Значение этого протокола заключается в обнаружении опухолей легких в режиме реального времени, которые развивались спонтанно в этой модели мыши, от инициирования опухоли до прогрессирования опухоли. Преимущество этого метода является то, что является неинвазивным, требуется только основные навыки и позволяют нам непосредственно контролировать эффект препарата и лечения интересов. Прогрессирование опухоли легких также может быть оценено при наличии или отсутствии гена, представляющий интерес.
Используя этот анализ, новые стратегии лечения могут быть потенциально распространены на клинику. Через семь и 18 недель после лентивирусной инаблиации включите нагревательный насос для ультразвукового геля и монитора температуры и установите инкубатор по цельсию 33 градуса по Цельсию. Поместите 3D-двигатель на интегрированную железнодорожную систему и подтвердите, что система монтажа двигателя и предуцера закреплена на месте.
Подключите 40 герц частоты предуц к 3D-мотору и открыть новое исследование в ультразвуковом программном обеспечении. В новом окне исследования введите название исследования. В окне имени серии введите имя серии и любую другую соответствующую информацию.
После нажатия сделано, выберите тип предуцера. Программа будет меняться в режиме B. Поместите нагревательный лампу в удобное положение над платформой животного и подтвердите отсутствие реакции на педаль рефлекса в обезболивающей экспериментальной мыши.
Поместите мышь на животной платформе в cubitus брюшной и применить мазь к глазам животного. Закрените конечности твердо на платформе лентой и нанесите тонкий слой разогретого ультразвукового геля на грудь животного. Используйте ручку управления высотой, чтобы снизить зонд приобретения, пока он не коснется поверхности груди мыши и положение зонда так, что сердце мыши примерно по центру.
Затем используйте микро ручки для получения изображений всей груди с обеих конечностей поперечной ориентации. В идеале сбор 500 кадров на мышь. Когда все изображения были захвачены, очистить гель от груди мыши и поместить животное в потепление инкубатора.
Для 2D-анализа ультразвуковых изображений откройте приобретенные кадры в ультразвуковом программном обеспечении и вручную сканируйте рамки на опухоли. Для небольших инициируя опухолей, периодически подсчитывайте количество билайнов каждые 10 кадров по всей длине приобретенных 500 кадров. Для 2D-измерений крупных опухолей используйте линейный инструмент для измерения ширины и длины присутствуют опухоли, а затем рассчитать объем опухолей с помощью формулы.
Через семь недель после внутритрахеальной инфекции, ультразвуковая визуализация выполняется для визуализации различных типов поражений прекурсоров, которые происходят в экспериментальной модели мыши после инъекции. Эти Билайн определены поражения предшественника могут быть подсчитаны на глаз и представляют собой небольшие опухоли на поверхности легких. Рассеяние этих данных позволяет количественно определить опухоли у экспериментальных мышей, чтобы дать оценку относительного числа опухолей на животное.
На 18 недель после инфекции, большие опухоли появляются как глубокие расщелины прерывания множественной поверхности, которые могут быть измерены в ультразвуковом программном обеспечении. Относительный объем опухоли может быть количественно для статистического анализа. Гематоксилин и эозин окрашивание на участках легких, собранные в течение 20 недель после инфекции, подтверждают образование крупных опухолей, а также образование аденомы и аденокарциномы.
Важно не путать опухоли легких, которые являются динамическими, с ложными срабатываниями, которые являются статичными. Поскольку квалификация количества опухоли в этом методе относительна, мы предлагаем использовать дополнительные методы, такие как окрашивание Петри. Эта модель позволяет проводить прямую оценку влияния генетических аберраций или стратегий лечения на развитие рака легких у мышей.
