Это экономичная и воспроизводимая модель трансплантации сердца. Он может быть использован как для улучшения микрохирургических навыков, так и для использования генетически модифицированных штаммов мышей в качестве доноров или реципиентов. Этот метод широко включает в себя все обезболивание и анестезиологическую сложность обычной хирургии человека, чтобы ограничить заболеваемость после операции.
Эта модель имеет решающее значение для изучения иммунитета, вызванного хирургическим вмешательством, влияния несоответствия на отторжение трансплантата и продолжительности жизни трансплантата. Общие хирургические подходы этой модели могут быть применены в модифицированном виде к другим трансплантациям солидных органов мышей. Микроскопический масштаб и связанные с ним временные ограничения оставляют небольшую погрешность.
Ключом к успеху является регулярная практика с профессиональным наблюдением, обеспечивающая конкретную обратную связь по трудным областям. Продемонстрирует процедуру г-жа Лю Лю, научный сотрудник моей лаборатории. Помогать в хирургических процедурах будут доктор Вэнь Хуа Хуан, г-жа Джас Каур и г-жа Сяо Чжан.
После обезболивания и извлечения мыши из индукционной камеры удалите волосы, тщательно побрив брюшную полость живота с помощью машинок для стрижки. В случае донора побрейте область, простирающуюся от гениталий до верхнего края вентральной грудной клетки. Убедитесь, что выбритая область достигает среднемышечной линии сбоку.
Контролируйте температуру, вставляя чистый смазанный ректальный зонд в прямую кишку животного, а затем закрепляя его на хирургической доске с помощью микропористой ленты. Оцените глубину анестезии, наблюдая за реакцией на стимуляцию лапы или хвоста от давления, оказываемого травматическими щипцами, пальпебральным рефлексом и мышечным тонусом. Измерьте частоту дыхания, наблюдая за движением грудной стенки при наблюдении за дыхательным усилием, чтобы оценить дыхательный объем, а затем рассчитайте частоту дыхания, как описано в рукописи.
После того, как место операции продезинфицировано с помощью стерильных аппликаторов с ватными наконечниками, нанесите хлоргексидин круговыми движениями от центра операционного участка к краям трижды, а затем комбинацию хлоргексидина и этанола по той же схеме. Подготовьте операционное поле, разместив стерильные хирургические простыни по обе стороны от хирургической доски в качестве места для размещения стерильных инструментов. Сделав небольшое отверстие овальной формы в драпировке, поместите фенестрированную драпировку на предполагаемое место разреза.
После подготовки животного, как показано ранее, нанесите смазку для глаз. Используя инсулиновый шприц 29-го калибра вдоль запланированного места разреза, подкожно введите дозу бупивакаина в вентральную брюшную полость и найдите прямую линию видимого блебба, которая покрывает степень запланированного разреза. Затем используйте стерильное лезвие хирургического скальпеля, чтобы сделать вентральный разрез кожи по средней линии под восьмикратным увеличением.
Убедитесь, что лапаротомия охватывает нижнюю часть живота до реберного края. И вставьте втягивающее устройство, чтобы максимизировать операционное поле. Смочите сегмент стерильной марли подогретым 0,9% раствором хлорида натрия и расположите его на верхней стороне места операции.
Теперь используйте влажные стерильные ватные палочки, чтобы аккуратно выпотрошить кишечник. Положите их поверх этой марли и оберните марлей вокруг органа. Используя комбинацию аппликаторов с ватными наконечниками и щипцов для наложения швов на круглом теле, освободите и мобилизуйте брюшную аорту и нижнюю полую вену от окружающих тканей с помощью техники тупого рассечения.
Убедитесь, что область клиренса находится между инфраренальной стороной сосудов и над бифуркацией аорты. После выявления задних сосудов брюшной полости аккуратно потяните аорту в направлении в сторону от позвоночника с помощью щипцов. Сделайте канал по обе стороны от этих сосудов головокаудально, пройдя изогнутыми щипцами кзади к брюшным сосудам.
Лигат каждого сосуда идентифицирован и мобилизован в запланированной зоне анастомоза с использованием отрезков нейлона 10-О, связанных инструментами в узлы хирурга с одним дополнительным броском. Изолируйте анастомозный участок от кровообращения, установив хирургический зажим на головке брюшного сосуда и на концах брюшного сосуда. Убедитесь, что зажимы пересекают оба сосуда в достаточной степени, чтобы обеспечить полную окклюзию.
Используйте щипцы в недоминантной руке, чтобы стабилизировать аорту. Выполните аортотомию с помощью иглы 30-го калибра в передней части аорты. Расширьте аортотомию с помощью микрохирургических ножниц с прямым наконечником.
Для выполнения аденотомии используйте прямые щипцы и нанесите мягкое переднее вытяжение на нижнюю полую вену в точке, совпадающей с серединой аортотомии. Используйте изогнутые микрохирургические ножницы вогнутой стороной, обращенной вперед, чтобы удалить сегмент нижней полой вены равной длины длине аортотомии. Промыть внутренности открытых сосудов от остатков крови гепаринизированным раствором натрия хлорида.
Поместите донорское сердце в брюшную полость и убедитесь, что восходящая аорта находится непосредственно рядом с абдоминальной аортотомией, а сердце вращается, чтобы легочную артерию можно было провести поперек для второго анастомоза. Используя нейлон 10-О, наложите шов между положением аортотомии 12:00 и соответствующим концом просвета восходящей аорты. Используя щипцы с прямыми наконечниками в микрохирургическом иглодержателе, завяжите его тремя последующими бросками хирургического узла и обрежьте концы, чтобы оставить примерно два миллиметра шва.
Наложите второй шов между положением 6:00 аортотомии и соответствующим аспектом восходящей аорты. Поскольку этот шов также будет служить основой для последующих беговых швов, оставьте не менее 10 миллиметров хвоста для окончательного завязывания. Наложите непрерывный ходовой шов из нейлона 10-O по восходящей манере, чтобы противостоять анатомическому правому краю аортотомии и соответствующему свободному краю восходящей аорты.
Выполняйте эту процедуру осторожно и используйте примерно четыре броска для этой линии. Проведите свободный конец шва вокруг дистального шва, прежде чем накладывать второй непрерывный шов вниз по анатомической левой стороне, чтобы повлиять на аппозицию с оставшимся свободным краем аортотомии. Завяжите шов на хвосте с помощью узла хирурга двумя дополнительными бросками.
Наложите шов между положением 12:00 нижней полой вены, венотомией и соответствующей конечностью просвета легочной артерии. От этой точки привязки поместите непрерывный шов между анатомическим левым краем легочной артерии и соответствующим краем венотомии. Пропустите иглу через положение венотомии 6:00 и соответствующую конечность просвета легочной артерии.
Вверх пропустите иглу через оставшийся свободный край легочной артерии и анатомическую правую часть венотомии. Используйте в среднем четыре броска для этой линии, а затем нарисуйте последние свободные края легочной артерии и венотомии вместе. Свободный конец шва привяжите к якорю и с помощью инструмента завяжите узел хирурга двумя дополнительными бросками и отрежьте лишнюю нить.
Проверьте сосуды на предмет скручивания, которое будет мешать кровотоку. Расположите гелевую пену над линией шва. Поместите вокруг них два кусочка примерно двухмиллиметровой гелевой пены и сформируйте так, чтобы все видимые линии шва были покрыты.
Отпустите сосудистые зажимы, начиная с зажима, а затем зажима для головного мозга. Поскольку ожидается небольшое кровоизлияние, упреждающе расположите аппликаторы с ватными наконечниками над анастомозными участками, чтобы обеспечить давление. После устранения видимых протечек проверьте сердце на пульсацию.
Если он отсутствует, проверьте сердечные сосуды на предмет скручивания, затем переместите кишечник над сердцем и вокруг него и смочите брюшную полость подогретым раствором хлорида натрия, если он кажется сухим. Используя непрерывную непрерывную технику, закройте брюшную полость с помощью нерассасывающейся мононити пролена 6-О, сшивая сначала мышечный слой, а затем кожу. После того, как реципиент будет удален из хирургического кабинета и снят с анестетика, введите один миллилитр теплого физиологического раствора подкожно и поместите реципиента в подготовленную клетку с прогревом для наблюдения в соответствии с протоколами послеоперационного восстановления.
Полное выздоровление и принятие наблюдались в случае сингенных и конгенных гетеротопических трансплантаций сердца мышей в течение 100 дней после операции. Тем не менее, быстрое отторжение наблюдалось уже через семь дней после операции в случае крупных несоответствующих гетеротопических трансплантаций сердца мышей. Во время анастомоза вы должны знать, где находится ваш шов в операционном поле.
Несоблюдение этого требования может привести к критическому повреждению конструкций или запутыванию шва. Эти микрохирургические методы диссекции и анастомоза широко применимы к другим хирургическим моделям мелких млекопитающих, включая гетеротопическую трансплантацию почки и ортотопической трансплантации печени, что позволяет исследователям изучать отторжение трансплантата.
