La importancia de este protocolo radica en la detectabilidad en tiempo real de los tumores pulmonares que se desarrollaron espontáneamente en este modelo de ratón, desde la iniciación tumoral hasta la progresión tumoral. La ventaja de esta técnica es que no es invasiva, requiere sólo habilidad básica y nos permite controlar directamente el efecto de la droga y el tratamiento de interés. La progresión del tumor pulmonar también se puede evaluar en presencia o ausencia de un gen de interés.
Con este análisis, las nuevas estrategias de tratamiento pueden extenderse potencialmente a la clínica. Siete y 18 semanas después de la intubación lentiviral, encienda la bomba de calentamiento para el gel de ultrasonido y el monitor de temperatura y configure una incubadora de 33 grados centígrados. Coloque el motor 3D en el sistema de riel integrado y confirme que el motor y el sistema de montaje del transductor están asegurados en su lugar.
Conecte un transductor de frecuencia de 40 hercios al motor 3D y abra un nuevo estudio en el software de ultrasonido. En la nueva ventana de estudio, introduzca el nombre del estudio. En la ventana de nombre de serie, introduzca el nombre de la serie y cualquier otra información relevante.
Después de hacer clic hecho, seleccione el tipo de transductor. El programa cambiará al modo B. Coloque una lámpara de calentamiento en una posición conveniente por encima de la plataforma animal y confirme la falta de respuesta al reflejo del pedal en el ratón experimental anestesiado.
Coloque el ratón sobre la plataforma animal en cubito ventral y aplique ung ón en los ojos del animal. Fije las extremidades firmemente a la plataforma con cinta adhesiva y aplique una capa delgada del gel de ultrasonido calentado en el pecho del animal. Utilice la perilla de control de altura para bajar la sonda de adquisición hasta que toque la superficie del pecho del ratón y coloque la sonda de manera que el corazón del ratón esté aproximadamente centrado.
A continuación, utilice las micro perillas para adquirir imágenes de todo el pecho de ambas extremidades en la orientación transversal. Idealmente reunir 500 fotogramas por ratón. Cuando todas las imágenes hayan sido capturadas, limpie el gel del pecho del ratón y coloque el animal en la incubadora de calentamiento.
Para el análisis 2D de las imágenes de ultrasonido, abra los marcos adquiridos en el software de ultrasonido y escanee manualmente los marcos en busca de tumores. Para tumores de iniciación pequeños, cuente el número de beelines periódicamente cada 10 fotogramas para la longitud completa de los 500 marcos adquiridos. Para las mediciones 2D de tumores grandes, utilice la herramienta lineal para medir el ancho y la longitud del tumor presente, luego calcule el volumen de los tumores utilizando la fórmula.
Siete semanas después de la infección intra traqueal, se realizan imágenes por ultrasonido para visualizar los diversos tipos de lesiones precursoras que se producen en el modelo experimental de ratón después de la inyección. Estas lesiones precursoras identificadas en la abeja pueden ser contadas por el ojo y representan pequeños tumores en la superficie de los pulmones. La gráfica de dispersión de estos datos permite cuantificar los tumores dentro de los ratones experimentales para permitir la estimación del número de tumor relativo por animal.
A las 18 semanas después de la infección, los tumores grandes aparecen como hendiduras profundas interrumpiendo la superficie plural que se puede medir dentro del software de ultrasonido. El volumen tumoral relativo se puede cuantificar para el análisis estadístico. La tinción de hematoxilina y eosina en las secciones pulmonares cosechadas a las 20 semanas después de la infección confirma la formación de tumores grandes, así como la formación de adenoma y adenocarcinoma.
Es importante no confundir los tumores pulmonares, que son dinámicos, con falsos positivos, que son estáticos. Dado que la calificación del número de tumor del volumen es relativa en este método, sugerimos utilizar métodos adicionales, como la tinción de petri. Este modelo permite la evaluación directa de los efectos de las aberraciones genéticas o estrategias de tratamiento en el desarrollo del cáncer de pulmón en ratones.
