Il significato di questo protocollo sta nella rilevabilità in tempo reale dei tumori polmonari che si sono sviluppati spontaneamente in questo modello di topo, dall'iniziazione tumorale alla progressione tumorale. Il vantaggio di questa tecnica è che non è invasivo, richiede solo abilità di base e ci consente di monitorare direttamente l'effetto del farmaco e il trattamento di interesse. La progressione del tumore del polmone può anche essere valutata in presenza o assenza di un gene di interesse.
Utilizzando questa analisi, le nuove strategie di trattamento possono essere potenzialmente estese alla clinica. Sette e 18 settimane dopo l'intubazione lentivirale, accendere la pompa di riscaldamento per il gel ad ultrasuoni e il monitor della temperatura e impostare un incubatore di 33 gradi celsius. Posizionare il motore 3D sul sistema ferroviario integrato e verificare che il sistema di montaggio del motore e del trasduttore sia fissato in posizione.
Collega un trasduttore di frequenza da 40 hertz al motore 3D e apri un nuovo studio nel software ad ultrasuoni. Nella nuova finestra di studio immettere il nome dello studio. Nella finestra nome serie immettere il nome della serie e qualsiasi altra informazione pertinente.
Dopo aver fatto clic su Fatto, selezionate il tipo di trasduttore. Il programma cambierà in modalità B. Posizionare una lampada riscaldante in una posizione comoda sopra la piattaforma animale e confermare la mancanza di risposta al riflesso del pedale nel mouse sperimentale anestetizzato.
Posizionare il mouse sulla piattaforma animale nel ventrale cubito e applicare unguento agli occhi dell'animale. Fissare saldamente gli arti alla piattaforma con del nastro adesivo e applicare un sottile strato del gel ad ultrasuoni riscaldato sul petto dell'animale. Utilizzare la manopola di controllo dell'altezza per abbassare la sonda di acquisizione fino a tocchi la superficie del torace del mouse e posizionare la sonda in modo che il cuore del mouse sia approssimativamente centrato.
Quindi utilizzare le micro manopole per acquisire immagini dell'intero torace da entrambe le estremità nell'orientamento trasversale. Raccolta ideale di 500 fotogrammi per mouse. Quando tutte le immagini sono state catturate, pulire il gel dal petto del mouse e posizionare l'animale nell'incubatrice riscaldante.
Per l'analisi 2D delle immagini ad ultrasuoni, aprire i fotogrammi acquisiti nel software ad ultrasuoni e scansionare manualmente i fotogrammi alla ricerca di tumori. Per i tumori piccoli che iniziano, contare periodicamente il numero di beeline ogni 10 fotogrammi per l'intera lunghezza dei 500 fotogrammi acquisiti. Per le misurazioni 2D di tumori di grandi dimensioni utilizzare lo strumento lineare per misurare la larghezza e la lunghezza del tumore presente, quindi calcolare il volume dei tumori utilizzando la formula.
Sette settimane dopo l'infezione intra tracheale, viene eseguita l'imaging ad ultrasuoni per visualizzare i vari tipi di lesioni precursori che si verificano nel modello sperimentale di topo dopo l'iniezione. Queste lesioni precursori identificate dalla beelina possono essere contate dall'occhio e rappresentano piccoli tumori sulla superficie dei polmoni. La traccia a dispersione di questi dati consente la quantificazione dei tumori all'interno dei topi sperimentali per consentire la stima del numero relativo di tumori per animale.
A 18 settimane dopo l'infezione, i tumori di grandi dimensioni appaiono come fessure profonde che interrompono la superficie plurale che può essere misurata all'interno del software ad ultrasuoni. Il volume relativo del tumore può quindi essere quantificato per l'analisi statistica. La colorazione di ematossilina ed eosina sulle sezioni polmonari raccolte a 20 settimane dopo l'infezione conferma la formazione di tumori di grandi dimensioni e la formazione di adenoma e adenocarcinoma.
È importante non confondere i tumori polmonari, che sono dinamici, con falsi positivi, che sono statici. Poiché la qualificazione del numero tumorale del volume è relativa in questo metodo, suggeriamo di utilizzare metodi aggiuntivi, come la colorazione di Petri. Questo modello consente una valutazione diretta degli effetti delle aberrazioni genetiche o delle strategie di trattamento sullo sviluppo del cancro ai polmoni nei topi.
