Un modèle murin hétérotopique pour étudier la transplantation laryngée

Résumé

Le but de ce manuscrit est de décrire les étapes microchirurgicales nécessaires pour réaliser une greffe de larynx hétérotopique chez la souris. Les avantages de ce modèle murin par rapport à d’autres modèles animaux de transplantation laryngée sont son rapport coût-efficacité et la disponibilité de tests et de données immunologiques.

Résumé

La transplantation hétérotopique laryngée, bien qu’il s’agisse d’une procédure techniquement difficile, offre plus d’analyses scientifiques et d’avantages en termes de coûts par rapport à d’autres modèles animaux. Bien que décrite pour la première fois par Shipchandler et al. en 2009, cette technique n’est pas largement utilisée, peut-être en raison des difficultés d’apprentissage de la technique microchirurgicale et du temps nécessaire pour la maîtriser. Cet article décrit en détail les étapes chirurgicales, ainsi que les pièges potentiels à éviter, afin d’encourager une utilisation efficace de cette technique.

Dans ce modèle, les artères carotides bilatérales du larynx donneur sont anastomosées à l’artère carotide receveuse et à la veine jugulaire externe, ce qui permet le flux sanguin à travers la greffe. Le flux sanguin peut être confirmé en peropératoire par la visualisation du remplissage sanguin dans les artères carotides bilatérales du greffon, la rougeur des glandes thyroïdes du greffon et le saignement des microvaisseaux dans le greffon. Les éléments cruciaux du succès comprennent la préservation délicate des vaisseaux du greffon, la fabrication d’artériotomie et de veinotomie de taille correcte et l’utilisation du nombre approprié de sutures sur les anastomoses artério-artérielles et artério-veineuses pour sécuriser les vaisseaux sans fuite et prévenir l’occlusion.

N’importe qui peut devenir compétent dans ce modèle avec une formation suffisante et effectuer la procédure en environ 3 heures. S’il est réalisé avec succès, ce modèle permet d’effectuer des études immunologiques facilement et à faible coût.

Introduction

Pour les patients souffrant de lésions irréparables du larynx ou d’un cancer du larynx, une laryngectomie totale est souvent la seule option¹. La laryngectomie totale laisse les patients sans la capacité de respirer et de parler par eux-mêmes, en plus d’éprouver une détresse sociale et psychologique². Les patients atteints d’un cancer du larynx qui ont besoin d’une laryngectomie totale sont d’excellents candidats potentiels pour la transplantation laryngée. Alors qu’une transplantation laryngée humaine dans le cadre de lésions laryngées irréparables a été effectuée, l’allotransplantation du larynx est actuellement évitée....

Protocole

Cette recherche a été réalisée en conformité avec le comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux (IACUC) de la Mayo Clinic. Des souris BalbC (âgées de 10 à 12 semaines) ont été utilisées comme donneuses et des souris C57/BL6 (âgées de 10 à 12 semaines) ont été utilisées comme receveuses parce que leurs principaux complexes d’histocompatibilité, H-2Db et H-2Kb, respectivement, sont immunologiquement incompatibles, et donc la réponse immunitaire à la greffe peut être étudiée plus avant. Tous les instruments utilisés pendant la chirurgie ont été stérilisés (voir la figure supplémentaire S1 et la figure supplémentaire S2), ....

Résultats

Confirmation de la réussite de la transplantation
En utilisant le protocole décrit ci-dessus, il est possible d’évaluer le flux sanguin vers le complexe LTE en observant la pulsation de l’artère carotide du donneur après avoir retiré les pinces vasculaires. La pulsation est généralement visible et la coloration rouge immédiate de l’artère donneuse confirme un flux sanguin actif (Figure 4A). Si l’anastomose n’est pas efficace, l’artère n’aura pas d.......

Discussion

L’incidence et la prévalence du cancer du larynx ont augmenté respectivement de 12 % et 24 % au cours des trois dernières décennies, et bon nombre de ces patients subissent une laryngectomie pour le traitement¹⁰. Cette procédure aggrave considérablement la qualité de vie d’une personne et, par conséquent, un traitement alternatif est souhaité. L’allotransplantation composite vascularisée du larynx peut améliorer la capacité d’un patient à respirer et à parler; Cependant, des .......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
#1 Paperclips	Staples	OP-7404	Clips are shaped manually to be used as retractors
1 cc Insulin Syringes	BD	329412	27 G 5/8
10-0 Ethilon Nylon Suture	Ethicon	2870G
25 G Precision Glide Needle	BD	305125	1 in
3 mL Luer-Lok Tip Syringe	BD	309657
30 G Sterile Standard Blunt Needles	Cellink	NZ5300505001
5-0 Monocryl Suture	Ethicon	Y822G
8-0 Ethilon Nylon Suture	Ethicon	2815G
Adson Forceps	Fine Science Tools	11027-12	Straight, 1 x 2 teeth
Adventitia scissors	S&T	SAS-10	19 mm, 10 cm, straight
Angled Forceps	Fine Science Tools	00109-11	45/11 cm
Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment	Akorn Animal Health	59399-162-35
Bandaid Fabric Fingertip	Cardinal Healthcare	299399
Betadine Solution Swabsticks	Purdue Products	67618-153-01
Buprenex Injection	CIII	12495-0757-1	0.3 mg/mL
Clamp applying forceps without lock	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.CAF5	14 cm
Cotton Swabs	Puritan	10806-001-PK
DeBakey forceps
Dermabond Mini	Cardinal Healthcare	315999
Dissecting Boards	Mopec	22-444-314
Falcon Sterile Disposable Petri Dish	Corning	25373-041	35 mm
Fine Scisssors	Fine Science Tools	14029-10	Curved Sharp-Blunt 10 cm
Golden A5 2-Speed Blade Clipper	Oster	008OST-78005-140	#10
Hair Remover Sensitive Formula	Nair	2260000033
Heparin	Meitheal Pharmaceuticals	71288-4O2-10	10,000 USP units per 10 mL
Isoflurane	Piramal Healthcare	66794-013-25
Low-Temp Micro Fine Tip Cautery	Bovie Medical	AA90
Mercian Visibility Background Material	Synovis Micro Companies	VB3	Green
Microvascular Approximator Clamp without Frame	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.ABB11V	0.4-1 mm Vessel Diameter
Mouse face mask kit	Xenotec	XRK-S	Small
Needle holder	S&T	C-14 W	5.5", 8 mm, 0.4 mm
Press n' Seal	Glad	70441
Scalpel	Braun	BA210	10 blade
Single Mini Vessel Clamp	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.ABB11M	.31 (8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Black Pair
Stereomicroscope	Olympus	SZ61
Sterile Alcohol Prep Pads	Fisherbrand	06-669-62
Sterile Disposable Drape Sheets	Dynarex	DYN4410-CASE
Sterile Gauze Pads	Dukal	1212
Sterile Saline	Hospira	236173	NaCl 0.9%
Sterile Surgical Gloves	Gammex	851_A
Straight Forceps	Fine Science Tools	00108-11	11 cm
Tissue forceps	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.JFLP3	13.5 cm, 8 mm, 0.3 mm
Vannas Pattern Scissors	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.SDC15RV	15 cm, 8 mm, curved 7mm blade
Vannas Spring Scissors	Fine Science Tools	15000-10	3 mm cutting edge, curved
Vessel Dilator Tip	Fine Science Tools	00126-11	Diameter 0.1 mm/Angled 10/11 cm
Vessel Dilator, Classic line	S&T	D-5a.3 W	9 mm, 0.3 mm, angled 10