Este es un modelo económico y reproducible de trasplante cardíaco. Se puede utilizar tanto para mejorar las habilidades microquirúrgicas como para permitir el uso de cepas de ratón modificadas genéticamente como donantes o receptores. La técnica incluye ampliamente todo el manejo del dolor y la complejidad anestésica de la cirugía humana normal para limitar la morbilidad después de la cirugía.
Este modelo es crítico para estudiar la inmunidad inducida quirúrgicamente, el efecto del desajuste en el rechazo del trasplante y la longevidad del trasplante. Los enfoques quirúrgicos generales de este modelo se pueden aplicar en forma modificada a otros trasplantes de órganos sólidos de ratón. La escala microscópica y las limitaciones de tiempo asociadas dejan un pequeño margen de error.
La clave del éxito es la práctica regular con supervisión profesional, proporcionando retroalimentación específica sobre áreas de dificultad. Liu Liu, una asistente de investigación de mi laboratorio. Ayudando a los procedimientos quirúrgicos estarán el Dr. Wen Hua Huang, la Sra. Jas Kaur y la Sra. Xiao Zhang.
Después de anestesiar y retirar el ratón de la cámara de inducción, elimine el vello afeitando estrechamente el abdomen ventral con cortaúñas. En el caso del donante, afeite el área que se extiende desde los genitales hasta el margen superior del tórax ventral. Asegúrese de que el área afeitada alcance la línea medioaxilar lateralmente.
Controle la temperatura insertando una sonda rectal lubricada limpia en el recto del animal y luego asegurándola a la placa quirúrgica con cinta de microporos. Evalúe la profundidad anestésica observando las respuestas a la estimulación de la pata o la cola de la presión aplicada por fórceps traumáticos, el reflejo palpebral y el tono muscular. Mida la frecuencia respiratoria observando el movimiento de la pared torácica mientras observa el esfuerzo respiratorio para evaluar el volumen corriente, y luego calcule la frecuencia respiratoria como se describe en el manuscrito.
Una vez que el sitio quirúrgico se desinfecta con aplicadores estériles con punta de algodón, aplique clorhexidina con un movimiento circular desde el centro del sitio quirúrgico hasta los bordes tres veces, seguido de una combinación de clorhexidina y etanol en el mismo patrón. Prepare el campo quirúrgico colocando cortinas quirúrgicas estériles a cada lado de la placa quirúrgica como el sitio para colocar los instrumentos estériles. Después de hacer una pequeña abertura de forma ovalada en la cortina, coloque la cortina fenestrada en el sitio de incisión propuesto.
Después de preparar al animal como se demostró anteriormente, aplique lubricante para los ojos. Usando una jeringa de insulina de calibre 29 a lo largo del sitio de incisión planificado, inyecte por vía subcutánea una dosis de bupivacaína basada en el peso en el abdomen ventral y busque una línea recta de ampollas visibles que cubra la extensión de la incisión planificada. Luego, use una hoja de bisturí quirúrgico estéril para hacer una incisión ventral en la línea media de la piel con un aumento de ocho veces.
Asegúrese de que la laparotomía se extienda desde la parte inferior del abdomen hasta el margen costal. E inserte un retractor para maximizar el campo quirúrgico. Humedezca el segmento de gasa estéril con una solución calentada de cloruro de sodio al 0,9% y colóquela en el aspecto superior del sitio quirúrgico.
Ahora, use bastoncillos de algodón estériles humedecidos para eviscerar suavemente los intestinos. Colóquelos encima de esta gasa y envuelva la gasa alrededor del órgano. Usando una combinación de aplicadores con punta de algodón y pinzas de sutura corporal redonda, libere y movilice la aorta abdominal y la vena cava inferior de los tejidos circundantes con una técnica de disección roma.
Asegúrese de que el área de aclaramiento esté entre el aspecto infrarrenal de los vasos y por encima de la bifurcación de la aorta. Después de identificar los vasos abdominales posteriores, tire suavemente de la aorta en una dirección alejada de la columna vertebral con fórceps. Haga un canal a cada lado de estos vasos cefalocaudalmente pasando las pinzas curvas posteriores a los vasos abdominales.
Ligue cada vaso identificado y movilizado en la zona anastomótica planificada utilizando longitudes de nylon 10-O atado con instrumentos en los nudos del cirujano con un lanzamiento adicional. Aísle el sitio anastomótico de la circulación instalando una pinza quirúrgica en la cabeza del vaso abdominal y los extremos del mimo. Asegúrese de que las abrazaderas atraviesan ambos vasos en un grado suficiente para garantizar una oclusión completa.
Use fórceps en la mano no dominante para estabilizar la aorta. Realizar una aortotomía con una aguja de calibre 30 en la cara anterior de la aorta. Extienda la aortotomía con tijeras microquirúrgicas de punta recta.
Para realizar la adenotomía, use fórceps rectos y aplique una tracción anterior suave a la vena cava inferior en el punto en línea con el centro de la aortotomía. Use tijeras microquirúrgicas curvas con el lado cóncavo mirando hacia atrás para extirpar un segmento de la vena cava inferior de igual longitud a la aortotomía. Lave el interior de los vasos abiertos de la sangre restante con una solución de cloruro de sodio heparinizado.
Coloque el corazón del donante en el abdomen y asegúrese de que la aorta ascendente esté directamente junto a la aortografía abdominal y que el corazón se gire, de modo que la arteria pulmonar se pueda dibujar para la segunda anastomosis. Usando nylon 10-O, coloque una sutura de estancia entre la posición 12:00 de la aortotomía y la extremidad correspondiente de la luz de la aorta ascendente. Usando pinzas de punta recta en un soporte de agujas microquirúrgicas, átelo con tres lanzamientos posteriores del nudo de un cirujano y corte los extremos para dejar aproximadamente dos milímetros de sutura.
Coloque una segunda sutura de estancia entre la posición 6:00 de la aortectomía y el aspecto correspondiente de la aorta ascendente. Como esta sutura también servirá como base para suturas de carrera posteriores, deje al menos 10 milímetros de la cola para la amarre final. Coloque una sutura continua de nylon 10-O de manera ascendente para oponerse al borde derecho anatómico de la aortotomía y al borde libre correspondiente de la aorta ascendente.
Realice este procedimiento con cuidado y use aproximadamente cuatro lanzamientos para esta línea. Pase el extremo libre de la sutura alrededor de la sutura distal antes de colocar una segunda sutura continua por el lado anatómico izquierdo para afectar la aposición con el borde libre restante de la aortotomía. Ate la sutura a la cola usando un nudo de cirujano con dos lanzamientos adicionales.
Coloque una sutura de estancia entre la posición de las 12:00 de la vena cava inferior, la venotomía y la extremidad correspondiente de la luz de la arteria pulmonar. Desde este punto de anclaje, coloque una sutura continua que corre con discernimiento entre el borde anatómico izquierdo de la arteria pulmonar y el borde correspondiente de la venotomía. Pase la aguja a través de la posición 6:00 de la venotomía y la extremidad correspondiente de la luz de la arteria pulmonar.
De manera ascendente, pase la aguja a través del borde libre restante de la arteria pulmonar y la derecha anatómica de la venotomía. Use un promedio de cuatro lanzamientos para esta línea y luego dibuje los bordes libres finales de la arteria pulmonar y la venotomía juntos. Ate el extremo libre de la sutura al anclaje y, con un instrumento, ate el nudo del cirujano con dos lanzamientos adicionales y corte el hilo adicional.
Revise los vasos en busca de torsión, lo que interferiría con el flujo sanguíneo. Coloque la espuma de gel sobre la línea de sutura. Coloque dos piezas de espuma de gel de aproximadamente dos milímetros alrededor de ellas y moldee para que todas las líneas de sutura visibles queden cubiertas.
Suelte las pinzas vasculares comenzando con la pinza de mimo y luego la pinza de cefalo. Como se espera una pequeña cantidad de hemorragia, coloque preventivamente los aplicadores con punta de algodón sobre los sitios anastomóticos para proporcionar presión. Después de arreglar las fugas visibles, revise el corazón para ver si hay pulsaciones.
Si está ausente, revise los vasos cardíacos para ver si están torcidos, luego reposicione los intestinos sobre y alrededor del corazón y humedezca la cavidad peritoneal con una solución de cloruro de sodio calentada si parece seca. Usando la técnica continua no interrumpida, cierre la cavidad abdominal usando monofilamento proleno 6-O no absorbible suturando primero la capa muscular, seguida de la piel. Una vez que el receptor se retira de la junta quirúrgica y fuera de la anestesia, administre un mililitro de solución salina tibia por vía subcutánea y coloque al receptor en una jaula preparada con calentamiento para observación según los protocolos de recuperación postoperatoria.
Se observó recuperación y aceptación completas en el caso de trasplantes cardíacos murinos heterotópicos singénicos y congénicos durante 100 días después de la cirugía. Sin embargo, se observó un rechazo rápido tan pronto como siete días después de la cirugía en caso de trasplantes de corazón murino heterotópicos no compatibles. Durante las anastomosis, debe mantener la conciencia de dónde se encuentra su sutura dentro del campo quirúrgico.
De lo contrario, puede provocar daños críticos en las estructuras o enredos en la sutura. Estas técnicas microquirúrgicas de disección y anastomosis son altamente aplicables a otros modelos quirúrgicos de mamíferos pequeños, incluido el trasplante heterotópico de riñón y hepático ortotópico, lo que permite a los investigadores estudiar el rechazo del injerto.
