Coloque las placas de sedimentación TSA y SAB etiquetadas cerca del área de trabajo, pero en un área que no interfiera con las pruebas. Documente la hora de inicio del muestreo. Asépticamente, abra ambas placas, colocando las tapas sobre una superficie limpia en el gabinete de seguridad biológica lejos del área de trabajo durante un máximo de cuatro horas para evitar que el agar se seque.
Al final del procesamiento, cierre las tapas de las placas y documente el tiempo de parada del muestreo. Sueltamente, empaqueta los platos e incuba los cultivos. Para el muestreo con la yema del dedo enguantado, obtenga dos placas TSALT etiquetadas.
Retire asépticamente la tapa de las placas y colóquela sobre una superficie de trabajo limpia lejos del área de muestreo. Haga rodar suavemente la yema de cada dedo y pulgar sobre la superficie de la placa. Use la fuerza suficiente para hacer ligeras depresiones en el agar sin agrietar la superficie del agar.
Vuelva a colocar la tapa asépticamente en el plato. Después de desinfectar las manos al finalizar el muestreo, empaque holgadamente los platos e incube los cultivos. Para la inoculación directa, siguiendo el método de la Farmacopea de los Estados Unidos, coloque las placas de sedimentación TSA y SAB en el gabinete de bioseguridad.
Después de preparar el gabinete y organizar los materiales, documente la hora de inicio del muestreo. Obtenga el artículo de prueba y los frascos de caldo de soja tríptico y tioglicolato líquido asociado. Si los frascos tienen tabique, retire las tapas protectoras de cada frasco y limpie el tabique con una toallita con alcohol estéril.
Vortex el artículo de prueba para asegurar una suspensión homogénea y un inoculado de los frascos con un volumen validado del artículo de prueba utilizando una jeringa estéril y una aguja hipodérmica. Limpie el tabique con una toallita con alcohol estéril e inserte una unidad de ventilación estéril para permitir el intercambio de aire durante la incubación. Repita los pasos para cada artículo de prueba de esa sesión.
Cierre asépticamente las placas de sedimentación TSA y SAB y documente la hora de finalización del muestreo antes de realizar el muestreo con la punta del dedo enguantado. Limpie los guantes con alcohol isopropílico estéril al 70%, embolse las placas e incube los cultivos. Transfiera todos los materiales de prueba fuera del gabinete de seguridad biológica.
Del mismo modo, para la inoculación directa, siguiendo el método alternativo de prueba de esterilidad de los NIH, coloque las placas de sedimentación TSA y SAB en el gabinete de bioseguridad y documente la hora de inicio del muestreo. Obtenga el artículo de prueba y la etiqueta IFA Plus asociada, la etiqueta IFN Plus y la placa SAB. Retire las tapas protectoras de los frascos IFA Plus e IFN Plus y limpie el tabique con una toallita con alcohol estéril.
Después de vórtice del artículo de prueba, inocular los frascos con el volumen validado del artículo de prueba utilizando una jeringa estéril y una aguja hipodérmica y limpiar el tabique nuevamente. Incubar las botellas en el instrumento BACT/ALERT Dual T. Usando un pipeteo, inocular la placa SAB con una cantidad validada del artículo de prueba y rayar para el aislamiento usando un bucle estéril.
Deje reposar durante 10 minutos para asegurarse de que la muestra no se ejecute en la tapa de la placa cuando se invierte para la incubación Coloque cada placa SAB inoculada con un artículo de prueba en una bolsa de plástico. Átalos flojamente. Cierre asépticamente las placas de sedimentación TSA y SAB.
Documente la hora de finalización del muestreo en las placas y realice el muestreo de la yema del dedo enguantado. Después de la muestra, limpie los guantes con alcohol al 70%. Empace holgadamente los platos después de limpiar los guantes con alcohol e incube los cultivos.
Aquí se muestra una placa de sedimentación de aire TSA que ilustra una sola colonia de un contaminante cultivado durante el monitoreo pasivo del proceso de aire en el gabinete de seguridad biológica. En esta figura se muestra la placa de muestreo de superficie TSALT con tres unidades formadoras de colonias de dos morfologías de colonias distintas. El cultivo superficial de TSALT con una sola colonia en el borde de la placa indica un manejo aséptico deficiente durante el proceso de muestreo.
El método correcto para obtener muestras de la punta del dedo enguantado utilizando el área de superficie más grande de cada dedo o pulgar se muestra en esta imagen. Aquí se muestra el proceso incorrecto en el que solo se muestrea la yema del dedo. Aquí se muestra un ejemplo de bolas de moho visibles a simple vista que el sistema BACT/ALERT no detectó automáticamente.
Con base en estos hallazgos, se recomienda la inspección visual terminal de todas las botellas BACT/ALERT y la adición de la placa SAB para el cultivo de hongos utilizando el método alternativo de prueba de esterilidad de los NIH.
