Para comenzar el etiquetado de las mitocondrias, prepare una solución de 20 micromolares de BrdU en DMEM con 10% de suero bovino fetal o FBS. Luego agregue el tinte de seguimiento de las mitocondrias para ajustar la concentración final a 1.1 micromolar. Después de 15 horas, agregue 10 microlitros de la solución de colorante de seguimiento de mitocondrias a los pocillos que contienen la suspensión de células HeLa.
Incubar las células durante una hora. Las condiciones utilizadas para marcar moléculas de ADN recién sintetizadas con BrdU permitieron la detección de ADN marcado con BrdU en las mitocondrias de las células HeLa. La señal obtenida con anticuerpos anti-BrdU fue específica y solo se observó en células tratadas con BrdU.
Independientemente del tratamiento con BrdU, no se detectó ninguna señal de anticuerpos anti-BrdU o anti-ADN en las mitocondrias de las células de la fila cero. La cuantificación de la señal fluorescente de los anticuerpos anti-BrdU indicó que las células de la fila cero tratadas con BrdU mostraron el mismo nivel bajo de fluorescencia que las células BrdU no tratadas, mientras que la señal para las líneas parentales A549 y HeLa fue 50 veces mayor.
