Diese Forschung wurde von NIH/NCI R21CA195002-01A1, der Präsident des Rates der Cornell Frauen und SUNY Graduate Vielfalt Fellowship unterstützt. Dr. Cummings Labor erhielt auch Finanzierung während der Projektlaufzeit vom Cornell vergleichende Krebs-Biologie-Trainingsprogramm und Eli Lilly and Company.

Alle experimentelle Protokolle wurden von der Cornell University institutionelle Animal Care und Use Committee genehmigt.
1. präoperative Vorbereitung
Hinweis: Studie Mäuse sind in der Regel auf einem C57BL Diät-induzierten fettleibig Hintergrund Studien translationally für menschliche Übergewicht und Insulinresistenz relevant zu machen. Männlichen und weibliche Mäusen können untersucht werden, wie in den nachfolgenden Schritten beschrieben.
<ol>
	<li>Legen Sie in einem Alter von 2 Monaten Mäuse auf eine 45 % bzw. 60 % fettreiche Ernährung für 2 Monate (siehe Tabelle der Materialien). Hinweis: Mäuse werden gefüttert, eine fettreiche Diät um eine übergewichtige und Insulin resistent Phänotyp zu erstellen. Kürzere oder längere Zeit der fettreiche Ernährung Fütterung können abhängig von den Zielen der Studie verwendet werden.</li>
	<li>Mäusen füttern weiterhin Ad Libitum bis Chirurgie. Wenn Basisberechnungen benötigt werden, nach 7 Wochen von fettreichen Ernährung Fütterung, schnelle Mäuse für 6 h oder über Nacht und nehmen eine Basislinie Blutprobe für die Messung von Metaboliten von Interesse (z. B. Glukose).</li>
	<li>Weiter Mäuse auf fettreiche Ernährung und erlauben Mäuse eine Woche um nach der Blutentnahme vor Schein Chirurgie oder VSG zu erholen. Legen Sie Mäuse auf eine Flüssigkeit Ernährung (siehe Tabelle der Materialien) für 4 Tage vor der Operation. Hinweis: Mäuse bestehen auf eine flüssige Ernährung vor und nach der Operation, den Verdauungstrakt von Feinstaub zu löschen, die den Heilungsprozess beeinträchtigen können.</li>
	<li>Die folgenden Elemente vor der Operation sterilisieren: Folie, Gaze, Baumwolle kippte Applikatoren (CTAs) und chirurgische Instrumente (Gefäßklemme, Betrieb, Schere, Iris-Schere, Dumont Forcep gezahnt Brown-Adson Forcep, Magensonde Nadel, Microneedle Fahrer, Feder-Schere ).</li>
</ol>
2. vertikale Sleeve-Gastrektomie und Sham-Verfahren
<ol>
	<li>Am Tag der Operation wiegen Mäuse um eine Basismessung Gewicht zu erhalten.</li>
	<li>OP mit ein Anästhesiesystem, beheizten Wasserbad und Heizkissen auszustatten. Das Wasserbad auf 37 ° C eingestellt, und verwenden Sie es um 0,9 % Kochsalzlösung für die Bewässerung zu wärmen. Reinigen Sie das OP-Feld mit 70 % Ethanol und sterilen Technik autoklaviert Chirurgie Pack und Tools öffnen. Hinweis: Das Heizkissen wird verwendet, um das Tier warm zu halten während der Operation und Genesung von Anästhesie.</li>
	<li>Verwenden eine Induktion-Kammer, betäuben Sie die Maus mit 5 % Isofluran und O2 Durchfluss von 1 L/min bestätigen, das die Maus in die entsprechende Ebene der Narkose durch Ausführen einer Zehe-Klemme. Pflegen Sie die Maus mit 1-3 % Isofluran und eine O-2 -Durchflussmenge von 0,6 L/min, sobald eine einheitliche Ebene der Anästhesie erreicht worden ist.</li>
	<li>Sobald die Maus betäubt ist, legen Sie Augensalbe (siehe Tabelle der Materialien) auf ihre Augen um sie feucht zu halten während der Operation. Zu diesem Zeitpunkt auch verabreichen ein Schmerzmittel, wie z.B. Meloxicam (2 mg/kg subkutan). Schneiden Sie das Haar von den Nabel der Axilla gedrückt halten die Haut sanft an um Spannung zu bieten.
	<ol>
		<li>Wie die Maus Haut dünn und zart ist, achten Sie darauf, keine Hautveränderungen verursachen, wenn die Haare abschneiden. Reinigen Sie die Haut mit Povidon-Jod und Alkohol.</li>
		<li>Sterile Handschuhe Don und bereiten die sterile OP-Feld und Instrumente. Führen Sie den Rest des Verfahrens mit steriler Technik. Bereiten Sie die sterile OP-Feld, indem sterilen OP-Tüchern auf beiden Seiten der Maus. Verwenden Sie autoklaviert Alufolie zum Erstellen einer chirurgischen drapieren für die Maus.</li>
		<li>Schneiden Sie ein kleines Loch in die Alufolie Zugriff auf die Maus Bauch.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Machen Sie einen Schnitt der Haut aus der Mitte des Bauches (Nabel) auf das Niveau von xiphoid Knorpel mit einer Iris-Schere. Identifizieren der Linea Alba und Nutzung Iris Schere durchschneiden die Körperwand entlang der Linea Alba. CTAs können Sie den Magen aus dem Bauch sanft zu erheben und dann unverblümt sezieren die großen Omentum aus größerer Krümmung des Magens.</li>
	<li>Verbinden Sie die kurze gastrische Arterie, die zwischen der Fundus des Magens und der Milz verläuft, indem man zwei Ligaturen mit 7: 0 Monofile resorbierbaren Naht. Verwenden Sie Frühling-Schere zum Schneiden zwischen zwei Ligaturen. Sobald die Arterie durchtrennten ist, voll exteriorize den Magen aus der Bauchhöhle. Legen Sie die Gaze unter dem Bauch und nass mit Kochsalzlösung, das Gewebe feucht zu halten.</li>
	<li>Sham-Verfahren
	<ol>
		<li>Für die Farce-Prozedur Platzieren einer Lose einfache kontinuierliche Anordnung von Naht mit 6-0 Monofile resorbierbaren Naht mit einer konischen Nadel. Beginnen Sie 2 mm nach rechts (des Chirurgen rechts) der Speiseröhre. Legen Sie die Naht Linie entlang der ventralen Magen Wand und dann weiter entlang der dorsalen Magen Wand. Hinweis: Für alle Magen-Manipulationen, verwenden Sie nur Monofile resorbierbarem Nahtmaterial, um das Risiko einer Infektion zu verringern. Darüber hinaus nutzen Sie nur Naht mit einer konischen Nadel für alle Magen-Manipulationen, wie Verwendung einer Nadel schneiden das Risiko von Naht "durchziehen erhöht" führt zu Magen Gewebeschäden und Dehiszenz gewickelt.</li>
		<li>Führen Sie die Nadel vollständig durch einen Magen Wand während des Einsetzens der Naht. Stellen Sie sicher die Naht flach ist, aber den Magen nicht zu beschränken. Sanft binden Sie die Naht mit 3-4 Würfe zu und überspringen Sie Schritt 2,9.</li>
		<li>Überspringen Sie für die VSG-Prozedur Schritt 2.7 und fahren Sie mit Schritt 2,8.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>VSG-Verfahren
	<ol>
		<li>Verbinden Sie für die VSG-Verfahren die prominenten Zweige der gastrische Arterie und Vene mit 7: 0 Monofile resorbierbaren Naht mit einer konischen Nadel mit 3 für jeden Knoten wirft. Legen Sie den Ligaturen nur unten (d. h.in Richtung der geringeren Krümmung des Magens) der vorgesehenen Linie der Durchtrennung. Hinweis: Die vorgesehene Linie der Durchtrennung beginnt bei ~ 2 mm oben (d. h. in Richtung größerer Krümmung des Magens) die kardiale Kerbe des Magens und mindestens 2 mm unterhalb der Margo Pilcatus und erstreckt sich auf das proximale Ende der Rechte Lappen der Bauchspeicheldrüse. In der Regel gibt es 4 Schiffe pro Magen Wand, die ligiert werden müssen; Dies kann jedoch variieren zwischen Mäusen.</li>
		<li>Um Verschütten des Mageninhalts während der Gastrektomie zu vermeiden, legen Sie eine einfache durchgehende Linie der Naht durch beide Magen Wände unterhalb der vorgesehenen Linie der Durchtrennung mit 6-0 Monofile resorbierbaren Naht mit einer konischen Nadel. Beginnen Sie die Naht-Linie, der Chirurg rechts der Speiseröhre und unterhalb der Margo Pilcatus und Ende oberhalb der Bauchspeicheldrüse.</li>
		<li>Legen Sie dünne Spitze Futterzange oberhalb der Naht Linie und verwenden Sie Feder Schere, um zwischen der Naht Linie und Futterzange geschnitten. Entfernen Sie die durchtrennten Magen Gewebe aus der sterilen OP-Feld.</li></ol></li></ol>Verwenden Sie CTAs, um Blut und Futterbrei aus dem Magen zu reinigen.
		<li>Apposition der Magen Wände mit 6-0 Monofile resorbierbaren Naht mit einer konischen Nadel mit einem einfachen diskontinuierliche Muster zu verstärken. Hinweis: Eine einfache diskontinuierliche Naht Muster wird empfohlen, da dadurch sicherer Verschluss als das einfache kontinuierliche Naht Muster.</li>
		<li>Spülen Sie den Magen Überrest mit Kochsalzlösung während des Verfahrens um das Gewebe feucht und sauber zu halten. Verwenden Sie eine 20G Magensonde Nadel eine 20-mL-Spritze um Magenspülung mit Kochsalzlösung durchzuführen. Verwenden Sie diese Größe, um sicherzustellen, dass ausreichend Druck zur Verfügung gestellt wird, ohne zu riskieren, gastrische Gewebeschädigung vor Überdruck oder versehentliche Magen Gewebeschäden durch Verwendung einer regelmäßigen spitzen Nadel.</li>
		<li>Verwenden Sie ein Minimum von 20 Knoten, um sicher den Magen schließen; Achten Sie auf Schließung entlang der Speiseröhre, als diese Seite mehr schwer zugänglich und daher oft ein Ort der Dehiszenz ist.</li>
		<li>Sicherstellen Sie, dass keine Lecks durch leichtes Drücken auf den Magen mit CTAs vorhanden sind. Wenn Undichtigkeiten festgestellt werden, legen Sie zusätzliche einfache diskontinuierliche Knoten auf den Gebieten der Leckage und dann Leck Test wieder. Dichtheitsprüfung bis keine Leckage erkannt wird.</li>
		<li>Machen Sie eine letzte gründliche Lavage des Magens mit mindestens 60 mL Kochsalzlösung um sicherzustellen, dass keine infektiöse Partikel zurückgelassen worden.</li>
	
	
	<li>Platzieren Sie den Magen wieder in die Bauchhöhle unter der Leber mit einem CTA. Platzieren Sie CTAs entlang der dorsalen Aspekt der Bauchhöhle, alle überschüssigen Flüssigkeit zu absorbieren. Mit einer stumpfen Nadel 18G, injizieren Sie gesäugt Ringer-Lösung (LRS) mit oder ohne Antibiotika (0,5 mL LRS + /-20 mg/kg Enrofloxacin) direkt in die Bauchhöhle, kurz vor der Schließung. Hinweis: Ersetzt Flüssigkeitsverlust während der Operation erfahren und stellt eine Methode für die direkte Anwendung von Antibiotika an der Operationsstelle, mit Erholung zu unterstützen.</li>
	<li>Schließen Sie die Bauchmuskel-Schicht mit 6-0 Monofile resorbierbaren Naht mit einer konischen Nadel in ein einfaches diskontinuierliche Muster. Schließen Sie dann die Hautschicht mit 6-0 Monofile resorbierbaren Naht in einem einfachen kontinuierlichen Muster.</li>
	<li>Gewebe-Klebeband auf die Haut legen und Falten der Haut über der Naht Linie, um die Naht zu begraben, so dass die Maus den Wundverschluss postoperativ stören kann nicht.</li>
	<li>Schalten Sie die Isofluran aus und lassen Sie die Maus auf das Heizkissen für 10-15 Minbefore wieder in seine Heimat Käfig zu erholen. Nicht unbeaufsichtigt lassen das Tier bis es hat wieder zu Bewusstsein und kann sich bewegen.</li>
	<li>Halten Sie Tiere einzeln untergebracht, bis vollständig von der Operation erholt. Hinweis: Wenn genaue Essen Aufnahme Messungen in der gesamten Studie einzuholen sind, sollten Mäuse weiterhin in der gesamten Studie einzeln untergebracht werden. Besteht die Gefahr des Fremdkörpers verhindert Essen nach Hause Käfig Einstreu. Tiere in Käfigen Bettwäsche mit Ausnahme der Verschachtelung Material um Bereicherung bieten kostenlos untergebracht werden sollte (siehe Tabelle der Materialien).</li>

3. postoperative Maus Pflege und Messungen
<ol>
	<li>Die Maus zu seinem Hause Käfig zurück und legen Sie den Käfig auf ein Heizkissen. Pflegen Sie Mäuse auf eine flüssige Diät für mindestens 7 Tage nach der Operation. Analgetikum, z. B. Meloxicam zu verwalten (2 mg/kg subkutan), für 2 Tage nach der Operation. Hinweis: Ein Antibiotikum wie Enrofloxacin (20 mg/kg), kann für bis zu 7 Tage nach der Operation gegeben werden. Antibiotika werden gegeben, um das Risiko einer Infektion durch den chirurgischen Eingriff zu minimieren und möglicherweise oder möglicherweise nicht abhängig von der Höhe der Sterilität während des gesamten Verfahrens erforderlich. Jedoch wenn Antibiotika verwendet werden, müssen sie alle Mäuse in der gleichen Studie auf ihre Kohärenz verabreicht werden.</li>
	<li>Während der postoperativen Phase beurteilen Sie, Körpergewicht, Nahrungsaufnahme, Stuhlgang, Aktivitätsgrad und Neigung mindestens einmal täglich zu richtigen Heilung und Erholung zu gewährleisten. Durchführen Sie postoperative Kontrollen für 14 Tage nach der Operation. Hinweis: Chirurgische Fehler wird in der Regel unmittelbar nach der Operation oder innerhalb von drei Tagen Post-operativ gesehen. Tiere, die nicht essen oder trinken am zweiten Tag nach der Operation, müssen für chirurgische Komplikationen engmaschig überwacht werden.</li>
	<li>Messen Sie nach erfolgreichem Abschluss der postoperativen Phase Körper Gewicht und Nahrungsaufnahme regelmäßig in der gesamten Studie zur Erhaltung der entsprechenden Phänotyp zu gewährleisten.</li>
	<li>Durchführen Sie einer oralen Glukosetoleranztest (OGTT) Glukosetoleranz, Glukose-stimulierten Insulinsekretion, bewerten und ausnehmen Sie Hormonausschüttung.
	<ol>
		<li>Durchführen der OGTT bei Mäusen nach dem Fasten Sie für 6 h und dann Magensonde Mäuse mit 50 % Traubenzucker-Lösung in einer Dosis von 1 g/kg.</li>
		<li>Tail Blutproben bei 0, 2,5, 5, 15, 30, 60 und 120 Minuten nach der Magensonde zu sammeln. Messen des Blutzuckers mit einem Blutzuckermessgerät zu diesen Zeitpunkten. Sammeln Sie Serumproben zu jedem Zeitpunkt zur Messung verschiedener Hormone, wie Insulin und GLP-1.</li>
		<li>Schnelle Mäuse für 6 h vor der Euthanasie. Nehmen Sie eine endgültige Blut Probe und Glukose-Messung. Vergleichen Sie die endgültige Glukose Messung der Baseline-Messung. Einschläfern Sie Mäuse mit einer intraperitoneale Injektion von Pentobarbital bei einer Dosis von 200 mg/kg.</li>
		<li>Verwenden Sie die Grundlinie und endgültige Serumproben zusätzliche Analyten messen und vergleichen Prä- und postoperative chirurgische Werte.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Buchwald, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bariatric+surgery:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Bariatric surgery: a systematic review and meta-analysis.</a> JAMA. 292 (14), 1724-1737 (2004).</li><li>Wadden, T. A., Butryn, M. L., Byrne, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+lifestyle+modification+for+long-term+weight+control.">Efficacy of lifestyle modification for long-term weight control.</a> Obes Res. 12, 151s-162s (2004).</li><li>Yanovski, S. Z., Yanovski, J. 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An operation proves to be the most effective therapy for adult-onset diabetes mellitus.</a> Ann Surg. 222 (3), 339-350 (1995).</li><li>Garibay, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Cell+Glucagon-Like+Peptide-1+Receptor+Contributes+to+Improved+Glucose+Tolerance+After+Vertical+Sleeve+Gastrectomy.">beta-Cell Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Contributes to Improved Glucose Tolerance After Vertical Sleeve Gastrectomy.</a> Endocrinology. 157 (9), 3405-3409 (2016).</li><li>McGavigan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGR5+contributes+to+glucoregulatory+improvements+after+vertical+sleeve+gastrectomy+in+mice.">TGR5 contributes to glucoregulatory improvements after vertical sleeve gastrectomy in mice.</a> Gut. 66 (2), 226-234 (2017).</li><li>McGavigan, A. 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T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+sleeve+gastrectomy+leads+the+U.S.+utilization+of+bariatric+surgery+at+academic+medical+centers.">Laparoscopic sleeve gastrectomy leads the U.S. utilization of bariatric surgery at academic medical centers.</a> Surg Obes Relat Dis. 11 (5), 987-990 (2015).</li><li>Laferrere, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+weight+loss+by+gastric+bypass+surgery+versus+hypocaloric+diet+on+glucose+and+incretin+levels+in+patients+with+type+2+diabetes.">Effect of weight loss by gastric bypass surgery versus hypocaloric diet on glucose and incretin levels in patients with type 2 diabetes.</a> J Clin Endocrinol Metab. 93 (7), 2479-2485 (2008).</li><li>Adams, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Health+benefits+of+gastric+bypass+surgery+after+6+years.">Health benefits of gastric bypass surgery after 6 years.</a> Jama. 308 (11), 1122-1131 (2012).</li><li>McGavigan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGR5+contributes+to+glucoregulatory+improvements+after+vertical+sleeve+gastrectomy+in+mice.">TGR5 contributes to glucoregulatory improvements after vertical sleeve gastrectomy in mice.</a> Gut. , (2015).</li><li>Peterli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+glucose+metabolism+after+bariatric+surgery:+comparison+of+laparoscopic+Roux-en-Y+gastric+bypass+and+laparoscopic+sleeve+gastrectomy:+a+prospective+randomized+trial.">Improvement in glucose metabolism after bariatric surgery: comparison of laparoscopic Roux-en-Y gastric bypass and laparoscopic sleeve gastrectomy: a prospective randomized trial.</a> Ann Surg. 250 (2), 234-241 (2009).</li><li>Ryan, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FXR+is+a+molecular+target+for+the+effects+of+vertical+sleeve+gastrectomy.">FXR is a molecular target for the effects of vertical sleeve gastrectomy.</a> Nature. 509 (7499), 183-188 (2014).</li><li>Wilson-Perez, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+sleeve+gastrectomy+is+effective+in+two+genetic+mouse+models+of+glucagon-like+Peptide+1+receptor+deficiency.">Vertical sleeve gastrectomy is effective in two genetic mouse models of glucagon-like Peptide 1 receptor deficiency.</a> Diabetes. 62 (7), 2380-2385 (2013).</li><li>Pressler, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+sleeve+gastrectomy+restores+glucose+homeostasis+in+apolipoprotein+A-IV+KO+mice.">Vertical sleeve gastrectomy restores glucose homeostasis in apolipoprotein A-IV KO mice.</a> Diabetes. 64 (2), 498-507 (2015).</li></ol>

Die Autoren erklären keine Interessenkonflikte, außer Dr. Cummings finanziell unterstützt von Eli Lilly and Company.

Adipositaschirurgie ist die effektivste langfristige Behandlung von Adipositas und andere gesundheitliche Vorteile wie hohe Raten von Typ 2 Diabetes und Bluthochdruck Remission1,9,15führt. Murine Modelle der bariatrischen Chirurgie bieten ein leistungsfähiges Werkzeug, um die Mechanismen zu identifizieren, durch die Adipositaschirurgie schnelle und deutliche Verbesserungen in Folgeerkrankungen der Adipositas verursacht. Darüb...

Da die Adipositas-Epidemie weltweit wächst hat Adipositaschirurgie Popularität gewonnen, da es die effektivste langfristige Behandlung für Adipositas1ist. Leider ist Gewichtsabnahme durch Diät und Bewegung schwer zu erreichen und relativ erfolglos über die langfristige2,3. Bariatrische Chirurgie, wie vertikale Sleeve-Gastrektomie (VSG) ist definiert als die Manipulation des Gastrointestinaltraktes zum Zwecke der Gewicht-Verlust-1,-4. Obwohl Gewichtsverlust ein prominenter Ergebnis der Adipositaschirurgie ist, bietet bariatrischer Chirurgie andere gesundheitliche Vorteile wie Fettleibigkeit Komorbiditäten zu verbessern und die Lebensdauer5Erweiterung. Zum Beispiel führt Adipositaschirurgie hohe Raten der Remission von Typ-2-Diabetes und Bluthochdruck und Reduzierung der Lebensdauer Risiko für die Entwicklung bestimmter Arten von Krebs1,6,7. Der Hinweis ist die Wirkung der Adipositaschirurgie Remission der Typ-2-Diabetes und Bluthochdruck verursachen oft bald nach der Operation und vor der Gewicht-Verlust-8,9beobachtet. Dies unterstreicht das Konzept, dass Mechanismen unabhängig vom Körpergewicht einen Beitrag zu den Nutzen für die Gesundheit nach der Operation beobachtet. Tiermodelle der bariatrischen Chirurgie entwickelt worden und werden genutzt, um die Mechanismen zu studieren, mit denen diese gesundheitlichen Vorteile10,11,12auftreten.
Wir haben ein Maus-Modell der VSG, validiert die wir, zu verschiedenen gentechnisch veränderten Mausmodellen beantragt haben, die Mechanismen zu studieren, durch die Adipositaschirurgie Adipositas Begleiterkrankungen wie Diabetes Typ 2, Bluthochdruck und Darmkrebs10 verbessert , 11 , 12. Nagetier-Modelle ermöglichen experimenteller Kontrolle und die Fähigkeit zur genetischen oder pharmazeutischen Manipulation um die Rolle bestimmter Gene oder Signalwege von Interesse zu definieren. Wir konzentrieren uns in erster Linie auf VSG weil VSG der am häufigsten durchgeführten bariatrischen Verfahren in der Klinik in den Vereinigten Staaten13 ist. VSG ist darüber hinaus eine einfache chirurgische Modell mit weniger anatomische Änderungen im Vergleich zu anderen Verfahren wie Roux-En-Y Magen-Bypass oder biliopankreatischen Diversion.
Unsere Maus-Modell der VSG rekapituliert die folgenden Auswirkungen der bariatrischen Chirurgie beim Menschen beobachtet: Gewichtsverlust, reduzierte Nahrungsaufnahme, verbesserte Glukose Verordnung Inselchen Funktion verbessert, erhöht postprandialen Glucagon-Like Peptid 1 (GLP-1)-Sekretion, Arterieller Blutdruck und erhöhte zirkulierende Gallensäure Konzentrationen10,11,12,13,14,15reduziert. Daher ist dies ein ideales Modell, um den Körper Gewicht abhängigen und unabhängigen Mechanismen zu studieren, durch die VSG verbessert oder löst Folgeerkrankungen der Adipositas. Darüber hinaus ist es ein zuverlässiges Modell, das mit anderen chirurgischen Eingriffen, so dass für die Untersuchung der Auswirkungen der VSG unter verschiedenen Erkrankungen mit größeren mechanistische Einblicke12kombiniert werden kann.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>45% high fat diet</td>
			<td>Research Diets</td>
			<td>D12451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60% high fat diet</td>
			<td>Research Diets</td>
			<td>D12492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boost</td>
			<td>Nestle</td>
			<td>160-67538</td>
			<td>rich chocolate flavor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z432</td>
			<td>monofilament absorbable/taper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 Suture</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8866127-01</td>
			<td>monofilament absorbable/taper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>23-400-118</td>
			<td>small</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>233-400-101</td>
			<td>large</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>4x4 4 ply and 2x2 4 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery drape</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% saline solution</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LRS</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>170RX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Ointment</td>
			<td>Paralube&#174; Vet Ointment</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Adhesive</td>
			<td>Vetbond</td>
			<td>1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>141-213</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxacin</td>
			<td>Baytril</td>
			<td>08713254-186599</td>
			<td>22.7 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin tipped hemostats</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13021-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14018-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serrated Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11020-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gavage needle</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18060-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microneedle driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12075-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring Scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mL syringe</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20mL syringe</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucometer (one touch ultra mini)</td>
			<td>Lifescan</td>
			<td>70021208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiplex insulin and GLP-1 kit</td>
			<td>Meso Scale Discovery</td>
			<td>K15171C-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 6.00</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nestlets</td>
			<td>Ancare</td>
			<td>NES3600</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of vertical sleeve gastrectomy

Bariatrische Chirurgie, wie vertikale Sleeve-Gastrektomie (VSG), ist eine Operation des Gastrointestinaltraktes, die zum Zwecke der Gewichtsreduktion durchgeführt wird. Adipositaschirurgie ist derzeit die wirksamste langfristige Behandlung von Fettleibigkeit. Neben Gewichtsverlust Adipositaschirurgie gesundheitlichem Zusatznutzen wie Vergebung der Remission von Bluthochdruck, Diabetes Typ 2 produziert und verringert Risiko für bestimmte Arten von Krebs. Die Mechanismen über Gewichtsverlust für diese Vorteile bleiben unvollständig definierten. Daher werden Tiermodelle der bariatrischen Chirurgie entwickelt und validiert, um die Mechanismen, die diese Leistungen mit dem Ziel der Verbesserung der Magen-Darm-Physiologie verstehen und neue therapeutische Zielstrukturen zu identifizieren identifizieren. VSG ist die am häufigsten durchgeführten bariatrischen Verfahren in der Klinik in den Vereinigten Staaten geworden, weil es sehr effektiv ist bei der Herstellung von Gewichtsverlust und metabolische Verbesserung und ist einfacher durchzuführen als andere bariatrischen Eingriffe. Daher haben wir entwickelt und validiert ein Mausmodell der VSG. Diese VSG-Mausmodell rekapituliert viele der Wirkungen von VSG gesehen beim Menschen, darunter auch verbesserte Blutzucker- und Blutdruck-Verordnung. Die Methode basiert von transecting entlang der größere Krümmung des Magens auf Isolation des Magens, Unterbindung der Magen Schiffe und Entfernung von 70 % des Magens. Dieses chirurgische Protokoll haben wir erfolgreich an verschiedenen gentechnisch veränderten Mauslinien definieren die mechanistischen Mitwirkenden zu den Vorteilen der VSG eingesetzt. Darüber hinaus wurde diese VSG-Mausmodell mit anderen chirurgischen Techniken, mechanistische Einblicke zu erreichen kombiniert. Daher ist dies eine einfache und vielseitige Modell für die Untersuchung von Magen-Darm-Physiologie und die gesundheitlichen Vorteile der Adipositaschirurgie.

Die Farce und VSG-Verfahren sind in Abbildung 1dargestellt. Abbildung 1A zeigt, wo die Naht Linie entlang der Magen Wände während des Verfahrens Schein platziert wird. Derselben Gegend ist, wo der Magen während der VSG Operation geschnitten wird. Abbildung 1 b zeigt die röhrenförmige Überbleibsel der Magen links nach Leistung der VSG.
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A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Das folgende beschreibt die Leistung der vertikalen Sleeve-Gastrektomie bei Mäusen. Dies ist eine Art von Gewichtsverlust Chirurgie, die etwa 70 % des Magens entfernt wird.

Ein Mausmodell der vertikalen Sleeve-Gastrektomie

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. ...

a-murine-model-of-vertical-sleeve-gastrectomy

Research

JoVE Journal

Biology

11.0K Aufrufe.  Cornell University. Das folgende beschreibt die Leistung der vertikalen Sleeve-Gastrektomie bei Mäusen. Dies ist eine Art von Gewichtsverlust Chirurgie, die etwa 70 % des Magens entfernt wird.

Serie: A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murine Inselzellen der Bauchspeicheldrüse Isolation

Forschung

Biologie

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Mausmodell der hinteren Gliedmaßen Ischämie

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Murine Renal Transplantation Procedure

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell et al over 30 years ago (1) and refined by Zhang et al years later (2), few people in the world have mastered this procedure. In our laboratory we have successfully performed 1200 orthotopic kidney transplantations with &gt; 90% survival rate. The key points for success include stringent control of reperfusion injury, bleeding and thrombosis, both during the procedure and post-transplantation, and use of 10-0 instead of 11-0 suture for anastomoses.
Post-operative care and treatment of the recipient is extremely important to transplant success and evaluation. All renal graft recipients receive antibiotics in the form of an injection of penicillin immediately post-transplant and sulfatrim in the drinking water continually. Overall animal health is evaluated daily and whole blood creatinine analyses are performed routinely with a portable I-STAT machine to assess graft function.

Renal transplantation in mice is a technically challenging procedure that requires careful post-operative care and treatment for success.

Murine Renal Transplantation

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes in myocardial ischemia and to develop and optimize future treatment.
Two different methods of creating myocardial ischemia are performed in laboratory rodents. The first method is to create cryo infarction, a fast but inaccurate technique, where a cryo-pen is applied on the surface of the heart (1-3). Using this method the scientist can not guarantee that the cryo-scar leads to ischemia, also a vast myocardial injury is created that shows pathophysiological side effects that are not related to myocardial infarction. The second method is the permanent ligation of the left anterior descending artery (LAD). Here the LAD is ligated with one single stitch, forming an ischemia that can be seen almost immediately. By closing the LAD, no further blood flow is permitted in that area, while the surrounding myocardial tissue is nearly not affected. This surgical procedure imitates the pathobiological and pathophysiological aspects occurring in infarction-related myocardial ischemia.
The method introduced in this video demonstrates the surgical procedure of a mouse infarction model by ligating the LAD. This model is convenient for pathobiological and pathophysiological as well as immunobiological studies on cardiac infarction. The shown technique provides high accuracy and correlates well with histological sections.

This video demonstrates how to use a fast and reliable model to study pathobiological and pathophysiological processes of myocardial ischemia.

LAD-Ligation: einem Mausmodell der Myokardinfarkt

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and the control of gene transcription in the cell nucleus. The kindlins are ~75 kDa multidomain proteins and bind to an NPxY motif and upstream T/S cluster of the integrin &#946;-subunit cytoplasmic tail. The hematopoietically-important kindlin isoform, kindlin-3, is critical for platelet aggregation during thrombus formation, leukocyte rolling in response to infection and inflammation and osteoclast podocyte formation in bone resorption. Kindlin-3&#39;s role in these processes has resulted in extensive cellular and physiological studies. However, there is a need for an efficient method of acquiring high quality milligram quantities of the protein for further studies. We have developed a protocol, here described, for the efficient expression and purification of recombinant murine kindlin-3 by use of a baculovirus-driven expression system in Sf9 cells yielding sufficient amounts of high purity full-length protein to allow its biophysical characterization. The same approach could be taken in the study of the other mammalian kindlin isoforms.

Kindlins are fundamental to cell adhesion through integrins but studies of them have been hampered by the difficulty encountered in expressing them recombinantly in bacterial hosts. We describe here methods for their efficient production in baculovirus-infected insect cells.

Effizienten Herstellung und Reinigung von rekombinantem murinem Kindlin-3 von Insektenzellen für biophysikalische Studien

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs from the coronary circulation. Hearts with intact aortic arches were removed and perfused via retrograde Langendorff with digestion solution containing 300 Units/ml of collagenase type II, 0.1 mg/ml soybean trypsin inhibitor and 1 M CaCl2. The perfusates were collected at 15 min intervals for 90 min, pelleted by centrifugation, resuspended in plating media, and plated on tissue culture dishes. VSMCs were characterized by presence of SM22&#945;, &#945;-SMA, and vimentin. One of the main advantages of using this technique is the ability to isolate VSMCs from the coronary circulation of mice. Although the small number of cells obtained can limit some of the applications for which the cells can be utilized, isolated coronary VSMCs can be used in a variety of well-established cell culture techniques and assays. Studies investigating VSMCs from genetically modified mice can provide further information about structure-function and signaling processes associated with vascular pathologies.

The purpose of this protocol is to demonstrate the isolation and culture techniques of murine primary vascular smooth muscle cells (VSMCs) from the coronary circulation. Once VSMCs have been isolated, they can be used for many standard culture techniques.

Die Isolierung von murinen Coronary glatten Gefäßmuskelzellen

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

Der murinen Cholin-Mangel, Ethionine ergänzt (CDE) Diät-Modell einer chronischen Leberschädigung

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Massenspektrometrieanalyse zur Identifizierung der Ubiquitylierung von EIFP-A mit EYFP-Tags (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and require surgical debridement and skin grafting. Successful integration of the donor graft into a recipient wound bed depends on timely recruitment of immune cells, robust angiogenic response and new extracellular matrix formation. The development of novel therapeutic agents, which target some key processes involved in wound healing, are hindered by the lack of reliable preclinical models with optimized objective assessment of wound closure. Here, we describe an inexpensive and reproducible model of experimental full thickness burn wound reconstructed with an allogeneic skin graft. The wound is induced on the dorsum surface of anaesthetized inbred wild type mice from the BALB/C and SKH1-Hrhr backgrounds. The burn is produced using a brass template measuring 10 mm in diameter, which is preheated to 80 &#176;C and delivered at a constant pressure for 20 s. Burn eschar is excised 24 hours after the injury and replaced with a full thickness graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse. No specialized equipment is required for the procedure and surgical techniques are straightforward to follow. The method may be effortlessly implemented and reproduced in most research settings. Certain limitations are associated with the model. Due to technical difficulties, the harvest of thinner split thickness skin grafts is not possible. The surgical method we describe here allows for the reconstruction of burn wounds using full thickness skin grafts. It may be used to carry out preclinical therapeutic testing.

The aim of this study was to develop a murine model of burn wound healing. A thermal burn was induced on the dorsal skin of mice using a preheated brass template. Burned tissue was debrided and overlaid with a skin graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse.

Ein murines Modell einer Verbranntenwunde, rekonstruiert mit einem allogenen Hautgraft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

Comprehensive Echocardiographic Assessment of Right Ventricle Function in a Rat Model of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This remodeling leads to increased pulmonary vascular resistance, worsened right ventricular function, and premature death. Currently approved therapies for PAH largely target pulmonary vasodilator pathways; however, recent emerging therapeutic modalities are focused on other novel pathways involved in the pathogenesis of the disease, including right ventricle (RV) remodeling. Imaging techniques that allow longitudinal assessment of novel therapeutics are very useful for determining the efficacy of new drugs in preclinical studies. Noninvasive trans-thoracic echocardiography remains the standard approach to evaluating heart function and is widely used in rodent models. However, echocardiographic evaluation of the RV can be challenging due to its anatomical position and structure. In addition, standardized guidelines are lacking for echocardiography&#160;in preclinical rodent models, making it difficult to carry out a uniform assessment of RV&#160;function across studies in different laboratories. In preclinical studies, the monocrotaline (MCT) injury model in rats is widely used to evaluate drug efficacy for treating PAH. This protocol describes the echocardiographic evaluation of the RV in na&#239;ve and MCT-induced PAH rats.

The present protocol describes the echocardiographic characterization of right ventricular morphology and function in a rat model of pulmonary arterial hypertension.