Trata-se de um modelo econômico e reprodutível de transplante cardíaco. Ele pode ser usado tanto para melhorar as habilidades microcirúrgicas quanto para permitir o uso de linhagens de camundongos geneticamente modificados como doadores ou receptores. A técnica inclui amplamente todo o tratamento da dor e complexidade anestésica da cirurgia humana normal para limitar a morbidade após a cirurgia.
Esse modelo é crítico para estudar a imunidade induzida cirurgicamente, o efeito do descompasso na rejeição do transplante e a longevidade do transplante. As abordagens cirúrgicas gerais deste modelo podem ser aplicadas de forma modificada a outros transplantes de órgãos sólidos de camundongos. A escala microscópica e as restrições de tempo associadas deixam uma pequena margem de erro.
A chave para o sucesso é a prática regular com supervisão profissional, fornecendo feedback específico sobre as áreas de dificuldade. Quem demonstrará o procedimento será a Sra. Liu Liu, assistente de pesquisa do meu laboratório. Auxiliando os procedimentos cirúrgicos estarão o Dr. Wen Hua Huang, a Sra. Jas Kaur e a Sra. Xiao Zhang.
Depois de anestesiar e remover o camundongo da câmara de indução, remova os pelos raspando bem o abdome ventral usando cortadores. No caso do doador, raspar a área que se estende da genitália até a margem superior do tórax ventral. Certifique-se de que a área raspada atinja lateralmente a linha axilar média.
Monitore a temperatura inserindo uma sonda retal lubrificada limpa no reto do animal e, em seguida, prendendo-a à prancha cirúrgica usando fita adesiva de micropore. Avaliar a profundidade anestésica observando as respostas à estimulação da pata ou cauda a partir da pressão aplicada por pinça traumática, reflexo palpebral e tônus muscular. Medir a frequência respiratória observando o movimento da parede torácica enquanto observa o esforço respiratório para avaliar o volume corrente e, em seguida, calcular a frequência respiratória conforme descrito no manuscrito.
Uma vez desinfetado o sítio cirúrgico com aplicadores estéreis com ponta de algodão, aplicar clorexidina em movimento circular do centro cirúrgico até as bordas três vezes, seguido de uma combinação de clorexidina e etanol no mesmo padrão. Prepare o campo cirúrgico colocando campos cirúrgicos estéreis em ambos os lados da placa cirúrgica como o local para colocar instrumentos estéreis. Depois de fazer uma pequena abertura oval no drape, coloque o drape fenestrado no local da incisão proposta.
Após o preparo do animal, conforme demonstrado anteriormente, aplique lubrificante ocular. Usando uma seringa de insulina de calibre 29 ao longo do local planejado da incisão, injete subcutaneamente uma dose de bupivacaína com base no peso no abdome ventral e procure uma linha reta de sangramento visível que cubra a extensão da incisão planejada. Em seguida, utilizar lâmina cirúrgica estéril de bisturi para incisão ventral na linha média da pele sob aumento de oito vezes.
Certifique-se de que a laparotomia se estenda do abdome inferior até o rebordo costal. E inserir um afastador para maximizar o campo cirúrgico. Umedeça o segmento de gaze estéril com solução de cloreto de sódio a 0,9% aquecida e posicione-o na face superior do sítio cirúrgico.
Agora, use cotonetes estéreis umedecidos para eviscerar suavemente os intestinos. Posicione-os em cima dessa gaze e envolva a gaze ao redor do órgão. Usando uma combinação de aplicadores com ponta de algodão e pinça de sutura de corpo redondo, libere e mobilize a aorta abdominal e a veia cava inferior dos tecidos circundantes com uma técnica de dissecção romba.
Certifique-se de que a área de depuração esteja entre o aspecto infrarrenal dos vasos e acima da bifurcação da aorta. Após a identificação dos vasos abdominais posteriores, puxe suavemente a aorta em direção para longe da coluna vertebral com pinças. Faça um canal em ambos os lados desses vasos cefalocraticamente, passando a pinça curva posterior aos vasos abdominais.
Ligate cada vaso identificado e mobilizado na zona anastomótica planejada usando comprimentos de náilon 10-O amarrados com instrumentos nos nós do cirurgião com um lançamento adicional. Isole o local da anastomose da circulação instalando uma pinça cirúrgica na cabeça e nas extremidades do vaso abdominal. Certifique-se de que as pinças atravessam ambos os vasos em um grau suficiente para garantir a oclusão completa.
Use pinça na mão não dominante para fixar a aorta. Realizar aortotomia com agulha calibre 30 na face anterior da aorta. Estender a aortotomia com tesoura microcirúrgica de ponta reta.
Para a realização da adenotomia, utilizar pinça reta e aplicar suave tração anterior à veia cava inferior no ponto alinhado com o meio da aortotomia. Utilizar tesoura microcirúrgica curva com o lado côncavo voltado anteriormente para remover um segmento de veia cava inferior de comprimento igual ao da aortotomia. Lave o interior dos vasos abertos do sangue restante com solução de cloreto de sódio heparinizada.
Coloque o coração doador no abdome e certifique-se de que a aorta ascendente esteja diretamente ao lado da aortotomia abdominal e o coração seja rotacionado, para que a artéria pulmonar possa ser puxada para a segunda anastomose. Com o uso de náilon 10-O, colocar um ponto de permanência entre a posição 12:00 da aortotomia e a extremidade correspondente da luz da aorta ascendente. Usando pinça de ponta reta em um porta-agulha microcirúrgico, amarre-a com três lances subsequentes do nó de um cirurgião e corte as extremidades para deixar aproximadamente dois milímetros de sutura.
Colocar um segundo ponto de permanência entre a posição 6:00 da aortotomia e o aspecto correspondente da aorta ascendente. Como essa sutura também servirá como base para suturas subsequentes, deixe pelo menos 10 milímetros da cauda para a amarração final. Coloque uma sutura contínua contínua de náilon 10-O de forma ascendente para contrapor a borda anatômica direita da aortotomia e a borda livre correspondente da aorta ascendente.
Execute este procedimento com cuidado e use aproximadamente quatro arremessos para esta linha. Passar a extremidade livre da sutura ao redor da sutura de permanência distal antes de colocar uma segunda sutura contínua e contínua descendo pelo lado esquerdo anatômico para afetar a aposição com a borda livre remanescente da aortotomia. Amarre a sutura à cauda usando um nó do cirurgião com dois arremessos adicionais.
Coloque uma sutura de permanência entre a posição 12:00 da veia cava inferior, a venotomia e a extremidade correspondente da luz da artéria pulmonar. A partir desse ponto de ancoragem, colocar uma sutura contínua e contínua entre a borda anatômica esquerda da artéria pulmonar e a borda correspondente da venotomia. Passar a agulha através da posição 6:00 da venotomia e da extremidade correspondente da luz da artéria pulmonar.
De forma ascendente, passar a agulha pela borda livre remanescente da artéria pulmonar e anatômica direita da venotomia. Use uma média de quatro arremessos para essa linha e, em seguida, desenhe as bordas livres finais da artéria pulmonar e da venotomia juntas. Amarre a extremidade livre da sutura à âncora e, usando um instrumento, amarre o nó do cirurgião com dois lances adicionais e corte o fio extra.
Verifique se os vasos estão torcidos, o que interferiria no fluxo sanguíneo. Posicione a espuma de gel sobre a linha de sutura. Coloque dois pedaços de espuma de gel de aproximadamente dois milímetros ao redor deles e molde de modo que todas as linhas de sutura visíveis sejam cobertas.
Solte as pinças vasculares começando com a pinça de coddle e, em seguida, a pinça cefálica. Como uma pequena quantidade de hemorragia é esperada, posicione preventivamente aplicadores com ponta de algodão sobre os locais da anastomose para fornecer pressão. Depois de corrigir os vazamentos visíveis, verifique se há pulsação no coração.
Se estiver ausente, verifique se os vasos cardíacos estão torcendo, reposicione os intestinos sobre e ao redor do coração e umedeça a cavidade peritoneal com solução de cloreto de sódio aquecida se parecer seca. Utilizando a técnica contínua e ininterrupta, fechar a cavidade abdominal com monofilamento de prolene 6-O inabsorvível, suturando-se primeiro a camada muscular, seguida da pele. Uma vez retirado da prancha cirúrgica e fora do anestésico, administrar um mililitro de soro fisiológico aquecido por via subcutânea e colocá-lo em uma gaiola preparada com aquecimento para observação conforme protocolos de recuperação pós-operatória.
Recuperação total e aceitação foram observadas no caso de transplantes cardíacos murinos heterotópicos singênicos e congênicos por 100 dias pós-operatórios. No entanto, a rejeição rápida foi observada logo sete dias após a cirurgia em caso de grandes transplantes cardíacos heterotópicos heterotópicos. Durante as anastomoses, você deve manter a consciência de onde sua sutura está dentro do campo cirúrgico.
Não fazer isso pode levar a danos críticos nas estruturas ou emaranhamento da sutura. Essas técnicas microcirúrgicas de dissecção e anastomose são altamente aplicáveis a outros modelos cirúrgicos de pequenos mamíferos, incluindo o transplante renal heterotópico e o transplante ortotópico de fígado, permitindo aos pesquisadores estudar a rejeição do enxerto.
