Comience colocando las células SHSY 5Y en placas de células con fondo de vidrio a una densidad de 15 por 10 rayos para alimentar cuatro células por mililitro. Tratar las células con ácido transretinoico en medio de cultivo al 1% que contenga FBS durante cinco días, seguido de un tratamiento con factor neurotrófico derivado del cerebro durante dos días. Luego, lave las células con PBS estéril.
Tratar las células durante 72 horas con 10 a 7 agonistas molares de AR o isoformas utilizando partes iguales de MEM y medio F12 combinado con FBS al 1%. Reemplace el medio con medio de cultivo fresco que contenga 1% de FBS mezclado con TMRM de 20 nanomolares durante 45 minutos. Coloque las células en una incubadora conectada a un microscopio confocal de barrido láser a 37 grados centígrados.
Capture las imágenes con un objetivo apocromático de inmersión en aceite de 63x. Establezca el tamaño de la imagen en 512 x 512 píxeles con una apertura estenopeica de una unidad de área. Recopila una serie temporal de 15 fotogramas de cinco campos visuales diferentes en cada placa de celda y una pila Z de ocho planos Z equidistantes.
El archivo LSM resultante debe contener datos de tiempo, posición y pila Z.
