Die Bedeutung dieses Protokolls liegt in der Echtzeit-Erkennbarkeit der Lungentumoren, die sich spontan in diesem Mausmodell entwickelt haben, von der Tumorinitiierung bis zur Tumorprogression. Der Vorteil dieser Technik ist, dass nicht-invasiv ist, ist nur grundlegende Fähigkeiten erforderlich und ermöglichen es uns direkt die Wirkung des Medikaments und Behandlung von Interesse zu überwachen. Lungentumorprogression kann auch in Gegenwart oder Abwesenheit eines Gens von Interesse bewertet werden.
Mit dieser Analyse können neuartige Behandlungsstrategien potenziell auf die Klinik ausgedehnt werden. Sieben und 18 Wochen nach der lentiviralen Intubation schalten Sie die Heizpumpe für das Ultraschallgel und den Temperaturmonitor ein und richten Sie einen 33 Grad Celsius Inkubator ein. Stellen Sie den 3D-Motor auf das integrierte Schienensystem und bestätigen Sie, dass das Motor- und Wandler-Montagesystem an Ort und Stelle befestigt sind.
Schließen Sie einen 40-Hertz-Frequenzwandler an den 3D-Motor an und eröffnen Sie eine neue Studie in der Ultraschallsoftware. Geben Sie im neuen Studienfenster den Studiennamen ein. Geben Sie im Seriennamensfenster den Seriennamen und alle anderen relevanten Informationen ein.
Nachdem Sie auf Fertig geklickt haben, wählen Sie den Messumformertyp aus. Das Programm wechselt in den B-Modus. Stellen Sie eine Heizlampe in eine bequeme Position über der Tierplattform und bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Pedalreflex in der anästhesierten Experimentellen Maus.
Legen Sie die Maus auf der Tierplattform in cubitus ventral und tragen Salbe auf die Augen des Tieres. Sichern Sie die Gliedmaßen fest mit Klebeband an der Plattform und tragen Sie eine dünne Schicht des erwärmten Ultraschallgels auf die Brust des Tieres auf. Verwenden Sie den Höhenregler, um die Erfassungssonde zu senken, bis sie die Oberfläche der Mausbrust berührt, und positionieren Sie die Sonde so, dass das Herz der Maus ungefähr zentriert ist.
Verwenden Sie dann die Mikroknöpfe, um Bilder der gesamten Brust von beiden Extremitäten in der Querausrichtung zu erfassen. Idealerweise 500 Bilder pro Maus zu sammeln. Wenn alle Bilder aufgenommen wurden, reinigen Sie das Gel von der Brust der Maus und legen Sie das Tier in den wärmenden Brutkasten.
Für die 2D-Analyse der Ultraschallbilder öffnen Sie die erfassten Rahmen in der Ultraschallsoftware und scannen die Rahmen manuell nach Tumoren. Bei kleinen anitiierenden Tumoren sollte die Anzahl der Beelines periodisch alle 10 Rahmen für die gesamte Länge der 500 erhaltenen Rahmen gezählt werden. Für 2D-Messungen großer Tumoren verwenden Sie das lineare Werkzeug, um die Breite und Länge des vorhandenen Tumors zu messen, und berechnen Dann das Volumen der Tumoren mit der Formel.
Sieben Wochen nach einer intratrachealen Infektion wird eine Ultraschall-Bildgebung durchgeführt, um die verschiedenen Arten von Vorläuferläsionen zu visualisieren, die im experimentellen Mausmodell nach der Injektion auftreten. Diese beeline identifizierten Vorstufenläsionen können vom Auge gezählt werden und stellen kleine Tumoren auf der Oberfläche der Lunge dar. Die Streuung dieser Daten ermöglicht die Quantifizierung der Tumoren innerhalb der Versuchsmäuse, um die Schätzung der relativen Tumorzahl pro Tier zu ermöglichen.
Nach 18 Wochen nach der Infektion treten große Tumoren als tiefe Spalten auf, die die Pluraloberfläche unterbrechen, die innerhalb der Ultraschallsoftware gemessen werden können. Das relative Tumorvolumen kann dann für statistische Analysen quantifiziert werden. Hämatoxylin- und Eosinfärbungen an Lungenabschnitten, die nach einer 20-wöchigen Infektion geerntet wurden, bestätigen die Bildung großer Tumoren sowie die Bildung von Adenom und Adenokarzinom.
Es ist wichtig, die lungentumoren, die dynamisch sind, nicht mit falschen Positivmeldungen zu verwechseln, die statisch sind. Da die Qualifizierung der Tumornummer des Volumens bei dieser Methode relativ ist, empfehlen wir, zusätzliche Methoden wie Petrifärbung zu verwenden. Dieses Modell ermöglicht eine direkte Bewertung der Auswirkungen genetischer Aberrationen oder Behandlungsstrategien auf die Entwicklung von Lungenkrebs bei Mäusen.
