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Dans cet article

  • Résumé
  • Résumé
  • Introduction
  • Protocole
  • Résultats
  • Discussion
  • Déclarations de divulgation
  • Remerciements
  • matériels
  • Références
  • Réimpressions et Autorisations

Résumé

Le but de ce manuscrit est de décrire les étapes microchirurgicales nécessaires pour réaliser une greffe de larynx hétérotopique chez la souris. Les avantages de ce modèle murin par rapport à d’autres modèles animaux de transplantation laryngée sont son rapport coût-efficacité et la disponibilité de tests et de données immunologiques.

Résumé

La transplantation hétérotopique laryngée, bien qu’il s’agisse d’une procédure techniquement difficile, offre plus d’analyses scientifiques et d’avantages en termes de coûts par rapport à d’autres modèles animaux. Bien que décrite pour la première fois par Shipchandler et al. en 2009, cette technique n’est pas largement utilisée, peut-être en raison des difficultés d’apprentissage de la technique microchirurgicale et du temps nécessaire pour la maîtriser. Cet article décrit en détail les étapes chirurgicales, ainsi que les pièges potentiels à éviter, afin d’encourager une utilisation efficace de cette technique.

Dans ce modèle, les artères carotides bilatérales du larynx donneur sont anastomosées à l’artère carotide receveuse et à la veine jugulaire externe, ce qui permet le flux sanguin à travers la greffe. Le flux sanguin peut être confirmé en peropératoire par la visualisation du remplissage sanguin dans les artères carotides bilatérales du greffon, la rougeur des glandes thyroïdes du greffon et le saignement des microvaisseaux dans le greffon. Les éléments cruciaux du succès comprennent la préservation délicate des vaisseaux du greffon, la fabrication d’artériotomie et de veinotomie de taille correcte et l’utilisation du nombre approprié de sutures sur les anastomoses artério-artérielles et artério-veineuses pour sécuriser les vaisseaux sans fuite et prévenir l’occlusion.

N’importe qui peut devenir compétent dans ce modèle avec une formation suffisante et effectuer la procédure en environ 3 heures. S’il est réalisé avec succès, ce modèle permet d’effectuer des études immunologiques facilement et à faible coût.

Introduction

Pour les patients souffrant de lésions irréparables du larynx ou d’un cancer du larynx, une laryngectomie totale est souvent la seule option1. La laryngectomie totale laisse les patients sans la capacité de respirer et de parler par eux-mêmes, en plus d’éprouver une détresse sociale et psychologique2. Les patients atteints d’un cancer du larynx qui ont besoin d’une laryngectomie totale sont d’excellents candidats potentiels pour la transplantation laryngée. Alors qu’une transplantation laryngée humaine dans le cadre de lésions laryngées irréparables a été effectuée, l’allotransplantation du larynx est actuellement évitée....

Protocole

Cette recherche a été réalisée en conformité avec le comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux (IACUC) de la Mayo Clinic. Des souris BalbC (âgées de 10 à 12 semaines) ont été utilisées comme donneuses et des souris C57/BL6 (âgées de 10 à 12 semaines) ont été utilisées comme receveuses parce que leurs principaux complexes d’histocompatibilité, H-2Db et H-2Kb, respectivement, sont immunologiquement incompatibles, et donc la réponse immunitaire à la greffe peut être étudiée plus avant. Tous les instruments utilisés pendant la chirurgie ont été stérilisés (voir la figure supplémentaire S1 et la figure supplémentaire S2), ....

Résultats

Confirmation de la réussite de la transplantation
En utilisant le protocole décrit ci-dessus, il est possible d’évaluer le flux sanguin vers le complexe LTE en observant la pulsation de l’artère carotide du donneur après avoir retiré les pinces vasculaires. La pulsation est généralement visible et la coloration rouge immédiate de l’artère donneuse confirme un flux sanguin actif (Figure 4A). Si l’anastomose n’est pas efficace, l’artère n’aura pas d.......

Discussion

L’incidence et la prévalence du cancer du larynx ont augmenté respectivement de 12 % et 24 % au cours des trois dernières décennies, et bon nombre de ces patients subissent une laryngectomie pour le traitement10. Cette procédure aggrave considérablement la qualité de vie d’une personne et, par conséquent, un traitement alternatif est souhaité. L’allotransplantation composite vascularisée du larynx peut améliorer la capacité d’un patient à respirer et à parler; Cependant, des .......

Déclarations de divulgation

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents. Les frais de voyage et de subsistance d’Egehan Salepci pour la recherche ont été financés par le Conseil de la recherche scientifique et technologique de Turquie (TUBITAK).

Remerciements

Nous tenons à remercier Randall Raish pour son excellente vidéographie et son aide au montage.

....

matériels

NameCompanyCatalog NumberComments
#1 PaperclipsStaplesOP-7404Clips are shaped manually to be used as retractors
1 cc Insulin Syringes BD 32941227 G 5/8
10-0 Ethilon Nylon SutureEthicon2870G
25 G Precision Glide NeedleBD 3051251 in
3 mL Luer-Lok Tip SyringeBD 309657
30 G Sterile Standard Blunt NeedlesCellinkNZ5300505001
5-0 Monocryl SutureEthiconY822G
8-0 Ethilon Nylon SutureEthicon2815G
Adson ForcepsFine Science Tools11027-12Straight, 1 x 2 teeth
Adventitia scissorsS&TSAS-1019 mm, 10 cm, straight
Angled ForcepsFine Science Tools00109-1145/11 cm
Artifical Tears Lubricant Opthalmic OintmentAkorn Animal Health59399-162-35
Bandaid Fabric FingertipCardinal Healthcare299399
Betadine Solution SwabsticksPurdue Products67618-153-01
Buprenex InjectionCIII12495-0757-10.3 mg/mL
Clamp applying forceps without lockAccurate Surgical & Scientific InstrumentsASSI.CAF514 cm
Cotton SwabsPuritan10806-001-PK
DeBakey forceps
Dermabond MiniCardinal Healthcare315999
Dissecting BoardsMopec22-444-314
Falcon Sterile Disposable Petri Dish Corning25373-04135 mm
Fine ScisssorsFine Science Tools14029-10Curved Sharp-Blunt 10 cm
Golden A5 2-Speed Blade Clipper Oster008OST-78005-140#10
Hair Remover Sensitive FormulaNair2260000033
Heparin Meitheal Pharmaceuticals71288-4O2-1010,000 USP units per 10 mL
IsofluranePiramal Healthcare66794-013-25
Low-Temp Micro Fine Tip CauteryBovie MedicalAA90
Mercian Visibility Background MaterialSynovis Micro CompaniesVB3Green
Microvascular Approximator Clamp without FrameAccurate Surgical & Scientific InstrumentsASSI.ABB11V0.4-1 mm Vessel Diameter
Mouse face mask kitXenotecXRK-SSmall
Needle holderS&TC-14 W5.5", 8 mm, 0.4 mm
Press n' SealGlad70441
ScalpelBraunBA21010 blade
Single Mini Vessel ClampAccurate Surgical & Scientific InstrumentsASSI.ABB11M.31 (8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Black Pair
StereomicroscopeOlympusSZ61
Sterile Alcohol Prep PadsFisherbrand06-669-62
Sterile Disposable Drape SheetsDynarexDYN4410-CASE
Sterile Gauze PadsDukal1212
Sterile Saline Hospira236173NaCl 0.9%
Sterile Surgical GlovesGammex851_A
Straight ForcepsFine Science Tools00108-1111 cm
Tissue forcepsAccurate Surgical & Scientific InstrumentsASSI.JFLP313.5 cm, 8 mm, 0.3 mm
Vannas Pattern Scissors Accurate Surgical & Scientific InstrumentsASSI.SDC15RV15 cm, 8 mm, curved 7mm blade
Vannas Spring ScissorsFine Science Tools15000-103 mm cutting edge, curved
Vessel Dilator Tip Fine Science Tools00126-11Diameter 0.1 mm/Angled 10/11 cm
Vessel Dilator, Classic lineS&TD-5a.3 W9 mm, 0.3 mm, angled 10

Références

  1. Strome, M., et al. Laryngeal transplantation and 40-month follow-up. The New England Journal of Medicine. 344 (22), 1676-1679 (2001).
  2. Hilgers, F. J. M., Ackerstaff, A. H., Aaronson, N. K., Schouwenburg, P. F., Zandwijk, N. Physical and psychos....

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