Comience por usar una mascarilla, una cubierta para el cabello y una bata de laboratorio o uniformes médicos limpios. A continuación, coloque el ratón anestesiado sobre una superficie limpia separada del área de la cirugía y colóquelo con un cono de nariz que administre 1,5% de isoflurano con 21% de oxígeno. A continuación, inyecte buprenorfina por vía subcutánea en la zona torácica cervical dorsal.
También inyecte heparina por vía intraperitoneal para prevenir la formación de trombos durante el período de oclusión. Aplique ungüento oftálmico en los ojos para prevenir daños en la córnea y elimine el vello del abdomen ventral con una maquinilla. Mueva el ratón a la manta de agua caliente en el área de la cirugía.
De nuevo, colóquelo con un cono nasal que suministre isoflurano. A continuación, coloque el ratón en decúbito dorsal y asegure las extremidades a la mesa con cinta quirúrgica. Controle la temperatura corporal del animal con un termómetro rectal específico para roedores.
Después de desinfectar a fondo el abdomen, realice una prueba de pellizco en los dedos de los pies para asegurarse de que el animal esté completamente anestesiado. Finalmente, use guantes estériles y cubra asépticamente el sitio quirúrgico. Primero, haga una incisión abdominal ventral de tres a cinco centímetros en la línea media de la piel con una hoja de bisturí número 15.
Separe 0,5 centímetros del borde de la piel de la fascia muscular subyacente para permitir la colocación de grapas más adelante. Luego continúe la incisión a través de la pared abdominal a lo largo del alba lineal usando microtijeras accionadas por resorte y coloque un retractor. Coloque almohadillas de gasa estériles humedecidas con solución salina estéril tibia alrededor del área de operación.
Extirpar el intestino delgado de la cavidad abdominal. Dale la vuelta cranealmente y hacia la izquierda del animal, y colócalo sobre las almohadillas humedecidas. Coloque otra gasa humedecida sobre los pañuelos para evitar que se desequen.
Localiza la arteria mesentérica superior, o AME, ventral a la vena cava inferior, caudal a la arteria celíaca y craneal a la arteria renal. Diseccionarlo lejos del tejido conectivo circundante. Coloque un clip microvascular atraumático a lo largo de la base de la AME, donde se ramifica de la aorta abdominal.
Verifique la isquemia del intestino delgado observando el cambio de color de rosa a blanco pálido. Devolver las vísceras a su posición original dentro de la cavidad abdominal durante el período isquémico. Retire el retractor y cubra la incisión con una gasa húmeda.
Después de un período de 45 minutos de isquemia, retire el clip de oclusión. Verifique el restablecimiento del flujo sanguíneo observando una pulsación mesentérica y color enrojecido. Aplique solución salina estéril tibia por vía intraperitoneal para mantener una hidratación adecuada.
A continuación, cierre los músculos abdominales con una sutura de poliglactina 910 6-0. Administre bupivacaína por vía tópica a lo largo de la línea de incisión muscular para aliviar el dolor. Cierre la piel con grapas quirúrgicas o pinzas para heridas.
Regrese el mouse a una cámara tibia sobre una manta de agua circulante. Deje que el ratón se recupere durante 90 minutos y vigile el ratón en busca de signos de dolor o angustia. Después de realizar la eutanasia humanitaria, recoja los tejidos deseados, como los lóbulos del hígado, incluidos los lóbulos lateral izquierdo, mediano izquierdo y mediano derecho.
A continuación, recoja ambos riñones. Corta el riñón izquierdo longitudinalmente y el riñón derecho como una sección transversal. Finalmente, recoja toda la longitud del intestino delgado y grueso.
Para dividir los segmentos del intestino delgado en secciones de igual longitud, dobla el intestino delgado en forma de Z donde la línea superior es el duodeno, la línea media es el yeyuno y la línea inferior es el íleon. La parte restante del intestino es el colon. Enjuague la luz de los segmentos intestinales con solución salina con una jeringa de 10 mililitros fijada con un angiocatéter de calibre 20.
A continuación, corte la longitud de los intestinos con unas tijeras de microdisección y coloque cada segmento intestinal plano con el lado luminal hacia arriba. Con una jeringa de tres mililitros fijada con una aguja de calibre 27, aplique generosamente formol tamponado al 10% gota a gota para cubrir toda la longitud de la mucosa. A continuación, enrolle cada segmento circunferencialmente alrededor de un palillo, asegurándose de que la parte proximal forme la parte interior del rollo y el lumen mire hacia el interior.
Después de enrollar, el intestino debe verse como un rollo suizo. Coloque la espiral del rollo suizo individual boca arriba dentro de los casetes de pañuelos de papel etiquetados por separado. Finalmente, coloque los pañuelos en viales etiquetados llenos de formalina tamponada al 10% para fijarlos a temperatura ambiente.
Después de la IRI intestinal, la tinción con H&E del yeyuno y el íleon de los ratones del grupo simulado mostró vellosidades largas y delgadas sin distorsión. Mientras que las secciones de los ratones en el grupo IRI mostraron áreas de necrosis y hemorragia con embotamiento y distorsión de las vellosidades restantes. Además, el daño microscópico a los tres segmentos del intestino delgado en los animales sometidos a IRI aumentó significativamente en comparación con los que se sometieron a laparotomía simulada.
