Name: a murine model of vertical sleeve gastrectomy
Uploaded: 2017-12-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
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Esta investigación fue apoyada por NIH/NCI R21CA195002-01A1, Consejo del Presidente de mujeres de Cornell y la beca postgrado de diversidad de SUNY. Laboratorio de Dr. Cummings recibida también financiación durante el período del proyecto de la Cornell comparativo cáncer biología programa de capacitación y Eli Lilly and Company.

Todos los protocolos experimentales han sido aprobados por la Comisión de uso y de Cornell Universidad Animal cuidado institucional.
1. pre-quirúrgica preparación
Nota: Estudio los ratones son típicamente en C57BL inducida por la dieta obesidad antecedentes para realizar estudios de forma relevante a la obesidad humana y resistencia a la insulina. Ratones masculinos y femeninos pueden ser estudiados como se describe en los pasos posteriores.
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	<li>En una edad de 2 meses, poner ratones en una dieta alta en grasas 45% o 60% por 2 meses (véase Tabla de materiales). Nota: Los ratones son alimentados una dieta alta en grasas para crear un fenotipo de obesidad y resistencia a la insulina. Períodos más cortos o más largos de la alimentación con dieta alta en grasas pueden usarse dependiendo de los objetivos del estudio.</li>
	<li>Continuar alimentar ratones ad libitum hasta la cirugía. Si se requieren mediciones iniciales, después de 7 semanas de alto grado en grasas de la dieta de alimentación, ayunar a ratones durante 6 h o toda la noche y tomar una muestra de sangre de referencia para la medición de metabolitos de interés (por ejemplo, glucosa).</li>
	<li>Continuar ratones en alto grado en grasas de la dieta y permiten a ratones una semana para recuperarse después de muestras de sangre antes de la cirugía ficticia o VSG. Lugar de ratones en un líquido (véase Tabla de materiales) de la dieta durante 4 días antes de la cirugía. Nota: Ratones se mantienen en una dieta de líquidos antes y después de la cirugía para limpiar el tracto digestivo de partículas que pueden afectar la respuesta curativa.</li>
	<li>Esterilizar los siguientes elementos antes de la cirugía: papel de aluminio, gasa, algodón con punta aplicadores (CTA) y los instrumentos quirúrgicos (pinza, tijera, tijera de iris, pinza de dumont, de funcionamiento dentada pinza Brown-Adson, aguja de la sonda, controlador de microneedle, tijera primavera ).</li>
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2 procedimientos de farsa y gastrectomía en manga vertical
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	<li>En el día de la cirugía pesar ratones para obtener una medida de peso de la línea de base.</li>
	<li>Equipar la sala quirúrgica con un cojín de calefacción, sistema de anestesia y baño de agua caliente. Ajuste el baño de agua a 37 ° C y usar caliente solución salina 0,9% para irrigación. Limpio el campo quirúrgico con etanol al 70% y utilizar técnica estéril para abrir herramientas y paquete esterilizado de cirugía. Nota: La almohadilla de la calefacción se utiliza para mantener el animal caliente durante la cirugía y la recuperación de la anestesia.</li>
	<li>Utilizando una cámara de inducción, anestesiar el ratón con isoflurano 5% y tasa de flujo de2 O de 1 L/min., confirme que el ratón está en el plano adecuado de anestesia realizando una pizca del dedo del pie. Mantener el ratón con isoflurano 1-3% y una tasa de flujo de O2 de 0,6 L/min una vez que se ha logrado un plano consistente de la anestesia.</li>
	<li>Una vez que el ratón está anestesiado, colocar ungüento oftálmico (véase tabla de materiales) en los ojos para mantenerlos húmedos durante la cirugía. En este momento también administrar un analgésico, como el meloxicam (2 mg/kg por vía subcutánea). Recorte el pelo del ombligo a la axila manteniendo suavemente la piel para proporcionar tensión.
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		<li>Como la piel del ratón es fino y delicado, tenga cuidado de no causar lesiones de piel cuando recorte el pelo. Limpiar la piel con povidona yodada y alcohol.</li>
		<li>Ponerse guantes estériles y preparar el campo quirúrgico estéril e instrumentos. Realizar el resto del procedimiento utilizando una técnica estéril. Preparar el campo quirúrgico estéril colocando cortinas quirúrgicas estériles en ambos lados del ratón. Utilice papel aluminio esterilizado para crear un paño quirúrgico para el ratón.</li>
		<li>Corte un pequeño agujero en la hoja de lata para permitir el acceso al abdomen del ratón.</li>
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	<li>Hacer una incisión de la piel de la parte central del abdomen (ombligo) hasta el nivel del cartílago de xiphoid utilizando una tijera de iris. Identificar la linea iris alba y uso de las tijeras para cortar a través de la pared del cuerpo a lo largo de la linea alba. Utilice CTA para elevar suavemente el estómago en el abdomen y luego diseccionar sin rodeos el epiplón mayor de la curvatura mayor del estómago.</li>
	<li>Ligar la arteria gástrica corto que discurre entre el fundus del estómago y el bazo colocando dos ligaduras con sutura absorbible de monofilamento de 7-0. Utilice tijeras de primavera para cortar entre las dos ligaduras. Una vez que la arteria es transversalmente, exteriorizar completamente el estómago de la cavidad abdominal. Coloque la gasa en el estómago y mojado con una solución salina para mantener el tejido húmedo.</li>
	<li>Procedimiento simulado
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		<li>Para el procedimiento simulado, coloque un patrón continuo simple suelto de la sutura con sutura absorbible de monofilamento 6-0 con una aguja cónica. Comienzan 2 mm a la derecha (a la derecha del cirujano) del esófago. Coloque la línea de sutura a lo largo de la pared gástrica ventral y luego continuar a lo largo de la pared gástrica dorsal. Nota: Para todas las manipulaciones gástricas, use solamente la sutura absorbible monofilamento para disminuir el riesgo de infección. Además, usar sólo la sutura con una aguja cónica para todas las manipulaciones gástricas, como el uso de una aguja de corte aumenta el riesgo de sutura "tirar-por" conduce al daño de tejido gástrico y dehiscencia de la herida.</li>
		<li>Pase la aguja completamente a través de una pared gástrica colocando la sutura. Asegúrese de que la sutura es acostado, pero no restringe el estómago. Suavemente atar la sutura de uso 3-4 tiros y vaya al paso 2.9.</li>
		<li>Para el procedimiento VSG omitir paso 2.7 y continúe con el paso de 2.8.</li>
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	<li>Procedimiento VSG
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		<li>Para el procedimiento de la VSG, ligar las ramas prominentes de la gástrica de la arteria y la vena con 7-0 Sutura absorbible monofilamento con aguja ahusada con 3 tiros para cada nudo. Colocar las ligaduras justo debajo (es decir, hacia la curvatura menor del estómago) la línea pretendida de transección. Nota: La línea pretendida de transección comienza a ~ 2 mm anterior (es decir hacia la curvatura mayor del estómago) la muesca cardiaca del estómago y por lo menos 2 mm por debajo de la pilcatus de margo y se extiende hasta el extremo proximal del lóbulo derecho del páncreas. Por lo general, hay 4 recipientes por la pared gástrica que se unen; sin embargo, esto puede variar entre ratones.</li>
		<li>Para evitar derrames del contenido gástrico durante la gastrectomía, colocar una simple línea continua de sutura pasa a través de ambas paredes gástricas justo debajo de la línea pretendida de transección usando Sutura absorbible de monofilamento 6-0 con una aguja cónica. Comenzar la línea de sutura a la derecha del cirujano, del esófago y por debajo de la pilcatus de margo y al final justo por encima del páncreas.</li>
		<li>Colocar pinzas hemostáticas con punta fina por encima de la línea de sutura y utilice tijeras de primavera para cortar entre la línea de sutura y pinzas hemostáticas. Retire el tejido gástrico seccionado el campo quirúrgico estéril.</li></ol></li></ol>Utilice CTA para limpiar sangre y contenido de estómago.
		<li>Reforzar la aposición de las paredes gástricas con sutura absorbible de monofilamento 6-0 con una aguja cónica con un simple patrón discontinuo. Nota: Un patrón de sutura discontinua simple se recomienda ya que esto proporciona un cierre más seguro que el patrón de sutura continua simple.</li>
		<li>Eliminar el remanente gástrico con solución salina durante todo el procedimiento para mantener el tejido húmedo y limpio. Utilice una aguja de 20G por sonda nasogástrica conectada a una jeringa de 20 mL para realizar lavado gástrico con solución salina. Utilizar este tamaño para asegurar una presión adecuada se proporciona sin arriesgar daño tisular gástrica debido a una presión excesiva o daño accidental de tejido gástrico por el uso de una aguja punta normal.</li>
		<li>Utilizar un mínimo de 20 nudos para cerrar bien el estómago; prestar atención al cierre a lo largo del esófago, como este lado es más difícil acceder y por lo tanto es a menudo un sitio de la dehiscencia.</li>
		<li>Asegurarse que no hay fugas presionando suavemente sobre el estómago con CTAs. Si se identifican fugas, colocar nudos discontinuas simple adicionales en las áreas de fugas y fugas luego prueba otra vez. Prueba de fugas hasta que no se detecta ninguna fuga.</li>
		<li>Hacer un lavado minucioso final del estómago con al menos 60 mL de solución salina para asegurar que no hay partículas infecciosas ha quedado atrás.</li>
	
	
	<li>Coloque el estómago en la cavidad abdominal en el hígado mediante una CTA. Coloque la CTA a lo largo de la cara dorsal de la cavidad abdominal para absorber todo el líquido sobrante. Usando una aguja 18G embotada, inyectar solución de Ringer entibiada (LRS) con o sin antibióticos (0,5 mL LRS +/-20 mg/kg de enrofloxacina) directamente en la cavidad abdominal, justo antes de que cierre. Nota: Esto reemplaza experimentados durante la cirugía la pérdida de líquidos y proporciona un método para la aplicación directa de los antibióticos al sitio quirúrgico ayudar con la recuperación.</li>
	<li>Cerrar la capa de músculo abdominal con una aguja cónica en forma discontinua simple con sutura absorbible de monofilamento 6-0. Cerrar la capa de la piel con sutura absorbible de monofilamento 6-0 en un patrón continuo simple.</li>
	<li>Coloque el adhesivo tisular en la piel y doblar la piel sobre la línea de sutura a enterrar la sutura para que el ratón no puede interrumpir el cierre de la herida postoperatoriamente.</li>
	<li>Apague el isoflurano y deje el ratón recuperar en el cojín de calentamiento de 10-15 minbefore regresar a su jaula casera. No descuide el animal hasta que recuperó la conciencia y es capaz de moverse.</li>
	<li>Mantener animales alojados individualmente hasta que se recuperó completamente de la cirugía. Nota: Si precisa alimentos toma medidas son obtenidos a lo largo del estudio, ratones sigan alojados individualmente a lo largo del estudio. Existe un riesgo de obstrucción de cuerpo extraño de comer cama jaula casera. Animales deben ser ubicados en jaulas sin ropa de cama excepto material para proporcionar enriquecimiento de anidación (véase Tabla de materiales).</li>

3. medidas y cuidados ratón postoperatorio
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	<li>Retomar el ratón de su jaula casera y poner la jaula en una almohadilla de calefacción. Mantener los ratones en una dieta líquida durante al menos 7 días después de la cirugía. Administrar un analgésico, como el meloxicam (2 mg/kg por vía subcutánea), durante 2 días después de la cirugía. Nota: Puede administrarse un antibiótico, como la enrofloxacina (20 mg/kg), hasta 7 días después de la cirugía. Los antibióticos se dan para minimizar el riesgo de infección de la intervención quirúrgica y pueden o pueden no ser necesarios dependiendo del nivel de esterilidad que se mantuvo durante todo el procedimiento. Sin embargo, si se utilizan antibióticos, se debe administrar a todos los ratones en el mismo estudio para mantener la coherencia.</li>
	<li>Durante el período postoperatorio evaluar el peso corporal, alimentación, defecación, nivel de actividad y disposición al menos diariamente para asegurar la correcta cicatrización y recuperación. Realizar seguimiento postoperatorio durante 14 días después de la cirugía. Nota: Fracaso quirúrgico es considerado típicamente inmediatamente después de la cirugía o dentro de tres días posterior al operativo. Animales que no están comiendo o bebiendo en el segundo día después de la cirugía deben vigilarse de cerca para complicaciones quirúrgicas.</li>
	<li>Después de completar con éxito el período postoperatorio, medida cuerpo peso e ingesta de alimentos con regularidad a lo largo de estudio para garantizar el mantenimiento del fenotipo correspondiente.</li>
	<li>Realizar una prueba de tolerancia oral a la glucosa (OGTT) para evaluar la tolerancia a la glucosa, la secreción de insulina estimulada por glucosa y la secreción de hormonas de la tripa.
	<ol>
		<li>Realizar la OGTT en ratones después de un ayuno por 6 h y, a continuación, ratones de la sonda con solución dextrosa al 50% en una dosis de 1 g/kg.</li>
		<li>Recoger muestras de sangre de la cola en 0, 2.5, 5, 15, 30, 60 y 120 minutos después de la sonda. Medir la glucemia con un glucómetro en estos momentos. Recoger las muestras de suero en cada momento para la medición de varias hormonas, como insulina y GLP-1.</li>
		<li>Ratones rápidos para 6 h antes de la eutanasia. Realizar una medición de muestra y de la glucosa de sangre final. Comparar la medición de glucosa final a la medida de línea de base. Eutanasia a ratones con una inyección intraperitoneal de pentobarbital en dosis de 200 mg/kg.</li>
		<li>Utilice la línea de base y las muestras de suero final para medir analitos adicionales y comparar valores quirúrgicos previos y posoperatorios.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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	<li>Buchwald, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bariatric+surgery:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Bariatric surgery: a systematic review and meta-analysis.</a> JAMA. 292 (14), 1724-1737 (2004).</li><li>Wadden, T. A., Butryn, M. L., Byrne, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+lifestyle+modification+for+long-term+weight+control.">Efficacy of lifestyle modification for long-term weight control.</a> Obes Res. 12, 151s-162s (2004).</li><li>Yanovski, S. Z., Yanovski, J. 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An operation proves to be the most effective therapy for adult-onset diabetes mellitus.</a> Ann Surg. 222 (3), 339-350 (1995).</li><li>Garibay, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Cell+Glucagon-Like+Peptide-1+Receptor+Contributes+to+Improved+Glucose+Tolerance+After+Vertical+Sleeve+Gastrectomy.">beta-Cell Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Contributes to Improved Glucose Tolerance After Vertical Sleeve Gastrectomy.</a> Endocrinology. 157 (9), 3405-3409 (2016).</li><li>McGavigan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGR5+contributes+to+glucoregulatory+improvements+after+vertical+sleeve+gastrectomy+in+mice.">TGR5 contributes to glucoregulatory improvements after vertical sleeve gastrectomy in mice.</a> Gut. 66 (2), 226-234 (2017).</li><li>McGavigan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+sleeve+gastrectomy+reduces+blood+pressure+and+hypothalamic+endoplasmic+reticulum+stress+in+mice.">Vertical sleeve gastrectomy reduces blood pressure and hypothalamic endoplasmic reticulum stress in mice.</a> Dis Model Mech. 10 (3), 235-243 (2017).</li><li>Esteban Varela, J., Nguyen, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+sleeve+gastrectomy+leads+the+U.S.+utilization+of+bariatric+surgery+at+academic+medical+centers.">Laparoscopic sleeve gastrectomy leads the U.S. utilization of bariatric surgery at academic medical centers.</a> Surg Obes Relat Dis. 11 (5), 987-990 (2015).</li><li>Laferrere, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+weight+loss+by+gastric+bypass+surgery+versus+hypocaloric+diet+on+glucose+and+incretin+levels+in+patients+with+type+2+diabetes.">Effect of weight loss by gastric bypass surgery versus hypocaloric diet on glucose and incretin levels in patients with type 2 diabetes.</a> J Clin Endocrinol Metab. 93 (7), 2479-2485 (2008).</li><li>Adams, T. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FXR+is+a+molecular+target+for+the+effects+of+vertical+sleeve+gastrectomy.">FXR is a molecular target for the effects of vertical sleeve gastrectomy.</a> Nature. 509 (7499), 183-188 (2014).</li><li>Wilson-Perez, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+sleeve+gastrectomy+is+effective+in+two+genetic+mouse+models+of+glucagon-like+Peptide+1+receptor+deficiency.">Vertical sleeve gastrectomy is effective in two genetic mouse models of glucagon-like Peptide 1 receptor deficiency.</a> Diabetes. 62 (7), 2380-2385 (2013).</li><li>Pressler, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+sleeve+gastrectomy+restores+glucose+homeostasis+in+apolipoprotein+A-IV+KO+mice.">Vertical sleeve gastrectomy restores glucose homeostasis in apolipoprotein A-IV KO mice.</a> Diabetes. 64 (2), 498-507 (2015).</li></ol>

Los autores no declaran conflictos de interés, salvo el Dr. Cummings recibió fondos de Eli Lilly and Company.

La cirugía bariátrica es el tratamiento más efectivo a largo plazo para la obesidad y resulta en beneficios para la salud tales como altas tasas de tipo 2 diabetes y la hipertensión remisión1,9,15. Modelos murinos de la cirugía bariátrica proporcionan una potente herramienta con la que identificar los mecanismos por los cuales la cirugía bariátrica causa mejoras rápidas y pronunciadas en comorbilidades de la obesidad. ...

La epidemia de obesidad continúa creciendo en todo el mundo la cirugía bariátrica ha ganado popularidad como es el tratamiento más efectivo a largo plazo para la obesidad1. Por desgracia, la pérdida de peso por dieta y ejercicio es difícil de conseguir y relativamente ineficaz sobre el largo plazo2,3. Cirugía bariátrica, como la gastrectomía en manga vertical (VSG), se define como la manipulación del tracto gastrointestinal con el fin de1,de pérdida de peso4. Aunque la pérdida de peso es un resultado importante de la cirugía bariátrica, la cirugía bariátrica ofrece otros beneficios para la salud como la mejora de comorbilidades de la obesidad y extender la vida útil5. Por ejemplo, la cirugía bariátrica resulta en altas tasas de remisión de la diabetes tipo 2, hipertensión y reducciones en el riesgo del desarrollo de ciertos tipos de cáncer1,6,7. De la nota, el efecto de la cirugía bariátrica que causa remisión del tipo 2 diabetes y la hipertensión se observa a menudo pronto después de la cirugía y antes de la pérdida de peso8,9. Esto pone de relieve el concepto de que existen mecanismos independientes del peso corporal, contribuyendo a los beneficios de salud observados después de la cirugía. Modelos animales de la cirugía bariátrica se han desarrollado y se utilizan para estudiar los mecanismos por los cuales estos beneficios para la salud ocurren10,11,12.
Hemos validado un modelo de ratón de la VSG, que hemos aplicado a los varios modelos de ratón modificados genéticamente para estudiar los mecanismos por los cuales la cirugía bariátrica mejora comorbilidades de la obesidad como diabetes tipo 2, hipertensión y cáncer colorrectal10 , 11 , 12. roedores modelos permiten control más experimental y la capacidad para realizar la manipulación genética o la farmacia para definir el papel de genes específicos o vías de señalización de interés. Nos enfocamos principalmente en la VSG porque VSG es el procedimiento bariátrico más utilizado en la clínica en los Estados Unidos13. Además, la VSG es un simple modelo quirúrgico con menos modificaciones anatómicas en comparación con otros procedimientos como la desviación del puente o Biliopancreática gástrico Roux-en-Y.
Nuestro modelo de ratón de VSG recapitula los siguientes efectos de la cirugía bariátrica en los seres humanos: pérdida de peso, ingesta reducida de alimentos, regulación de la glucosa mejora, mejoró la función de los islotes pancreáticos, aumenta la secreción post-prandial glucagon-como peptide-1 (GLP-1), reduce la presión arterial y mayor circulación del ácido de bilis concentraciones10,11,12,13,14,15. Por lo tanto, se trata de un modelo ideal para estudiar el cuerpo peso dependientes e independientes mecanismos por los cuales VSG mejora o resuelve comorbilidades de la obesidad. Además, es un modelo fiable que puede combinarse con otros procedimientos quirúrgicos, lo que permite la investigación del impacto de la VSG en diversas condiciones de la enfermedad con mayor visión mecanicista12.

<table><tbody><tr><td>45% high fat diet</td><td>Research Diets</td><td>D12451</td><td></td></tr><tr><td>60% high fat diet</td><td>Research Diets</td><td>D12492</td><td></td></tr><tr><td>Boost</td><td>Nestle</td><td>160-67538</td><td>rich chocolate flavor</td></tr><tr><td>6-0 Suture</td><td>Ethicon</td><td>Z432</td><td>monofilament absorbable/taper</td></tr><tr><td>7-0 Suture</td><td>Covidien</td><td>8866127-01</td><td>monofilament absorbable/taper</td></tr><tr><td>Cotton Swabs</td><td>Fisherbrand</td><td>23-400-118</td><td>small</td></tr><tr><td>Cotton Swabs</td><td>Fisherbrand</td><td>233-400-101</td><td>large</td></tr><tr><td>Gauze</td><td>Various</td><td></td><td>4x4 4 ply and 2x2 4 ply</td></tr><tr><td>Foil</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgery drape</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.9% saline solution</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LRS</td><td>Hospira</td><td>170RX</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcohol</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eye Ointment</td><td>Paralube&amp;reg; Vet Ointment</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Adhesive</td><td>Vetbond</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam (Metacam)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>141-213</td><td>5 mg/ml</td></tr><tr><td>Enrofloxacin</td><td>Baytril</td><td>08713254-186599</td><td>22.7 mg/ml</td></tr><tr><td>Thin tipped hemostats</td><td>Fine Science Tools</td><td>13021-12</td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum Scissor</td><td>Fine Science Tools</td><td>14018-18</td><td></td></tr><tr><td>Iris Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Serrated Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11020-12</td><td></td></tr><tr><td>Gavage needle</td><td>Fine Science Tools</td><td>18060-20</td><td></td></tr><tr><td>Microneedle driver</td><td>Fine Science Tools</td><td>12075-14</td><td></td></tr><tr><td>Spring Scissor</td><td>Fine Science Tools</td><td>15396-00</td><td></td></tr><tr><td>Insulin syringe</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1mL syringe</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>20mL syringe</td><td>Various</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glucometer (one touch ultra mini)</td><td>Lifescan</td><td>70021208</td><td></td></tr><tr><td>Multiplex insulin and GLP-1 kit</td><td>Meso Scale Discovery</td><td>K15171C-1</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 6.00</td><td>GraphPad Software</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nestlets</td><td>Ancare</td><td>NES3600</td><td></td></tr></tbody></table>

a murine model of vertical sleeve gastrectomy

Cirugía bariátrica, como la gastrectomía en manga vertical (VSG), es una cirugía del tracto gastrointestinal que se realiza con el propósito de la pérdida de peso. La cirugía bariátrica es actualmente el tratamiento más efectivo a largo plazo para la obesidad. Además de pérdida de peso, cirugía bariátrica produce beneficios adicionales tales como la remisión de la diabetes tipo 2, la remisión de la hipertensión y disminución del riesgo de desarrollar ciertos tipos de cáncer. Los mecanismos más allá de la pérdida de peso de estos beneficios quedan incompletamente definidos. Por lo tanto, los modelos animales de la cirugía bariátrica están siendo desarrollados y validados para identificar los mecanismos que conducen a estos beneficios, con el objetivo de mejorar la comprensión de la fisiología gastrointestinal y la identificación de nuevas dianas terapéuticas. VSG se ha convertido en el procedimiento bariátrico más utilizado en la clínica en los Estados Unidos ya que es altamente eficaz en producir pérdida de peso y mejoría metabólica y es más sencillo de realizar que otros procedimientos bariátricos. Por lo tanto, hemos desarrollado y validado un modelo murino de VSG. Este modelo murino de VSG recapitula muchos de los efectos de la VSG en los seres humanos, incluyendo la regulación de glucosa y presión arterial mejorada. El método se basa en aislamiento del estómago, ligadura de vasos gástricos y la eliminación del 70% del estómago por transecting a lo largo de la curvatura mayor del estómago. Hemos aplicado con éxito este protocolo quirúrgico a diversas líneas de ratón modificado genéticamente para definir los mecanismos contribuyentes a los beneficios de la VSG. Además, este modelo murino de la VSG se ha combinado con otras técnicas quirúrgicas, para lograr la visión mecanicista más profunda. Por lo tanto, este es un modelo sencillo y versátil para el estudio de la fisiología gastrointestinal y los beneficios de la cirugía bariátrica.

El impostor y los procedimientos VSG son representados en la figura 1. Figura 1A se muestra en la línea de sutura se coloca a lo largo de las paredes gástricas durante el procedimiento simulado. Esta misma zona es donde se corta el estómago durante la cirugía de la VSG. Figura 1B muestra el remanente tubular del estómago izquierda después de la realización de la VSG.
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A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

A continuación describen los resultados de la gastrectomía en manga vertical en ratones. Se trata de un tipo de cirugía de pérdida de peso que consiste en la extracción de aproximadamente el 70% del estómago.

Un modelo murino de gastrectomía en manga Vertical

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. ...

a-murine-model-of-vertical-sleeve-gastrectomy

Research

JoVE Journal

Biology

11.1K vistas.  Cornell University. A continuación describen los resultados de la gastrectomía en manga vertical en ratones. Se trata de un tipo de cirugía de pérdida de peso que consiste en la extracción de aproximadamente el 70% del estómago.

Video: A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Murine Pancreatic Islet Isolation

Hi, I am Greg Zott. I'm with the UCSF Diabetes Center in the Bluestone Laboratory, and today I'm gonna show you the process for isolating mouse eyelets. The procedure involves the injection of a collagenase solution into the pancreas of a C3 H donor mouse, where we will then remove that pancreas, digest it away, purify the eyelets on a fial gradient, and then handpick them for ultimate transplant into the kidney capsule of a diabetic NOD mouse, Which will be our recipient.Before we start this procedure, we diluted our ATE solution in a modified Hanks buffer and we have adjusted the concentration specific for the strain of mouse that we're using the C3 H.We found digests better at a 0.8 mgs per mil collagenase solution, and we will use that to inject into the common bile duct to distend the pancreas.Performing. The procedure today Will be Pavo codre of the diabetes center. He will inject, open up the mouse, expose the the intestines, and then inject into the common bile duct.We will spray down the mouse with ethanol to keep the hair down, and then we will also verify that the mouse has been sacrificed properly with a toe pinch. Pavo will now open up the mouse and exposing the intestine and the pancreas with a midline incision. The diaphragm will also be cut to verify that the mouse will be sacrificed.Before we get started, I'd like to point out some of the important structures. The stomach is lying right here with the pancreas attached underneath into the duodenum and above. This is the liver where we'll find the gallbladder and the common bile duct, which you can see right here.So what Pavo will do next is he will isolate the small intestine, find where the common bile duct enters the small intestine. Once the intestine is exposed, we clamp on either side of the common bile duct with mosquito clamps. We find that this allows more collagenates to enter the pancreas while other groups try to direct the clamp on top of the common bile duct.We find that this is a better technique in allowing enzyme to enter the pancreas. This is a gentle procedure. You don't want to tear the bowel.You wanna allow the clamps to lie gently on either side of the common bile duct. Now we will find a gallbladder, and once the gallbladder's exposed, we will use that as a guide to injecting the collagenase into the common bile duct. Powell's using a 30 gauge needle with a five cc syringe containing three mills of collagenase solution.As he's entering the common bile duct, he's distending that duct with collagenase solution and then he travels down the common bile duct till he reaches near the intestine. And as he's going down, the enzyme solutions being pumped into the injected into the pancreas. Now that the pancreas is inflated with collagenase solution, Powell's gonna remove the hemostats and then remove the pancreas from the the mouse carefully tearing it away from the intestine.He removes it from the stomach. Okay, and then using the spleen as a handle, he lifts up the pancreas and then slowly snips it away in the common bile duct, and that's it. Pancreas is laid out and then the spleen is removed, and there he's removing the meso enteric tissue, and then the pancreas is placed in a two mill collagenase solution and a sterilized glass vial and it's placed back on Ice.The isolated pancreas that we put into the glass vials will now be placed into a 37 degree water bath for approximately 17 minutes. We placed them into a 50 mil conical rack so that they don't float up. Once during the bath, the timer starts and the digestion begins.Once the digestion time is completed, vials are removed, and then they are shaken and disrupted gently. And once the tissue starts falling apart, the vial is then placed on ice. A sterile screen is placed over a 400 mil beaker that contains washing buffer.The pancreas digest is then carefully poured over the screen into the wash buffer. For demonstration purposes, the hood has been turned off and the glass of the hood has been raised so we could see what we're doing. Once the pancreas digest is poured into the beaker, the vials are rinsed with the same washing buffer and the wash buffer placed over the screen.We have a syringe filled with washing buffer. We will use that to forcefully wash the tissue through the screen. The idea is to release any loose eyelets that are unattached to the matrix, but leaving the membranes and the undigested tissue on the screen.And when you're finished washing a tissue, this is what you usually See at the end of the procedure. The Pancreas tissue that's in the bottom of the tube will now be transferred to two 50 mil conical, and the tissue will be washed, the tissue's mixed evenly, and then distributed evenly so that we have a equal pellet volume in each tube. The beaker is now rinsed with more washing buffer.The sides are rinse so that you get all tissue that is entered the beaker again. Then it's equally distributed between each two, both 50 mil. Conical then are topped off with wash buffer.The tissue is inverted several times and then placed into a centrifuge. This is a quick spin. The centrifuge is allowed to reach a thousand RPM and then is turned off.The tissue at this time is very S eyelets are very sensitive, and you don't want to over compact them. The tubes are removed and we will do this wash step three more times. This is the end of the third wash.The components of the 50 mil conical tube are transferred to the 15 conical tube and centrifuge for a thousand RP M and then stopped. The supernat will be removed and the first part of the FI Call will be started. We are at the step where we Have our pelleted di pancreas digest.We'll resuspend that tissue so it's nice and loose to the pellets. We'll add the first density gradient, which is 1 1 0 8. We'll add five mils to each tube.The pellet is then mixed thoroughly in each of the gradients. It's important that you get good tissue distribution in your heaviest gradient. Now we will layer two mils of 1 0 9 6 density.We will then on top of that, layer two mils of 1 0 6 9 density, and then on top of that 1 0 3 7 density. It's important while you're layering the densities that you don't mix. Then all the layers have been added to the tube.And you can see this is the top of 1 1 0 8, the top of 9 1 0 9 6, the top of 1 0 6 9 and the top of 1 0 3 7. And you could see the tissue is already starting to move to its proper density even without centri fusion. The fial gradients are brought up to speed at 1800 RPM for 15 minutes, and remember to keep the brake off after the tubes are removed from the centrifuge.You can see between the 0 0 9 6 and 0 0 7 layer, there's a nice band of eyelet tissue Pablo's. Now removing the 0 3 7 layer to remove any tissue debris and DNA that might have been released during the processing. Using a sterile plastic pasture pipette, he will now remove the islet layer and transfer them to a 50 mil conical containing 25 mils of wash buffer.You want do this step quickly because fol is toxic to eyelets. We actually removed the entire 0 6 9 and 0 9 6 layer. Pavo cuts the top of the plastic pasture pipette and rinses it with wash buffer.The eyelets are then centrifuge like we centrifuge previously. Centrifuge is brought up to a Thousand RPM and then we stop it and We aspirate off. The supernatant eyelets will be washed three times with wash media.So we just completed the eyelid Isolation process we took from the digest to the fol gradient to the purified eyelets after our third wash with wash buffer, we resuspended the eyelets in our RPMI media and we played it in a tissue culture plate. These eyelets are now ready for in vitro assays or in vivo preps like eyelet Transplant.

Páncreas murino aislamiento Islet

Investigación

Biología

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Modelo murino de isquemia Miembro Posterior

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Murine Renal Transplantation Procedure

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell et al over 30 years ago (1) and refined by Zhang et al years later (2), few people in the world have mastered this procedure. In our laboratory we have successfully performed 1200 orthotopic kidney transplantations with &gt; 90% survival rate. The key points for success include stringent control of reperfusion injury, bleeding and thrombosis, both during the procedure and post-transplantation, and use of 10-0 instead of 11-0 suture for anastomoses.
Post-operative care and treatment of the recipient is extremely important to transplant success and evaluation. All renal graft recipients receive antibiotics in the form of an injection of penicillin immediately post-transplant and sulfatrim in the drinking water continually. Overall animal health is evaluated daily and whole blood creatinine analyses are performed routinely with a portable I-STAT machine to assess graft function.

Renal transplantation in mice is a technically challenging procedure that requires careful post-operative care and treatment for success.

Procedimiento murino Trasplante Renal

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Murine Model for Parkinson's Disease: from 6-OH Dopamine Lesion to Behavioral Test

Parkinson's disease (PD) affects at least 6.5 million people worldwide, irrespective of gender, social, ethnic, economic, or geographic boundaries. Key symptoms, such as tremor, rigidity and bradikinesia, develop when about 3/4 of dopaminergic cells are lost in the substantia nigra, and fail to provide for the smooth, coordinated regulation of striatal motor circuits. Depression and hallucinations are common, and dementia eventually occurs in 20% of patients. At this time, there is no treatment to delay or stop the progression of PD. Rather, the medications currently available aim more towards the alleviation of these symptoms. New surgical strategies may reversibly switch on the functionally damaged circuits through the electrical stimulation of deep brain structures, but although deep brain stimulation is a major advance, it is not suitable for all patients. It remains therefore necessary to test new cell therapy approaches in preclinical models.
Selective neurotoxic disruption of dopaminergic pathways can be reproduced by injection of 6-hydroxydopamine (6-OHDA) or MPTP (1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tertahydropyridine) whereas depleting drugs and oxidative-damaging chemicals may also reproduce specific features of PD in rodents. Unlike MPTP, 6-OHDA lesions cause massive irreversible neuronal loss, and can be uni- or bilateral. The 6-OHDA lesion model is reliable, leads to robust motor deficits, and is the most widely used after 40 years of research in rats1. As interactions between grafted cells and host can now be studied more thoroughly in mice rather than in rats, the model has been transposed to mice2,3, where it has been recently characterized4.
In this video, we demonstrate how to lesion the left nigro-striatal pathway of anesthetized mice by slowly delivering 2.0 &mu;L of 6-OHDA through a stereotaxically inserted micro-syringe needle. The loss of dopaminergic input occurs within days, and the functional impairments can be monitored over post-operative weeks and months by rating animal rotations induced by dopaminergic agents5. Here, we show full-body contralateral rotations occurring 10 minutes after a single subcutaneous administration of apomorphine, measured one month after the lesion. Outcomes and drawbacks are discussed below.

Parkinson disease is caused by loss of dopaminergic innervation to the striatum, which can be experimentally induced by 6-OH-dopamine. We describe how to perform a stereotaxic lesion and to monitor apomorphine-induced rotational behavior in mice. This model is useful and reliable for testing new therapies for Parkinson disease.

Modelo murino de enfermedad de Parkinson: de la lesión 6-OH dopamina a prueba de comportamiento

Parkinson's disease (PD) affects at least 6.5 million people worldwide, irrespective of gender, social, ethnic, economic, or geographic boundaries. Key ...

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes in myocardial ischemia and to develop and optimize future treatment.
Two different methods of creating myocardial ischemia are performed in laboratory rodents. The first method is to create cryo infarction, a fast but inaccurate technique, where a cryo-pen is applied on the surface of the heart (1-3). Using this method the scientist can not guarantee that the cryo-scar leads to ischemia, also a vast myocardial injury is created that shows pathophysiological side effects that are not related to myocardial infarction. The second method is the permanent ligation of the left anterior descending artery (LAD). Here the LAD is ligated with one single stitch, forming an ischemia that can be seen almost immediately. By closing the LAD, no further blood flow is permitted in that area, while the surrounding myocardial tissue is nearly not affected. This surgical procedure imitates the pathobiological and pathophysiological aspects occurring in infarction-related myocardial ischemia.
The method introduced in this video demonstrates the surgical procedure of a mouse infarction model by ligating the LAD. This model is convenient for pathobiological and pathophysiological as well as immunobiological studies on cardiac infarction. The shown technique provides high accuracy and correlates well with histological sections.

This video demonstrates how to use a fast and reliable model to study pathobiological and pathophysiological processes of myocardial ischemia.

LAD-Ligadura: un modelo murino de infarto de miocardio

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

Techniques of Sleeve Gastrectomy and Modified Roux-en-Y Gastric Bypass in Mice

Obesity is a major public health issue, with a prevalence of 4 to 28% for men and 6.2 to 36.5% for women in Europe (from 2003 to 2008). Morbid obesity is frequently associated with metabolic complications, such as type 2 diabetes, hypertension, and dyslipidemia, reducing life expectancy and quality. In the absence of any effective noninvasive treatments, bariatric surgery is a valuable therapeutic option for patients with morbid obesity (body mass index (BMI) &#62;40 kg/m2), leading to long-term, sustained weight loss and improvements in metabolic complications. However, the underlying cellular and molecular mechanisms sustaining the beneficial effects of bariatric surgery are not yet fully understood. Due to the numerous genetically-modified strains available, the mouse model is the most convenient animal model to explore the molecular mechanisms behind the pleiotropic beneficial effects of bariatric surgeries. Here, we detailed the optimized healthcare methods and surgical protocols in mice for the two most widely-used bariatric surgeries: the sleeve gastrectomy and the modified Roux-en-Y gastric bypass. Deciphering the molecular mechanisms underlying the therapeutic effects of bariatric surgeries offers the promise of identifying new therapeutics targets.

Bariatric surgery is the most efficient way to reduce body weight and the deadly metabolic complications (diabetes, obesity, and dyslipidemia) frequently associated with morbid obesity. Mouse models of bariatric surgery represent a unique asset for deciphering molecular mechanisms behind the beneficial effects of these surgeries on diabetes, hypertension, and dyslipidemia.

Técnicas de Manga Gástrica y modificación de Roux-en-Y bypass gástrico en ratones

Obesity is a major public health issue, with a prevalence of 4 to 28% for men and 6.2 to 36.5% for women in Europe (from 2003 to 2008). Morbid obesity is ...

Medicina

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and the control of gene transcription in the cell nucleus. The kindlins are ~75 kDa multidomain proteins and bind to an NPxY motif and upstream T/S cluster of the integrin &#946;-subunit cytoplasmic tail. The hematopoietically-important kindlin isoform, kindlin-3, is critical for platelet aggregation during thrombus formation, leukocyte rolling in response to infection and inflammation and osteoclast podocyte formation in bone resorption. Kindlin-3&#39;s role in these processes has resulted in extensive cellular and physiological studies. However, there is a need for an efficient method of acquiring high quality milligram quantities of the protein for further studies. We have developed a protocol, here described, for the efficient expression and purification of recombinant murine kindlin-3 by use of a baculovirus-driven expression system in Sf9 cells yielding sufficient amounts of high purity full-length protein to allow its biophysical characterization. The same approach could be taken in the study of the other mammalian kindlin isoforms.

Kindlins are fundamental to cell adhesion through integrins but studies of them have been hampered by the difficulty encountered in expressing them recombinantly in bacterial hosts. We describe here methods for their efficient production in baculovirus-infected insect cells.

Producción eficiente y purificación de recombinante murino kindlin-3 a partir de células de insecto para estudios biofísicos

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Sleeve Gastrectomy in Mice using Surgical Clips

The number of people who are overweight and obese is continually increasing both in the adult and adolescent populations. This coincides with the increased universal phenomenon of type 2 diabetes (T2D) and other metabolic problems. Bariatric surgery, such as SG, is currently one of the most effective and commonly used long-term treatment for obesity and T2D, but the association between them is not completely explored yet. The mechanisms underlying the outcomes seen after bariatric surgery in humans can be investigated based on preclinical animal studies. The SG reduces body weight, glucose levels and many metabolic parameters, and is easy to perform with a low incidence of complications. The goal of this work is to provide a simple method and an uncomplicated preclinical model of bariatric surgery in animals for researchers.

The prevalence of diabetes and obesity is continuously increasing worldwide. The mechanisms between diabetes, obesity and their associated mortality and co-morbidities need to be further investigated. Here, we present a protocol for sleeve gastrectomy (SG) in animals as an uncomplicated preclinical model of bariatric surgery.

Gastrectomía de manga en ratones usando clips quirúrgicos

The number of people who are overweight and obese is continually increasing both in the adult and adolescent populations. This coincides with the ...

Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes mellitus, dyslipidemia, non-alcoholic steatohepatitis, cardiovascular events, and cancers) through restrictive and malabsorptive mechanisms. Understanding the mechanisms by which these procedures allow such improvements often require their transposition into animals, especially in mice, because of the ease of generating genetically modified animals. Recently, the single-anastomosis duodeno-ileal bypass with sleeve gastrectomy (SADI-S) has emerged as a procedure that uses both restrictive and malabsorptive effects, which is being used as an alternative to gastric bypass in case of major obesity. Thus far, this procedure has been associated with strong metabolic improvements, which has led to a marked increase in its use in daily clinical practice. However, the mechanisms underlying these metabolic effects have been poorly studied as a result of a lack of animal models. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice, with a special focus on perioperative management. The description and use of this new rodent model will be helpful for the scientific community to better understand the molecular, metabolic, and structural changes induced by the SADI-S and to better define the surgical indications for clinical practice.

Single-anastomosis duodeno-ileal bypass (SADI-S) is an emerging bariatric procedure with important metabolic effects. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice.

Bypass duodeno-ileal de anastomosis única con modelo de gastrectomía en manga en ratones

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes ...

Murine Vertical Sleeve Gastrectomy: A Surgical Procedure to Downsize Stomach in Experimental Mouse Models

Source: Garibay, D., Cummings, B. P. <a href="https://www.jove.com/video/56534" target="_blank">A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy.</a> J. Vis. Exp. (2017)
In this video, a vertical sleeve gastrectomy procedure is performed on an experimental mouse model. This procedure helps remove a significant portion of the stomach along its greater curvature.

Gastrectomía vertical murina en manga: un procedimiento quirúrgico para reducir el tamaño del estómago en modelos experimentales de ratón

Source: Garibay, D., Cummings, B. P. A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy. J. Vis. Exp. (2017)
In this video, a vertical sleeve gastrectomy ...