevata labirinto è una delle prove più popolari di tutti i modelli animali attualmente disponibili di ansia (Rodgers e Dalvi, 1997; Crawley, 2007). Questo test per l&#39;ansia comportamento simile è stato utilizzato per lo screening e fenotipizzazione topi transgenici e knockout (Crawley, 1999) e per la scoperta (Hogg et al 1996;. Crawley, 2007). La prova più elevata labirinto ha una forte validità predittiva per lo screening di farmaci ansiolitici (Rodgers e Dalvi, 1997; Mechiel Korte e De Boer, 2003; Crawley, 2007); farmaci ansiolitici specificamente aumentare, e le droghe ansiogeno specificamente diminuire, il numero di voci in le braccia aperte e il tempo trascorso. Il punteggio totale le voci e la distanza totale sono considerate un utile indice di attività generali. Punteggio totale le iscrizioni è anche un indice di ansia, e le percentuali di voci e di tempo speso in ogni braccio costituiscono l&#39;indice di ansia primaria (Rodgers e Dalvi, 1997, Mechiel Korte e De Boer, 2003). Le braccia aperte e chiuse sono considerati per evocare la stessa unità esplorativa, pertanto, di evitare le braccia aperte è considerata una conseguenza della induzione di alti livelli di paura (Rodgers e Dalvi, 1997). Si pensa che l&#39;avversione dei topi per esplorare le braccia aperte del labirinto è causato dalla paura degli spazi aperti ed elevato. Nel 1984, Handley e Mithani riferito sul lavoro preliminare con l&#39;elevato X (più) test del labirinto descritto sopra. L&#39;apparato sperimentale originale è stato sollevato 70 centimetri sopra il pavimento, e comprendeva due chiuse e due braccia aperte, ognuna delle quali misura 45 cm di lunghezza per 10 cm di larghezza. Nei loro studi iniziali, hanno segnalato il rapporto di aperto / totale voci braccio (Handley e Mithani, 1984). Successivamente, altri indici sono stati sviluppati che includevano il numero di voci tra le braccia chiuse e aperte e il tempo trascorso nei bracci chiusi e aperti per i ratti (Pellow et al, 1985; Pellow e File, 1986) e topi (Lister, 1987) . Modifiche alla prova più elevata labirinto incluso allungamento di entrambe le braccia aperte (50 x 10 cm) e le braccia chiuso (50 x 10 x 40 cm) con alte mura e un tetto aperto sulle braccia chiuse, e il labirinto intera è stata elevata ad un&#39;altezza di 50 cm (Pellow et al, 1985; Pellow e File, 1986). Attualmente, nel nostro laboratorio, la più elevata di prova labirinto è configurato in forma di +, con due braccia aperte (25 x 5 cm, con un lievissimo, 0,5 cm, parete) di fronte all&#39;altro e perpendicolari a due braccia chiuso (25 x 5 x 16 cm), ed è sollevato 50 cm sopra il pavimento (Miyakawa et al, 1996; Manabe et al, 2000; Miyakawa et al, 2001; Seeger et al, 2004; Morishima et al, 2005; Miyamoto et al, 2005; Arrow et al, 2006; Hattori et al, 2007; Niemann et al, 2007; Sano et al, 2008; Horii et al, 2008; Fukuda et al, 2008; Ikeda et al, 2008). Il mouse è posizionato al centro del + (5 cm x 5 cm) ed è permesso di esplorare il labirinto liberamente. Se 5 minuti di registrazione è comune, il comportamento è registrato per 10 minuti nel nostro protocollo per aumentare la possibilità di rilevare il fenotipo. Le braccia aperte e chiuse elevato indurre un conflitto di esplorazione (Mechiel Korte e De Boer, 2003; Crawley, 2007). Le misure della prova più elevata labirinto vengono registrati da un osservatore durante l&#39;esperimento. Nel nostro laboratorio, il test viene registrato con una videocamera collegata ad un computer e dei dati comportamentali (Immagine EP) vengono acquisiti e analizzati utilizzando il programma PE immagine. Numero di voci sulla braccia aperte contro il numero di voci braccio totale, e il tempo trascorso sulle braccia aperte rispetto a braccia chiuse, di fornire le misure di ansia comportamento simile. Abbiamo valutato più di 90 ceppi di topi mutanti geneticamente modificati utilizzando il protocollo mostrato nel film e hanno un grande insieme di dati grezzi per più di 5000 topi (compresi wild-type e topi mutanti). Nella nostra batteria di test, wild-type fratellini sono di solito usati come controllo. Come un ceppo di fondo, i topi C57BL/6J sono ampiamente utilizzati. Abbiamo raccolto i dati di topi C57BL/6J nei test comportamentali. I valori ottenuti dai topi C57BL/6J nel nostro test labirinto più elevate sono le seguenti (n = 914; media ± SEM); distanza totale percorsa: 1.547,55 14,27 centimetri; durata del tempo trascorso: 56,49 2,42 s (braccia aperte), 384,02 3,13 s (braccia chiuso), 161,90 2,17 s (centro labirinto); rapporto tra tempo trascorso in braccia aperte: 9,19 0,36%, il rapporto del tempo trascorso tra le braccia chiuse: 63,82 0,52%, il numero di voci: 7.64 0.21 (braccia aperte), 24,32 0,28 (braccia chiuso); voci braccio% aperto: 21.9 0.05, chiuso% voci braccia: 78.1 0.05. Topi C57BL/6J passare meno tempo a braccia aperte che chiuse in armi (p &lt;0.0001, n = 914, appaiati-t test). Questo indica che i topi C57BL/6J tendono ad evitare le braccia aperte, e che il tempo trascorso in braccia aperte è un indice valido di ansia comportamento simile. Inoltre, l&#39;ordine delle prove è controbilanciato tra genotipi, perché il numero di prova riguarda il tempo trascorso in braccia aperte e la piattaforma centrale. Cioè, gli indici di tutti aumentare durante i topi 3 e 4 rispetto al primo topi (p = 0,0089, n = 476) (dati non pubblicati). Con il nostro protocollo, l&#39;analisi di più di 1661 topi hanno mostrato che l&#39;ordine sequenziale dei topi testati in una gabbia non influenza significativamente il tempo di permanenza aperto braccio (dati non pubblicati). Cioè, le performance dei topi prima preso dalla gabbia non molto diverse da quelle del secondo, il terzo o il topo scorso. Anche se la prova più elevata labirinto e il chiaro / scuro prova transizione sono entrambi utilizzati per valutare l&#39;ansia, come il comportamento, i risultati non sono sempre coerenti tra loro (Holmes et al, 2000; Tujimura et al, 2008; Nakajima et al, in press ) Ad esempio, proencefalo specifici calcineurina-topi knockout trascorrere una diminuzione della quantità di tempo nella camera di luce nella luce / buio prova di transizione, ma una maggiore quantità di tempo tra le braccia aperte nella prova più elevata labirinto (Miyakawa et al. , 2003). L&#39;analisi fattoriale della nostra batteria di test comportamentali indica che il test labirinto più elevate e la luce / buio prova transizione valutare diversi aspetti di ansia comportamento simile, come ad esempio luminoso spazio-ansia alla luce / buio prova di transizione e open-space ansia-come comportamento nel test a campo aperto (Takao e Miyakawa, 2006b; Yamasaki et al, 2006). Di conseguenza, sia il chiaro / scuro prova di transizione e il test più elevata labirinto sono inclusi nella nostra batteria di test comportamentali. Tiger e colleghi hanno riportato che le variabili incontrollate e sperimentazioni che caratterizzano i mutanti possono dare risultati che sono specifici di un laboratorio di particolare (Crabbe et al., 1999). Le differenze procedurali che esistono tra i laboratori rendono difficile da replicare o confrontare i risultati tra di loro. Stabilire documentazione visiva del protocollo intende promuovere una migliore comprensione delle procedure sperimentali, permettendo per la standardizzazione dei protocolli utilizzati in laboratori e confronti tra i fenotipi comportamentali dei vari ceppi di topi mutanti valutata usando questi test. Abbiamo già pubblicato un protocollo film della luce / buio prova di transizione (Takao e Miyakawa, 2006a). Allo stesso modo, i filmati di altri protocolli, come ad esempio per il test a campo aperto, il porsolt costretto prova nuotare, e prove di condizionamento alla paura che usiamo nella nostra batteria di test comportamentali sono attualmente in corso per la pubblicazione di articoli di giornale futuro video.

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<td>Elevated plus maze</td>
<td>Tool</td>
<td>O&#x2019;hara & Co.</td>
<td>(none)</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

elevated plus maze for mice

Sebbene il genoma del topo è ora completamente sequenziato, le funzioni della maggior parte dei geni espressi nel cervello non sono noti. L&#39;influenza di un dato gene in un comportamento specifico può essere determinato mediante l&#39;analisi del comportamento dei topi mutanti. Se un gene bersaglio è espressa nel cervello, fenotipo comportamentale dei topi mutanti potrebbe chiarire il meccanismo genetico di comportamenti normali. La prova più elevata labirinto è uno dei test più utilizzato per misurare l&#39;ansia comportamento simile. Il test si basa sulla naturale avversione di topi per le aree aperte ed elevato, così come sul loro comportamento naturale, spontaneo esplorative in ambienti romanzo. L&#39;apparato è costituito da braccia aperte e chiuse le braccia, attraversato nel mezzo perpendicolarmente l&#39;uno all&#39;altro, e una zona centrale. I topi hanno accesso a tutte le armi e sono autorizzati a muoversi liberamente tra di loro. Il numero di voci nelle braccia aperte e il tempo trascorso nei bracci aperti sono utilizzati come indici di spazio aperto ansia indotta nei topi. Purtroppo, le differenze procedurali che esistono tra i laboratori rendono difficile da duplicare e confrontare i risultati tra i laboratori. Qui, vi presentiamo un film dettagliato dimostrare il nostro protocollo per la prova più elevata labirinto. Nel nostro laboratorio, abbiamo valutato più di 90 ceppi di topi mutanti utilizzando il protocollo mostrato nel film. Tali dati saranno comunicati come parte di un database pubblico che stiamo costruendo. Visualizzazione del protocollo intende promuovere una migliore comprensione dei dettagli di tutta la procedura sperimentale, che consente per la standardizzazione dei protocolli utilizzati in diversi laboratori e confronti dei fenotipi comportamentali dei vari ceppi di topi mutanti valutata usando questo test.

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Elevated Plus Maze for Mice

La prova più elevata labirinto è uno dei test più utilizzato per misurare l&#39;ansia comportamento simile nei topi. Qui, vi presentiamo un film che mostra le procedure dettagliate per lo svolgimento del test.

Elevata Maze Plus per topi

Although the mouse genome is now completely sequenced, the functions of most of the genes expressed in the brain are not known. The influence of a given ...

Research

JoVE Journal

Biology

89.7K Views.  Graduate School of Medicine, Kyoto University. La prova più elevata labirinto è uno dei test più utilizzato per misurare l'ansia comportamento simile nei topi. Qui, vi presentiamo un film che mostra le procedure dettagliate per lo svolgimento del test.

Video: Elevated Plus Maze for Mice

Light/dark Transition Test for Mice

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, however, can be used to delete or manipulate a specific gene in mice. The influence of a given gene on a specific behavior can then be determined by conducting behavioral analyses of the mutant mice. As a test for behavioral phenotyping of mutant mice, the light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. The test is based on the natural aversion of mice to brightly illuminated areas and on their spontaneous exploratory behavior in novel environments. The test is sensitive to anxiolytic drug treatment. The apparatus consists of a dark chamber and a brightly illuminated chamber. Mice are allowed to move freely between the two chambers. The number of entries into the bright chamber and the duration of time spent there are indices of bright-space anxiety in mice. To obtain phenotyping results of a strain of mutant mice that can be readily reproduced and compared with those of other mutants, the behavioral test methods should be as identical as possible between laboratories. The procedural differences that exist between laboratories, however, make it difficult to replicate or compare the results among laboratories. Here, we present our protocol for the light/dark transition test as a movie so that the details of the protocol can be demonstrated. In our laboratory, we have assessed more than 60 strains of mutant mice using the protocol shown in the movie. Those data will be disclosed as a part of a public database that we are now constructing.

Visualization of the protocol will facilitate understanding of the details of the entire experimental procedure, allowing for standardization of the protocols used across laboratories and comparisons of the behavioral phenotypes of various strains of mutant mice assessed using this test.

The light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. Here, we present a movie that shows detailed procedures on how we conduct the test.

Luce / buio test di transizione per i Topi

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, ...

Ricerca

Biologia

Morris Water Maze Experiment

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered non-fat milk or non-toxic tempera paint, where they must swim to a hidden escape platform. Because they are in opaque water, the animals cannot see the platform, and cannot rely on scent to find the escape route. Instead, they must rely on external/extra-maze cues. As the animals become more familiar with the task, they are able to find the platform more quickly. Developed by Richard G. Morris in 1984, this paradigm has become one of the "gold standards" of behavioral neuroscience.

The Morris water maze is a well-accepted tool used to document the involvement of the hippocampus in a behavioral task.

Morris Water Maze Esperimento

The Morris water maze is widely used to study spatial memory and learning. Animals are placed in a pool of water that is colored opaque with powdered ...

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of microbiology was transformed with the advent of Anton van Leeuwenhoek&#39;s microscope, which allowed scientists to visualize prokaryotes for the first time. The development of the polymerase chain reaction (PCR) is one of those innovations that changed the course of molecular science with its impact spanning countless subdisciplines in biology. The theoretical process was outlined by Keppe and coworkers in 1971; however, it was another 14 years until the complete PCR procedure was described and experimentally applied by Kary Mullis while at Cetus Corporation in 1985. Automation and refinement of this technique progressed with the introduction of a thermal stable DNA polymerase from the bacterium Thermus aquaticus, consequently the name Taq DNA polymerase.
PCR is a powerful amplification technique that can generate an ample supply of a specific segment of DNA (i.e., an amplicon) from only a small amount of starting material (i.e., DNA template or target sequence). While straightforward and generally trouble-free, there are pitfalls that complicate the reaction producing spurious results. When PCR fails it can lead to many non-specific DNA products of varying sizes that appear as a ladder or smear of bands on agarose gels. Sometimes no products form at all. Another potential problem occurs when mutations are unintentionally introduced in the amplicons, resulting in a heterogeneous population of PCR products. PCR failures can become frustrating unless patience and careful troubleshooting are employed to sort out and solve the problem(s). This protocol outlines the basic principles of PCR, provides a methodology that will result in amplification of most target sequences, and presents strategies for optimizing a reaction. By following this PCR guide, students should be able to: 
 
&#9679; Set up reactions and thermal cycling conditions for a conventional PCR experiment 
&#9679; Understand the function of various reaction components and their overall effect on a PCR experiment 
&#9679; Design and optimize a PCR experiment for any DNA template 
&#9679; Troubleshoot failed PCR experiments

PCR has emerged as a common technique in many molecular biology laboratories. Provided here is a quick guide to several conventional PCR protocols. Because each reaction is a unique experiment, optimal conditions required to generate a product vary. Understanding the variables in a reaction will greatly enhance troubleshooting efficiency, thereby increasing the chance to obtain the desired result.

Polymerase Chain Reaction: protocollo Basic Plus Strategies Risoluzione dei problemi e ottimizzazione

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Milk Collection Methods for Mice and Reeves&#039; Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

Metodi Latte di raccolta per topi e Reeves &#39;Muntjac

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Intravenous Injections in Neonatal Mice

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are technically feasible and routine. However, some mouse models can have early onset of disease with a rapid progression that makes administration of potential therapies difficult. The temporal (or facial) vein is just anterior to the ear bud in mice and is clearly visible for the first two days after birth on either side of the head using a dissecting microscope. During this window, the temporal vein can be injected with volumes up to 50 &#956;l. The injection is safe and well tolerated by both the pups and the dams. A typical injection procedure is completed within 1-2 min, after which the pup is returned to the home cage. By the third postnatal day the vein is difficult to visualize and the injection procedure becomes technically unreliable. This technique has been used for delivery of adeno-associated virus (AAV) vectors, which in turn can provide almost body-wide, stable transgene expression for the life of the animal depending on the viral serotype chosen.

Animal models of pediatric disease can experience early onset and aggressive disease progression. Clinically relevant therapy delivery to young mouse models can be technically difficult. This protocol describes a non-invasive intravenous injection method for newborn mice within the first two postnatal days of life.

Le iniezioni per via endovenosa nel topo neonatale

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic mouse models using this method necessitates the construction of a &#8216;targeting&#8217; vector, which contains homologous DNA sequences to the target gene, and has for many years been a limiting step in the process. Vector construction can be performed in vivo in Escherichia coli cells using homologous recombination mediated by phage recombinases using a technique termed recombineering. Recombineering is the preferred technique to subclone the long homology sequences (>4kb) and various targeting elements including selection markers that are required to mediate efficient allelic exchange between a targeting vector and its cognate genomic locus. Typical recombineering protocols follow an iterative scheme of step-wise integration of the targeting elements and require intermediate purification and transformation steps. Here, we present a novel recombineering methodology of vector assembly using a multiplex approach. Plasmid gap repair is performed by the simultaneous capture of genomic sequence from mouse Bacterial Artificial Chromosome libraries and the insertion of dual bacterial and mammalian selection markers. This subcloning plus insertion method is highly efficient and yields a majority of correct recombinants. We present data for the construction of different types of conditional gene knockout, or knock-in, vectors and BAC reporter vectors that have been constructed using this method. SPI vector construction greatly extends the repertoire of the recombineering toolbox and provides a simple, rapid and cost-effective method of constructing these highly complex vectors.

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting methodologies can be used to generate transgenic mice with knockout, knock-in and tagged alleles. Here, we describe an improved method of recombineering in E. coli, that we term &#8216;subcloning plus insertion&#8217;, which can be used to generate custom gene targeting vectors rapidly.

Subcloning più Insertion (SPI) - A Novel Metodo recombineering per la costruzione rapida di gene targeting Vettori

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...

A Strategy to Validate the Role of Callose-mediated Plasmodesmal Gating in the Tropic Response

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The establishment of an auxin gradient is a key event leading to phototropism and gravitropism. Previously, polar auxin transport (PAT) was shown to establish an auxin gradient in different cellular domains of plants. However, Han et al. recently demonstrated that for proper auxin gradient formation, plasmodesmal callose-mediated symplasmic connectivity between the adjacent cells is also a critical factor. In this manuscript, the strategy to elucidate the role of particular genes, which can affect phototropism and gravitropism by altering the symplasmic connectivity through modulating plasmodesmal callose synthesis, is discussed. The first step is to screen aberrant tropic responses from 3-day-old etiolated seedlings of mutants or over-expression lines of a gene along with the wild type. This preliminary screening can lead to the identification of a range of genes functioning in PAT or controlling symplasmic connectivity. The second screening involves the sorting of candidates that show altered tropic responses by affecting symplasmic connectivity. To address such candidates, the movement of a symplasmic tracer and the deposition of plasmodesmal callose were examined. This strategy would be useful to explore new candidate genes that can regulate symplasmic connectivity directly or indirectly during tropic responses and other developmental processes.

This article describes the methods for screening the genes controlling plasmodesmal permeability and hence auxin gradient during tropic response. This includes the measurement of the degree of tropic response in hypocotyl of Arabidopsis thaliana and checking plasmodesmal permeability by 8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid (HPTS) loading and finally callose level assessment.

Una strategia per convalidare il ruolo di callose mediata Plasmodesmal gating nella risposta Tropic

The plant hormone auxin plays an important role in many growth and developmental processes, including tropic responses to light and gravity. The ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

Un metodo di perfusione antegrada per l'isolamento dei cardiomiociti dai topi

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Terminal H-reflex Measurements in Mice

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits after injuries such as spinal cord damage or stroke. An increase of the H-reflex response, together with symptoms like non-voluntary muscle contractions, pathologically augmented stretch reflex, and hypertonia in the corresponding muscle, is an indicator of post-stroke spasticity (PSS).
In contrast to rather nerve-unspecific transcutaneous measurements, here, we present a protocol to quantify the H-reflex directly at the ulnar and median nerves of the forepaw, which is applicable, with minor modifications, to the tibial and sciatic nerve of the hindpaw. Based on the direct stimulation and the adaptation to different nerves, the method represents a reliable and versatile tool to validate electrophysiological changes in spasticity-related disease models.

The clinical evaluation of spasticity based on the Hoffmann reflex (H-reflex) and using electrical stimulation of peripheral nerves is an established method. Here, we provide a protocol for a terminal and direct nerve stimulation for H-reflex quantification in the mouse forepaw.

Misurazioni del riflesso H terminale nei topi

The Hoffmann reflex (H-reflex), as an electrical analog to the stretch reflex, allows electrophysiological validation of the integrity of neural circuits ...

A Modified Technique for Transverse Aortic Constriction in Mice

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of pressure overload in mouse models. The main challenge of this procedure is to clearly visualize the transverse aortic arch and precisely band the target vessel. Classical approaches perform a partial thoracotomy to expose the transverse aortic arch. However, it is an open-chest model that causes a rather large surgical trauma and requires a ventilator during the surgery. To prevent unnecessary trauma and simplify the operating procedure, the aortic arch is approached via the proximal proportion of the sternum, reaching and binding the target vessel using a small self-made retractor that contains a snare. This procedure can be conducted without entering the pleura cavity and does not need a ventilator or microsurgical operation, which leaves the mice with physiological breathing patterns, simplifies the procedure, and significantly reduces operation time. Due to the less invasive approach and less operation time, mice can undergo fewer stress reactions and recover rapidly.

The present protocol describes a modified and simplified technique with a minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) procedure using a self-made retractor. This procedure can be conducted without a ventilator or microscope and introduces pressure overload, eventually leading to cardiac hypertrophy or heart failure.

Una tecnica modificata per la costrizione aortica trasversale nei topi

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of ...