이 연구는 NIH/NCI R21CA195002-01A1, 코넬 성과 주립대 대학원 다양성 친교의 대통령의 위원회에 의해 지원 되었다. 커밍스 박사 ' 실험실 또한 받았다 코넬 비교 암 생물학 교육 프로그램 및 일 라이 릴리와 회사에서 프로젝트 기간 동안 자금.

모든 실험 프로토콜은 코넬 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었습니다가지고.
1. 미리 수술 준비
참고: 마우스 연구는 일반적으로 배경에 C57BL 다이어트 유발 된 비만 연구 translationally 인간의 비만 인슐린 저항에 관련 된 수 있도록. 남성 및 여성 쥐 후속 단계에 설명 된 대로 공부 될 수 있습니다.
<ol>
	<li>2 개월의 나이, 2 개월 ( 재료의 표참조)에 대 한 45% 또는 60% 높은 지방 다이어트에 마우스를 놓습니다. 참고: 마우스는 비만 인슐린 저항 표현 형을 생성 하 고 지방 규정식을 먹인 다. 높은 지방 다이어트를 먹이 기의 짧은 또는 긴 기간 연구의 목표에 따라 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>쥐를 먹이를 계속 광고 libitum 수술까지. 경우 초기 측정 필요 후 7 주 동안 높은 지방 다이어트 먹이, 6 h에 대 한 마우스를 빨리 또는 밤새 고 관심 (예: 포도 당)의 대사 산물의 측정을 위한 기준 혈액 샘플.</li>
	<li>높은 지방에 쥐 다이어트 있게 쥐 1 주일 이전 가짜 수술 또는 VSG 혈 후 복구 계속 합니다. 액체에 마우스를 놓고 수술 하기 전에 4 일 동안 ( 재료의 표참조) 다이어트. 참고: 마우스 유지 됩니다 액체 다이어트 취소 치료 응답 저하 될 수 있습니다 미 립 자 물질의 소화 관 수술 전후.</li>
	<li>수술 하기 전에 다음 항목을 소독: 포 일, 거 즈, 면 도포 (CTAs) 및 수술 기구 (운영 위, 아이리스 시저, dumont forcep hemostat 톱니 브라운 Adson forcep, gavage 바늘, 미세 바늘 드라이버, 봄이 위를 스쳐 ).</li>
</ol>
2. 수직 소매 위절제술 및 가짜 절차
<ol>
	<li>수술 당일 기준 무게 측정을 얻기 위해 마우스 무게.</li>
	<li>마 취 시스템, 온수 물 목욕와 난방 패드 수술 실 장비. 37 ° C에 물 목욕을 설정 하 고 따뜻한 관개 0.9% 식 염 수 솔루션 사용. 70% 에탄올과 수술 필드를 청소 하 고 메 마른 기술 압력가 수술 팩 및 도구를 사용 하 여. 참고: 난방 패드 동물 수술 및 마 취에서 회복 하는 동안 따뜻하게 유지 하는 데 사용 됩니다.</li>
	<li>유도 챔버를 사용 하 여, 5 %isoflurane O2 유량 1 L/분입니다 마우스 마 취의 적절 한 평면에 발가락 핀치를 수행 하 여 확인의 마우스 anesthetize. 마 취의 일관 된 평면 달성 되 면 1-3% isoflurane 0.6 L/min의 O2 흐름 속도와 마우스를 유지.</li>
	<li>일단 마우스 취 장소 눈 연 고 (재료의 표 참조) 그들을 수술 하는 동안 촉촉한 유지 하는 눈에. 이 이번에도 진통제, meloxicam 등 관리 (2 mg/kg 피하). 부드럽게 긴장을 제공 하는 피부 잡고 겨드랑이에 배꼽에서 머리 클립.
	<ol>
		<li>마우스의 피부는 얇고 섬세 한, 머리를 자르는 때 피부 병 변 발생 하지 주의 하십시오. Povidone-요오드와 알코올 피부를 청소.</li>
		<li>멸 균 장갑 하 고 메 마른 외과 분야와 악기를 준비. 무 균 기술을 사용 하 여 절차의 나머지 부분을 수행 합니다. 마우스의 양쪽에 메 마른 외과 커튼을 배치 하 여 무 균 수술 필드를 준비 합니다. 압력가 깡통 호 일을 사용 하 여 마우스에 대 한 수술 드 레이프를 만들.</li>
		<li>마우스의 복 부에 대 한 액세스를 허용 하는 종이에 작은 구멍을 잘라.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>아이리스가 위를 사용 하 여 xiphoid 연골의 수준에 중앙 복 부 (배꼽)에서 피부의 절 개를 확인 합니다. 알바와 사용 아이리스는 교육 따라 체 벽을 통해 잘라가 위 교육 식별 알바. CTAs를 사용 하 여 부드럽게 복 부의 위 상승 하 고 퉁 명 스럽게 복 부의 더 큰 곡률의 그레이터 omentum을 해 부.</li>
	<li>7-0 monofilament 흡수 봉합 사를 사용 하 여 두 개의 합자를 배치 하 여 복 부의 저 비장 사이 실행 되는 짧은 위 동맥 선 봄이 위를 사용 하 여 두 개의 합자 사이 잘라. 일단 동맥 transected 완전히 복 부 구멍에서 복 부를 exteriorize. 위장 및 조직 촉촉한 유지 하는 식 염 수와 젖은 거 즈를 놓습니다.</li>
	<li>가짜 절차
	<ol>
		<li>가짜 프로시저에 대 한 테이퍼 바늘으로 6-0 monofilament 흡수 봉합 사를 사용 하 여 봉합의 느슨한 간단한 연속 패턴을 배치 합니다. 2mm 식도의 오른쪽 (외과 의사의 오른쪽)을 시작 합니다. 복 부 위 벽을 따라 봉합 라인을 배치 하 고 등 위 벽을 따라 계속. 참고: 모든 위 조작에 대 한 감염의 위험을 줄이려면만 monofilament 흡수 봉합 사를 사용 합니다. 또한, 봉합 사 풀-""를 통해 위 조직 손상 및 dehiscence 상처의 위험을 증가 하는 절단 바늘의 사용으로 모든 위 조작에 대 한 테이퍼 바늘만 봉합을 사용 합니다.</li>
		<li>봉합을 배치 하면서 1 위 벽을 통해 완전히 바늘을 전달 합니다. 봉합 평면, 거짓말만 하지 위를 제한 다는 것을 확인 하십시오. 부드럽게 매 3-4 자유 투를 사용 하 여 봉합 하 고 2.9 단계로 건너뜁니다.</li>
		<li>VSG 절차 단계 2.7을 생략 하 고 단계로 2.8 진행.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>VSG 절차
	<ol>
		<li>VSG 절차에 대 한 위 동맥과 정 맥 monofilament 테이퍼 바늘 3를 사용 하 여 흡수 되기 쉬운 봉합 사 각 매듭에 대 한 던져 7-0의 저명한 분 지 선. 바로 아래 (즉, 위장의 낮은 곡률을 향해) 합자 transection의 의도 라인을 놓습니다. 참고: transection의 의도 라인 위장과 마 고 pilcatus 아래 최소 2 mm의 심장 노치 ~ 2 m m 위의 (복 부의 더 큰 곡률을 향해 의미)에서 시작 하 고 췌 장의 오른쪽 엽의 인접 끝. 일반적으로, 있다 출혈; 하는 위 벽 당 4 배 그러나,이 쥐 사이의 달라질 수 있습니다.</li>
		<li>위절제술 중 위 내용의 흘림 방지, 봉합 transection 테이퍼 바늘으로 6-0 monofilament 흡수 봉합 사를 사용 하 여의 의도 라인 바로 아래 두 위 벽을 통과의 간단한 연속 라인을 배치 합니다. 식도의 외과 의사의 오른쪽 마 고 pilcatus 및 췌 바로 위에 끝 아래 봉합 라인을 시작 합니다.</li>
		<li>봉합 사 선 위에 얇은 밀고 hemostats 놓고 봄이 위를 사용 하 여 봉합 라인과 hemostats 사이 잘라. 메 마른 외과 분야에서 transected 위 조직을 제거 합니다.</li></ol></li></ol>CTAs를 사용 하 여 혈액 및 복 부의 digesta 청소.
		<li>Apposition 테이퍼 바늘 간단한 불연속 패턴을 사용 하 여 6-0 monofilament 흡수 봉합 사를 사용 하 여 위 벽의 강화. 참고: 간단한 불연속 봉합 패턴 이후이 제공 하는 간단한 연속 봉합 패턴 보다 더 안전한 폐쇄 좋습니다.</li>
		<li>촉 촉 하 고 깨끗 한 조직을 유지 하기 위하여 절차를 통해 식 염 수로 위 나머지를 플러시. 20 mL 주사기에 부착 된 20 G gavage 바늘을 사용 하 여 식 염 수로 위 게 수행. 이 크기를 사용 하 여 적절 한 압력 과도 한 압력 으로부터 위 조직 손상이 나 일반 지적된 바늘의 사용에서 사고 위 조직 손상의 위험 없이 제공 됩니다.</li>
		<li>20 매듭의 최소를 사용 하 여 안전 하 게 닫고 위; 이 쪽에 액세스 하기가 더 어렵습니다 그리고 그러므로 종종 dehiscence의 사이트 폐쇄 식도 측면을 따라에 주의.</li>
		<li>CTAs와 속에 부드럽게 눌러 아무 누출 인지 확인 합니다. 누수 식별 하는 경우 추가 간단한 불연속 매듭 누설의 영역에 놓고 테스트를 다시 누설. 누출 테스트 누설 감지 때 까지입니다.</li>
		<li>전염 성 미 립 자 사정 뒤에 남아 있도록 염 분의 적어도 60 mL를 사용 하 여 위장의 최종 철저 한 게 할.</li>
	
	
	<li>장소는 CTA를 사용 하 여 간 아래 복 부 구멍에 다시 위. 모든 초과 액체를 흡수 하는 복 부 구멍의 등 쪽 측면에 따라서 CTAs를 놓습니다. 무딘 18 G 바늘을 사용 하 여 주사 lactated 벨의 솔루션 (LRS) 또는 항생제 (0.5 mL 20 mg/kg Enrofloxacin + LRS) 없이 폐쇄 직전 복 부 구멍에 직접. 참고:이 유체 손실 수술 하는 동안 경험된을 대체 하 고 복구 지원 외과 사이트에 항생제의 직접 적용 하는 방법을 제공 합니다.</li>
	<li>6-0 monofilament 흡수 봉합 사를 사용 하 여 간단한 불연속 패턴에 테이퍼 바늘으로 복 부 근육 층을 닫습니다. 그런 다음 간단한 연속 패턴에 6-0 monofilament 흡수 봉합 된 피부 레이어를 닫습니다.</li>
	<li>피부에 조직 접착제를 배치 하 고 마우스 post-operatively 상처 폐쇄를 중단 수 없습니다 있도록 봉합을 묻어 봉합 선에 피부를 접어.</li>
	<li>isoflurane 해제 그리고 10-15 minbefore 집 그것의 감 금에 반환에 대 한 난방 패드에 복구 하는 마우스. 두지 마십시오 동물 무인의 식을 회복 하 고 움직일 수 때까지.</li>
	<li>수술에서 완전히 회복 될 때까지 홀로 지 내게 동물 유지. 참고: 정확한 음식 섭취 량 측정 연구를 통해 얻을 수 있다면, 마우스 연구 내내 홀로 지 내게 계속 해야 합니다. 먹는 가정 케이지 침구에서 이물질 방해의 위험이 있다. 동물 농축을 제공 하기 위해 자료를 중첩 제외 침구의 장에 보관 한다 ( 테이블의 자료를 참조).</li>

3. 수술 마우스 관리 및 측정
<ol>
	<li>마우스의 집 케이지를 반환 하 고 생리대에 케이지를 놓습니다. 수술 후 적어도 7 일 동안 액체 규정식에 쥐를 유지 합니다. 진통제, meloxicam 등 관리 (2 mg/kg 피하), 수술 후 2 일 동안. 참고: enrofloxacin (20 mg/kg), 같은 항생제, 수술 후 최대 7 일 동안 주어진 수 있습니다. 항생제는 수술에서 감염의 위험을 최소화 하 고 있습니다 또는 무 균 절차를 통해 유지의 수준에 따라 필요 하지 않을 수 있습니다. 그러나, 항생제 사용 하는 경우 그들은 일관성을 유지 하기 위해 동일한 연구에 모든 쥐에 관리 될 해야 합니다.</li>
	<li>수술 후 기간 동안 몸 무게, 음식 섭취, 배변, 활동 수준, 그리고 적절 한 치유와 회복을 위해 적어도 매일 처리를 평가 합니다. 수술 후 수술 후 14 일에 대 한 모니터링을 실시 합니다. 참고: 수술 실패는 일반적으로 본 수술 직후 또는 3 일 후 이내 operatively. 동물을 먹고 하거나 수술 후 두 번째 하루에 마시는 하지 수술 합병증에 대 한 밀접 하 게 모니터링 해야 합니다.</li>
	<li>수술 기간 완료 후 적절 한 표현 형의 유지를 보장 하기 위해 연구에 걸쳐 정기적으로 몸 무게와 음식 섭취 량을 측정 합니다.</li>
	<li>포도 당 내성, 포도 당 자극 인슐린 분 비를 평가 하는 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)을 수행 하 고 호르몬 분 비를 직감.
	<ol>
		<li>금식 후 쥐에는 OGTT를 수행 6 h 그리고 gavage 쥐 1 g/kg의 복용량에 50% 포도 당 솔루션에 대 한 그들.</li>
		<li>꼬리 혈액 샘플에서 0, 2.5, 5, 15, 30, 60, 120 분 후에 gavage 수집 합니다. 이 시간 포인트에서 glucometer로 혈당을 측정 합니다. 다양 한 호르몬, 인슐린, GLP-1 등의 측정에 대 한 각 시간 지점에서 혈 청 샘플을 수집 합니다.</li>
		<li>6 h 이전에 안락사에 대 한 빠른 쥐입니다. 최종 혈액 샘플 및 혈당 측정을 가져가 라. 최종 혈당 측정 기준선 측정을 비교 합니다. 200 mg/kg의 복용량에 pentobarbital의 복 주사와 쥐 안락사</li>
		<li>초기 및 최종 혈 청 샘플을 사용 하 여 추가 analytes를 측정 하 여 사전 및 수술 외과 값 비교.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FXR+is+a+molecular+target+for+the+effects+of+vertical+sleeve+gastrectomy.">FXR is a molecular target for the effects of vertical sleeve gastrectomy.</a> Nature. 509 (7499), 183-188 (2014).</li><li>Wilson-Perez, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+sleeve+gastrectomy+is+effective+in+two+genetic+mouse+models+of+glucagon-like+Peptide+1+receptor+deficiency.">Vertical sleeve gastrectomy is effective in two genetic mouse models of glucagon-like Peptide 1 receptor deficiency.</a> Diabetes. 62 (7), 2380-2385 (2013).</li><li>Pressler, J. 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저자는 커밍스 박사 받은 일 라이 릴리와 회사에서 자금을 제외 하 고 아무 충돌을 선언 합니다.

Bariatric 수술 비만 대 한 가장 효과적인 장기 치료 이며, 타입-2 당뇨병과 고혈압 면제1,9,15의 높은 속도 같은 다른 건강 상의 혜택에 결과. Bariatric 수술의 murine 모델 bariatric 수술 비만 comorbidities에 신속 하 고 뚜렷한 향상을 발생 하는 메커니즘을 식별 하는 강력한 도구를 제공 합니다. Bariatric 수술의 murine 모델은 용기 조절 물질 ...

비만 전세계 성장 지속으로 bariatric 수술 비만1에 대 한 가장 효과적인 장기 치료로 인기를 얻고 있다. 불행히도, 체중 감량 식이 요법과 운동에 의해 끝났습니다 달성 하기 어렵고 상대적으로 효과 없는 장기2,3. Bariatric 수술, 수직 소매 위절제술 (VSG), 같은 무게 손실1,4목적 위장의 조작으로 정의 됩니다. 무게 손실 bariatric 수술의 눈에 띄는 결과, 비록 bariatric 수술 비만 comorbidities 향상과 수명5확장 등 다른 건강 상의 혜택을 제공 합니다. 예를 들어 bariatric 수술 타입 2 당뇨병과 고혈압, 그리고 특정 유형의 암1,,67의 개발의 평생 위험 감소의 면제의 높은 속도에서 발생합니다. 메모의 2 형 당뇨병 및 고혈압의 면제를 일으키는 원인이 되는 비만 수술의 효과 종종 관찰 수술 후 곧 체중 감량8,9이전. 이 수술 후 관찰 하는 효능에 기여 하는 몸 무게의 독립적인 기계 장치는 개념을 강조 표시 합니다. Bariatric 수술의 동물 모델 개발 되었습니다와10,,1112이러한 건강 상의 혜택에서 발생 하는 데 사용 하는 메커니즘을 연구 활용 됩니다.
우리 우리는 bariatric 수술 비만 2 형 당뇨병, 고혈압, 대 장 암10 등 comorbidities 향상 하는 메커니즘을 연구 하는 다양 한 유전자 변형된 마우스 모델에 적용 된 VSG의 마우스 모델을 확인 한 , 11 , 12. 설치류 모델 허용 더 실험 제어 및 유전 또는 제약 조작, 특정 유전자의 역할 또는 관심의 신호 경로 정의 수행할 수 있는 능력. VSG 미국13클리닉에서 가장 일반적으로 수행된 bariatric 절차 이므로 우리 VSG에 주로 집중 하 고 있다. 또한, VSG Roux-en-Y 위장 바이패스 또는 biliopancreatic 전환 등 다른 절차에 비해 적은 해부학 수정 간단한 수술 모델입니다.
VSG의 우리의 마우스 모델이 인간에서 관찰 된 bariatric 수술의 효과: 체중 감소, 감소 된 음식 섭취 량, 향상 된 포도 당 규칙, 섬 기능 향상, 사후 높은가격순 글 루카 곤 유사 펩 티 드-1 (GLP-1) 분 비를 증가 동맥 혈압 및 증가 순환 담 즙 산 농도10,11,12,13,,1415감소. 따라서, 몸 무게 의존 하 고 독립적인 메커니즘은 VSG 개선 또는 비만 comorbidities 해결을 공부 하는 이상적인 모델입니다. 또한, 그것은 큰 기계적 통찰력12다양 한 질병 조건 VSG의 영향의 조사에 대 한 허용 하는 다른 수술 절차와 결합 될 수 있는 신뢰할 수 있는 모델입니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>45% high fat diet</td>
			<td>Research Diets</td>
			<td>D12451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60% high fat diet</td>
			<td>Research Diets</td>
			<td>D12492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boost</td>
			<td>Nestle</td>
			<td>160-67538</td>
			<td>rich chocolate flavor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z432</td>
			<td>monofilament absorbable/taper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 Suture</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8866127-01</td>
			<td>monofilament absorbable/taper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>23-400-118</td>
			<td>small</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>233-400-101</td>
			<td>large</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>4x4 4 ply and 2x2 4 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foil</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery drape</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% saline solution</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LRS</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>170RX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Ointment</td>
			<td>Paralube&#174; Vet Ointment</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Adhesive</td>
			<td>Vetbond</td>
			<td>1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim</td>
			<td>141-213</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxacin</td>
			<td>Baytril</td>
			<td>08713254-186599</td>
			<td>22.7 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin tipped hemostats</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13021-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14018-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serrated Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11020-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gavage needle</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18060-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microneedle driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12075-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring Scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1mL syringe</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20mL syringe</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucometer (one touch ultra mini)</td>
			<td>Lifescan</td>
			<td>70021208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiplex insulin and GLP-1 kit</td>
			<td>Meso Scale Discovery</td>
			<td>K15171C-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 6.00</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nestlets</td>
			<td>Ancare</td>
			<td>NES3600</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of vertical sleeve gastrectomy

수직 소매 위절제술 (VSG) 같은 bariatric 수술은 체중 감량을 목적으로 수행 되는 위장의 수술. Bariatric 수술은 현재 비만 대 한 가장 효과적인 장기 치료입니다. 체중 감소 이외에 bariatric 수술 타입 2 당뇨병, 고혈압, 면제의 면제와 같은 추가적인 건강 혜택을 생성 하 고 특정 유형의 암 개발의 위험을 감소. 이러한 혜택에 대 한 체중 감량 넘어 메커니즘 불완전 하 게 정의 된 남아 있습니다. 따라서, bariatric 수술의 동물 모델 되는 개발 및 위장 생리학의 이해와 새로운 치료 목표를 식별 개선의 목표와 함께 이러한 혜택을 선도 하는 메커니즘을 식별 하는 유효성 검사. VSG 되고있다 미국에서 병원에 가장 일반적으로 수행된 bariatric 절차 때문에 체중 감량 및 대사 개선, 생산에 매우 효과적 이며 다른 bariatric 절차 보다 수행을 간단 하 게. 따라서, 우리는 개발과 VSG의 murine 모델 검증. 이 murine VSG 모델 VSG 인간, 향상 된 혈당 및 혈압 조절 등에서의 효과의 많은. 메서드를 사용 하면 복 부의 더 큰 곡률에 따라 transecting에 의해 복 부의 절연, 위 혈관의 결 찰 및 복 부의 70%의 제거에 기반. 우리 기계 참여자 VSG의 혜택을 정의 하기 위해 다양 한 유전자 변형된 마우스 라인을 성공적으로이 수술 프로토콜을 적용 했습니다. 또한,이 murine VSG 모델 깊은 기계적 통찰력을 달성 하기 위해 다른 외과 기술로 결합 하고있다. 따라서, 위장 생리학을 공부 하 고 비만 수술의 효능에 대 한 간단 하 고 다재 다능 한 모델입니다.

가짜와 VSG 절차는 그림 1에 묘사 된다. 그림 1A 는 가짜 절차 동안 위 벽을 따라 봉합 라인 배치 되는 위치를 보여 줍니다. 이 같은 지역 위 VSG 수술 하는 동안 컷은입니다. 그림 1B 실적 VSG의 후 위 왼쪽의 관 나머지를 보여준다.
통계 및 데이터 분석<...

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A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

다음에서는 쥐에 수직 소매 위절제술의 성능을 설명합니다. 복 부의 약 70%의 제거를 포함 하는 체중 감소 수술의 유형입니다.

수직 소매 위절제술의 Murine 모델

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. ...

a-murine-model-of-vertical-sleeve-gastrectomy

Research

JoVE Journal

Biology

11.0K 조회수.  Cornell University. 다음에서는 쥐에 수직 소매 위절제술의 성능을 설명합니다. 복 부의 약 70%의 제거를 포함 하는 체중 감소 수술의 유형입니다.

비디오: A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murine 췌장 아일릿 격리

연구

생물학

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Hindlimb 국소 빈혈의 Murine 모델

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Murine Renal Transplantation Procedure

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell et al over 30 years ago (1) and refined by Zhang et al years later (2), few people in the world have mastered this procedure. In our laboratory we have successfully performed 1200 orthotopic kidney transplantations with &gt; 90% survival rate. The key points for success include stringent control of reperfusion injury, bleeding and thrombosis, both during the procedure and post-transplantation, and use of 10-0 instead of 11-0 suture for anastomoses.
Post-operative care and treatment of the recipient is extremely important to transplant success and evaluation. All renal graft recipients receive antibiotics in the form of an injection of penicillin immediately post-transplant and sulfatrim in the drinking water continually. Overall animal health is evaluated daily and whole blood creatinine analyses are performed routinely with a portable I-STAT machine to assess graft function.

Renal transplantation in mice is a technically challenging procedure that requires careful post-operative care and treatment for success.

Murine 신장 이식 절차

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes in myocardial ischemia and to develop and optimize future treatment.
Two different methods of creating myocardial ischemia are performed in laboratory rodents. The first method is to create cryo infarction, a fast but inaccurate technique, where a cryo-pen is applied on the surface of the heart (1-3). Using this method the scientist can not guarantee that the cryo-scar leads to ischemia, also a vast myocardial injury is created that shows pathophysiological side effects that are not related to myocardial infarction. The second method is the permanent ligation of the left anterior descending artery (LAD). Here the LAD is ligated with one single stitch, forming an ischemia that can be seen almost immediately. By closing the LAD, no further blood flow is permitted in that area, while the surrounding myocardial tissue is nearly not affected. This surgical procedure imitates the pathobiological and pathophysiological aspects occurring in infarction-related myocardial ischemia.
The method introduced in this video demonstrates the surgical procedure of a mouse infarction model by ligating the LAD. This model is convenient for pathobiological and pathophysiological as well as immunobiological studies on cardiac infarction. The shown technique provides high accuracy and correlates well with histological sections.

This video demonstrates how to use a fast and reliable model to study pathobiological and pathophysiological processes of myocardial ischemia.

내사 - 결합 : 심근 경색의 Murine 모델

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and the control of gene transcription in the cell nucleus. The kindlins are ~75 kDa multidomain proteins and bind to an NPxY motif and upstream T/S cluster of the integrin &#946;-subunit cytoplasmic tail. The hematopoietically-important kindlin isoform, kindlin-3, is critical for platelet aggregation during thrombus formation, leukocyte rolling in response to infection and inflammation and osteoclast podocyte formation in bone resorption. Kindlin-3&#39;s role in these processes has resulted in extensive cellular and physiological studies. However, there is a need for an efficient method of acquiring high quality milligram quantities of the protein for further studies. We have developed a protocol, here described, for the efficient expression and purification of recombinant murine kindlin-3 by use of a baculovirus-driven expression system in Sf9 cells yielding sufficient amounts of high purity full-length protein to allow its biophysical characterization. The same approach could be taken in the study of the other mammalian kindlin isoforms.

Kindlins are fundamental to cell adhesion through integrins but studies of them have been hampered by the difficulty encountered in expressing them recombinantly in bacterial hosts. We describe here methods for their efficient production in baculovirus-infected insect cells.

의 효율적인 생산 및 정제 재조합 쥐과 Kindlin-3 생물 물리학 연구 곤충 세포에서

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs from the coronary circulation. Hearts with intact aortic arches were removed and perfused via retrograde Langendorff with digestion solution containing 300 Units/ml of collagenase type II, 0.1 mg/ml soybean trypsin inhibitor and 1 M CaCl2. The perfusates were collected at 15 min intervals for 90 min, pelleted by centrifugation, resuspended in plating media, and plated on tissue culture dishes. VSMCs were characterized by presence of SM22&#945;, &#945;-SMA, and vimentin. One of the main advantages of using this technique is the ability to isolate VSMCs from the coronary circulation of mice. Although the small number of cells obtained can limit some of the applications for which the cells can be utilized, isolated coronary VSMCs can be used in a variety of well-established cell culture techniques and assays. Studies investigating VSMCs from genetically modified mice can provide further information about structure-function and signaling processes associated with vascular pathologies.

The purpose of this protocol is to demonstrate the isolation and culture techniques of murine primary vascular smooth muscle cells (VSMCs) from the coronary circulation. Once VSMCs have been isolated, they can be used for many standard culture techniques.

쥐 관상 동맥 혈관 평활근 세포의 분리

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

Murine 콜린 불충분 한, Ethionine 보충 (CDE) 다이어트 만성 간 상해의 모델

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and require surgical debridement and skin grafting. Successful integration of the donor graft into a recipient wound bed depends on timely recruitment of immune cells, robust angiogenic response and new extracellular matrix formation. The development of novel therapeutic agents, which target some key processes involved in wound healing, are hindered by the lack of reliable preclinical models with optimized objective assessment of wound closure. Here, we describe an inexpensive and reproducible model of experimental full thickness burn wound reconstructed with an allogeneic skin graft. The wound is induced on the dorsum surface of anaesthetized inbred wild type mice from the BALB/C and SKH1-Hrhr backgrounds. The burn is produced using a brass template measuring 10 mm in diameter, which is preheated to 80 &#176;C and delivered at a constant pressure for 20 s. Burn eschar is excised 24 hours after the injury and replaced with a full thickness graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse. No specialized equipment is required for the procedure and surgical techniques are straightforward to follow. The method may be effortlessly implemented and reproduced in most research settings. Certain limitations are associated with the model. Due to technical difficulties, the harvest of thinner split thickness skin grafts is not possible. The surgical method we describe here allows for the reconstruction of burn wounds using full thickness skin grafts. It may be used to carry out preclinical therapeutic testing.

The aim of this study was to develop a murine model of burn wound healing. A thermal burn was induced on the dorsal skin of mice using a preheated brass template. Burned tissue was debrided and overlaid with a skin graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse.

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

Comprehensive Echocardiographic Assessment of Right Ventricle Function in a Rat Model of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This remodeling leads to increased pulmonary vascular resistance, worsened right ventricular function, and premature death. Currently approved therapies for PAH largely target pulmonary vasodilator pathways; however, recent emerging therapeutic modalities are focused on other novel pathways involved in the pathogenesis of the disease, including right ventricle (RV) remodeling. Imaging techniques that allow longitudinal assessment of novel therapeutics are very useful for determining the efficacy of new drugs in preclinical studies. Noninvasive trans-thoracic echocardiography remains the standard approach to evaluating heart function and is widely used in rodent models. However, echocardiographic evaluation of the RV can be challenging due to its anatomical position and structure. In addition, standardized guidelines are lacking for echocardiography&#160;in preclinical rodent models, making it difficult to carry out a uniform assessment of RV&#160;function across studies in different laboratories. In preclinical studies, the monocrotaline (MCT) injury model in rats is widely used to evaluate drug efficacy for treating PAH. This protocol describes the echocardiographic evaluation of the RV in na&#239;ve and MCT-induced PAH rats.

The present protocol describes the echocardiographic characterization of right ventricular morphology and function in a rat model of pulmonary arterial hypertension.