מודל עכבר הטרוטופי לחקר השתלת גרון

Summary

מטרתו של כתב יד זה היא לתאר את הצעדים המיקרו-כירורגיים הנדרשים לביצוע השתלת גרון הטרוטופית בעכברים. היתרונות של מודל עכבר זה בהשוואה למודלים אחרים של בעלי חיים של השתלת גרון הם עלות-תועלת שלו ואת הזמינות של בדיקות אימונולוגיות ונתונים.

Abstract

השתלה הטרוטופית של הגרון, למרות שהיא הליך מאתגר מבחינה טכנית, מציעה ניתוח מדעי יותר ויתרונות עלות בהשוואה למודלים אחרים של בעלי חיים. למרות שתואר לראשונה על ידי Shipchandler et al. בשנת 2009, טכניקה זו אינה בשימוש נרחב, אולי בשל הקשיים בלמידת הטכניקה המיקרו-כירורגית והזמן הנדרש כדי לשלוט בה. מאמר זה מתאר את הצעדים הכירורגיים בפירוט, כמו גם מכשולים פוטנציאליים שיש להימנע מהם, על מנת לעודד שימוש יעיל בטכניקה זו.

במודל זה, עורקי הצוואר הדו-צדדיים של הגרון התורם עוברים אנסטומוס לעורק הצוואר המקבל ולווריד הג'וגולרי החיצוני, מה שמאפשר זרימת דם דרך השתל. זרימת הדם יכולה להיות מאושרת תוך ניתוחית על ידי הדמיה של מילוי דם בעורקי הצוואר הדו-צדדיים של השתל, אדמומיות של בלוטות התריס של השתל, ודימום מכלי מיקרו בשתל. המרכיבים החיוניים להצלחה כוללים שימור עדין של כלי השתל, ביצוע כריתת עורקים ווונוטומיה בגודל הנכון, ושימוש במספר המתאים של תפרים על האנסטומוזים העורקיים-עורקיים והעורקים-ורידיים כדי לאבטח כלי דם ללא דליפה ולמנוע חסימה.

כל אחד יכול להיות מיומן במודל זה עם הכשרה מספקת ולבצע את ההליך בערך 3 שעות. אם מבוצע בהצלחה, מודל זה מאפשר לבצע מחקרים אימונולוגיים בקלות ובעלות נמוכה.

Introduction

עבור חולים הסובלים מנזק בלתי הפיך לגרון או מסרטן הגרון, כריתת גרון כוללת היא לעתים קרובות האפשרות היחידה¹. כריתת גרון כוללת משאירה את המטופלים ללא יכולת לנשום ולדבר בכוחות עצמם, בנוסף לחוות מצוקה חברתית ופסיכולוגית². חולים עם סרטן הגרון הזקוקים לכריתת גרון כוללת הם מועמדים פוטנציאליים מצוינים להשתלת גרון. בעוד השתלת הגרון האנושי בסביבה של נזק בלתי הפיך לגרון בוצעה, allotransplantation של הגרון נמנע כיום בחולים אלה בשל החשש מהישנות הגידול, את האפשרות של דחייה כרונית, וזיהומים שמקורם בתורם³. דיכוי חיסוני הוא הגורם העיקרי לחששות אלה. האובדן הדרמטי של החולה הראשון שעבר השתלת גרון חלקית עקב הישנות הגידול לאחר טיפול חיסוני קונבנציונלי הוא עדות לכך שיש להמציא משטר דיכוי חיסוני מתאים לפני שיבוצעו ניסיונות נוספים להשתלה בחולי סרטן הגרון ^4,5.

כדי להבין טוב יותר את התגובה החיסונית של המארח לגרון מושתל, מודל השתלת הגרון הראשון בחולדות פותח בשנת 1992 על ידי Strome, ושיפורים בטכניקה הניתוחית נעשו בשנת 2002 ^6,7. למרות שמודל זה יעיל לחקר השתלת גרון, המחסור בחומרים חיסוניים ספציפיים לחולדה והעלות הגבוהה יותר הכרוכה במודלים של חולדות הובילו לפיתוח מודל עכברים חדש לחקר השתלת גרון בשנת 2009⁸.

היישום העיקרי של הטכניקה המתוארת הוא ללמוד משטרי תרופות אימונוסופרסיביים שונים בהשתלת גרון. שיפור הטיפולים האימונוסופרסיביים הנוכחיים עשוי להרחיב את מאגר המועמדים ולהוביל להשתלה בטוחה בחולי סרטן. היתרונות של מודל עכבר זה הם העלות-תועלת שלו והזמינות הרחבה של נתונים אימונולוגיים וריאגנטים.

צוותים העובדים על משטרי טיפול מדכאי חיסון להשתלת גרון יכולים להשתמש בשיטה זו כדי לאסוף נפח גדול של נתונים אימונולוגיים, וניתן לבדוק ולהשוות במהירות משטרי תרופות שונים. שיטות טיפול פוטנציאליות אחרות שיכולות לווסת את התגובה החיסונית להשתלה, כגון זריקות תאי גזע, ניתנות לבדיקה גם באמצעות מודל זה. לבסוף, ניתן להמציא ניסויים כדי לבחון השפעות מערכתיות ארוכות טווח של השתלת גרון על ידי הארכת תקופת המעקב.

הטכניקה המתוארת כאן משתמשת באנסטומוזות מקצה לצד כדי לספק זרימה עורקית וורידית לשתל גרון הטרוטופי. השתל הוא קומפלקס לרינגוטרכאו-ושט (LTE) הכולל את הגרון, בלוטות התריס, בלוטות יותרת התריס, קנה הנשימה והוושט של התורם, עם עורקי קרוטיד דו-צדדיים ופדיקלים שלמים. עורק הצוואר של תורם אחד עובר אנסטומוס לעורק הצוואר המקבל ומספק זרימת דם עורקית, בעוד שעורק הצוואר של התורם השני משוקע לווריד הג'וגולרי החיצוני של המקבל ומספק זרימת דם ורידית (איור 1).

מספר שינויים נעשו בטכניקה הכירורגית של מודל החולדה כדי להבטיח הצלחה במודל העכבר. לדוגמה, נעשה שימוש בחומר הרדמה בשאיפה במקום בחומר הזרקה כדי להגביר את השליטה על עומק ההרדמה ולהפחית את הסיבוכים. תפירה רציפה משמשת באנסטומוזיס עורקי-עורקי בחולדות; עם זאת, בשל גודל קטן יותר של כלי עכבר, זה קשה מבחינה טכנית יכול לגרום להיצרות של כלי לומן⁷. כתוצאה מכך, תפרים מופרעים משמשים במודל העכבר ומביאים לפטנטיות כלי משופרת. בנוסף, במודל החולדה, פדיקל עורק בלוטת התריס העליון (STA) מנותח החוצה ומדמיין. בהתחשב בגודלו הקטן יותר של ה-STA בעכברים, דיסקציה זו עלולה לגרום לנזק ואף להעברה של ה-STA. כתוצאה מכך, הוא אינו מנותח במודל העכבר. במקום זאת, החיתולית הסמוכה נשמרת כדי להבטיח שה-STA יישאר שלם.

המלכודות הפוטנציאליות העיקריות של טכניקה זו כוללות פגיעה בפדיקלים המורכבים של LTE התורם, ביצוע כריתת עורקים או כריתת כלי דם בגודל שגוי, חסימת כלי דם באתרי האנסטומוזה או השארת רווחים באתרי האנסטומוזיס שעלולים לגרום לדימום. כדי להימנע מטעויות אלה, יש לנקוט בזהירות בעת רכישת השתל התורם על ידי השארת שרוול של רקמה סביב פדיקל STA. העורקים והוונוטומיות צריכים להיות גדולים מספיק כדי לאפשר זרימת דם, אך קטנים מספיק כדי למנוע דליפה. יש להשתמש במספר מתאים של תפרים עבור anastomoses כדי לסגור את כל הפערים, אבל לא יותר מדי כדי להסתיר את כלי.

אם היכרות עם טכניקות microsurgical מתקבל, הליך זה יכול להתבצע כ 3 שעות. מודל השתלת הגרון הזה יכול להתבצע באופן אמין בעכברים ולהשתמש בו כדי לחקור את התגובה החיסונית של המארח לאחר allotransplantation מרוכב וסקולרי.

Protocol

מחקר זה בוצע בהתאם לוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של מאיו קליניק (IACUC). עכברי BalbC (בני 10-12 שבועות) שימשו כתורמים ועכברי C57/BL6 (בני 10-12 שבועות) שימשו כמושתלים מכיוון שקומפלקסי ההיסטו-תאימות העיקריים שלהם, H-2Db ו-H-2Kb, בהתאמה, אינם תואמים מבחינה חיסונית, ולכן ניתן לחקור עוד יותר את התגובה החיסונית לשתל. כל המכשירים ששימשו במהלך הניתוח עברו עיקור (ראו איור משלים S1 ותוספת איור S2), ושדה הניתוח נשמר סטרילי לאורך כל הפרוטוקול לפי הוראות IACUC.

1. ניתוח תורם ורכש השתלות

1. להזריק לתורם בופרנורפין בשחרור מושהה (3.25 מ"ג/ק"ג משקל גוף תת עורי) 30 דקות לפני תחילת ההליך. הנח את העכבר בתיבת ההרדמה של המכרסם להשראת הרדמה באיזופלוראן 3% המועבר עם זרימה של 1 ליטר/דקה O₂ . לאחר הרדמה מלאה של בעל החיים, העבירו את העכבר לאזור הגילוח ותנו איזופלורן 1.5% עם זרימה של 1 ליטר/דקה O₂ לשמירה על הרדמה. אשר את עומק ההרדמה עם קמצוץ הבוהן.
2. לגלח את החזה והצוואר של העכבר עד לקו הלסת ולמרוח קרם דפילטורי. לאחר 30 שניות, נגבו את הקרם עם כרית גזה סטרילית שהורטבה במים והעבירו את העכבר לאזור הניתוח.
3. יש למרוח חומר סיכה לעיניים על עיני העכבר. הניחו את העכבר על כרית חימום משלימה כדי להבטיח טמפרטורת גוף תקינה.
4. לשתק את העכבר, להכין את האזור הכירורגי שלוש פעמים עם יוד פובידון ואלכוהול, ולאחר מכן לעטוף את העכבר.
   הערה: בדוק את עומק ההרדמה על ידי כיווץ בוהן ושמור על הרדמה של 1.5% איזופלוראן וזרימה של 1 ליטר לדקה O₂ באמצעות מסכת פנים לאורך כל ההליך.
5. בצע חתך אופקי קטן בדיוק עדיף על החריץ העל-סטרנלי. בעזרת מספריים עדינים, יש להגביה את העור באופן דו-צדדי דרך החתך עד למנדיבל. צרו מקטע עור בצורת טרפז וכתוצאה מכך נחשפו לבלוטות הרוק הדו-צדדיות, לשרירי הסטרנומטואידים, לשרירים הדיגסטריים ולהיבט העליון של עצם החזה (איור 2A).
6. כריתת בלוטות הרוק הדו-צדדיות באמצעות צריבה בחלק העליון שבו מדמיינים וריד קטן העובר דרך הבלוטה (איור 2A).
   הערה: אם לא נלקחת בזהירות כדי לצרוב את כלי הדם לפני הסרת הבלוטה, דימום משמעותי יכול להיתקל בשלב זה.
7. בעדינות לסגת את רקמות הלימפה והשומן לרוחב כדי לחשוף את שרירי הסטרנומטואידים והרצועה. נתחו את שרירי הסטרנומסטואיד הדו-צדדיים מהרקמות הסובבות אותם ונסוגו מהם לרוחב באמצעות רטרקטורים.
   הערה: תמרון זה יחשוף באופן מלא את קומפלקס ה-LTE עם שרירי הרצועה ויספק מרחב עבודה נוח לכריתה של עורקי הצוואר (איור 2B).
8. בצעו חתך בקו האמצע בין שרירי הרצועה וכרו אותם באופן דו-צדדי, תוך הקפדה שלא לפגוע בבלוטת התריס הבסיסית והשארתה על קומפלקס ה-LTE.
   הערה: לאחר שלב זה, עורקי הצוואר הדו-צדדיים אמורים להיות גלויים (איור 2C).
9. היקף לנתח את עורקי הצוואר המשותפים לרמה של עצם הבריח נחותה לרמה של bifurcation הצוואר מעולה. לנתח את עצב הוואגוס ואת הווריד הג'וגולרי הפנימי מעורקי הצוואר. אין לכלול אותם בשתל הנרכש.
   הערה: ניתן לראות את עורק בלוטת התריס העליון פשוט עדיף על הביפורקציה הנוסעת באופן מדיאלי. השאירו את החיתולית הדקה המקיפה כלי זה ללא פגע ואל תנסו לנתח אותו בהיקף. כלי זה מספק את זרימת הדם למתחם LTE וישמש כפדיקל לאחר ההשתלה. שימור כלי שיט זה הוא בעל חשיבות עליונה.
10. נתחו את עורקי הצוואר הפנימיים והחיצוניים בצורה טובה מספיק כדי להיות מסוגלים להתחלק ולהתחלק. אם יש קושי עם הדמיה של כלי, להשתמש retractor נפרד כדי לסגת השרירים digastric לרוחב.
    הערה: הימנעו מחיתוך עורק הצוואר החיצוני קרוב יותר לביפורקציה כדי למנוע נזק לעורק בלוטת התריס העליון. בשלב זה ניתן להיתקל בעורק העורפי, המסתעף מהקרוטיד החיצוני ועוקב במקביל לעורק הצוואר הפנימי, ואין לבלבל אותו עם עורק הצוואר הפנימי, שהוא גדול יותר ונמצא עמוק יותר (איור 2D).
11. באמצעות 8-0 תפרים ניילון, ligate את עורקי הצוואר הפנימיים 2 עד 3 מ"מ עדיף על bifurcation carotid. Ligate את עורקי הצוואר החיצוניים לפחות 3 מ"מ עדיף על נקודת ההסתעפות של עורק בלוטת התריס העליון.
    הערה: לאחר קשירה זו, קומפלקס ה-LTE יעבור דרך עורקי בלוטת התריס העליונים אל עורקי הצוואר הדו-צדדיים.
12. Ligate את העורקים הצוואריים המשותפים ברמה של עצם החזה לחתוך את כל כלי קשירה דו צדדית. שמור את pedicles כלי הדם על גבי קומפלקס LTE כדי למנוע נזק מקרי במהלך דיסקציה נוספת. כדי למנוע דליפת גז או אובדן בשוגג של הרדמה, יש לוודא שפג תוקפו של בעל החיים לפני ביצוע חתכים כלשהם בדרכי הנשימה.
13. מחלקים את השרירים infrahyoid ברמה של היואיד. צור כריתת לוע קדמית פשוט נחותה מההיואיד. יש לשאת את החתך אל החיתולית הפריורטברלית כדי לשחרר את קומפלקס ה-LTE בצורה מעולה.
14. מעבירים את קנה הנשימה מתחת לטבעת קנה הנשימה החמישית ונושאים את החתך דרך הוושט עד לפאשיה הפרברטברלית כדי לשחרר את קומפלקס ה-LTE בצורה נחותה. לשחרר את קנה הנשימה ואת הוושט מן fascia prevertebral הבסיסית מן הכיוון נחות עדיף.
    הערה: שמור את pedicles כלי הדם על גבי קומפלקס LTE כדי למנוע נזק מקרי במהלך דיסקציה נוספת.
15. צור כריתת לוע קדמית פשוט נחותה מההיואיד. יש לשאת את החתך אל החיתולית הפריורטברלית כדי לשחרר את קומפלקס ה-LTE בצורה מעולה. חלקו את כל חיבורי הלימפה או רקמת החיבור שנותרו בין קומפלקס ה-LTE לרקמה הסובבת אותו. הסר את השתל.
    הערה: השתל מכיל את הגרון התורם, קנה הנשימה, בלוטות בלוטת התריס, בלוטות יותרת התריס, הוושט ושרירי הגרון כיחידה מורכבת (איור 2E).

2. הכנת שתלים

1. מניחים את השתל שנרכש בצלחת פטרי סטרילית ושוטפים אותו במי מלח רגילים כדי להיפטר מכל קרישי הדם. באמצעות מיקרו מלקחיים, חלבו בעדינות את הדם והקרישים מתוך עורקי הצוואר הדו-צדדיים. להרחיב את עורקי הצוואר הדו-צדדיים באמצעות מיקרו-מרחיבים בקוטר 1 מ"מ.
2. באמצעות מחט 30 גרם קהה, להזריק כ 2 מ"ל של מלח heparinized בכל עורק הצוואר כדי לשטוף את השתל.
   הערה: ניתן לראות דם ומלח נשטפים מתוך עורק הצוואר הנגדי וקצות כלי הדם הקטנים והחופשיים, מה שמאשר את עורקי בלוטת התריס העליונים שלמים.
3. הבלו את האדוונטיטיה הרחק מקצות העורקים כך שיהיו להם קצוות נקיים לאנסטומזה.
   הערה: ניתן להשאיר את השתל במי מלח שעברו הפרין וניתן לקחת הפסקה קצרה של עד 3 שעות לפני השתלתו במושתל⁹.

3. ניתוח מושתל ואנסטומוזיס של כלי הדם

1. הכן את העכבר המקבל באותו אופן שתואר עבור התורם לאחר שלבי ההרדמה, הגילוח וההכנה הכירורגית. להזריק לעכבר המושתל משכך כאבים בשחרור מורחב תת עורית 30 דקות לפני תחילת הניתוח.
2. באמצעות אזמל יש לבצע חתך בצוואר בקו האמצע המשתרע מקו הלסת בצורה עדיפה עד לעצם החזה. הרם את העור בצד שמאל וחזור בו לרוחב.
3. הבלו את בלוטת הרוק השמאלית, cauterizing את כלי מעולה כפי שתואר לעיל. כלו את רקמת השומן והלימפה על-ידי חלוקת כל כלי הדם הנראה לעין עם צריבה בטמפרטורה נמוכה, תוך הקפדה שלא לפגוע בווריד הג'וגולרי החיצוני שמתחתיו (איור 3A).
4. לנתח את הווריד הג'וגולרי החיצוני בהיקף. השתמש לפחות 5 מ"מ של אורך ברור של כלי עבור anastomosis. יש להשתמש בצריבה בטמפרטורה נמוכה או בליגייט ולחלק את כל הוורידים הגדולים יחסית המסתעפים מהווריד הג'וגולרי.
5. לנתח את שריר הסטרנומסטואיד ולחזור בו לרוחב. שמור על הווריד המנותק מוגן מאחורי השריר כדי למנוע מגע ישיר עם retractor.
6. כלו את שרירי הרצועה השמאלית כדי לקבל גישה לעורק הצוואר של הנמען. נתחו באופן היקפי את עורק הצוואר המשותף מעצם הבריח באופן נחות עד לביפורקציה של הקרוטיד בצורה מעולה (איור 3B).
7. מעבירים את חומר הרקע מתחת לווריד הג'וגולרי החיצוני ומפעילים את מהדקי כלי ה-V3 בקירוב הכפול.
8. מניחים תפר ניילון 10-0 דרך הדופן הקדמית של הווריד הג'וגולרי החיצוני במיקום של הוורידיות הרצויה ומשתמשים בתפר זה כדי למשוך קדמית ולאוהל את הכלי.
9. חותכים לתפר עם מיקרו-סקיסורים עמוקים מספיק כדי ליצור את הוונוטומיה בגודל המתאים של חריץ יחיד ולוודא שהחתך הוא לגמרי דרך הדופן הוורידית.
10. באמצעות מחט 30 גרם קהה, לשטוף את החלק הפנימי של הווריד עם מלח heparinized.
11. מניחים את קומפלקס ה- LTE התורם בין עורק הצוואר השמאלי המקבל לבין וריד הג'וגולרי החיצוני השמאלי. יישרו את הקצה החופשי של עורק הצוואר השמאלי של התורם לכיוון הווריד החיצוני השמאלי של המקבל ושיפרו את קצות כלי הדם במספריים חדים.
12. באמצעות ארבעה תפרים מניילון 10-0 שנפרעו, אנסטומוז את עורק הצוואר השמאלי של התורם ואת הווריד הג'וגולרי החיצוני השמאלי המקבל בצורה מקצה לצד.
13. החליקו את חומר הרקע מתחת לעורק הצוואר המשותף של המקבל והניחו את מהדקי כלי הדם הכפולים בקירוב A3 על עורק הצוואר המשותף של המקבל. צור ארטריוטומיה באותו אופן כמו הוונוטומיה.
    הערה: ודא כי העורק הוא באותו גודל כמו לומן של עורק הצוואר התורם. אם הוא גדול מדי, דימום רב יתרחש לאחר הסרת המהדקים. אם הוא קטן מדי, זרימת הדם לשתל תיחסם.
14. Anastomose עורק הצוואר הימני התורם לעורק הצוואר השמאלי המקבל באופן מקצה לצד באמצעות שישה תפרים 10-0 ניילון מופרעים.
    הערה: יש לכבד טכניקה מיקרו-וסקולרית נכונה בכל כלי הדם. מעבר דרך הדופן האחורית גורם לזרימת דם מכווצת במידה ניכרת, מה שמסכן את הישרדותו של השתל. בשל גודלם הקטן של כלי השיט, קשה מאוד לנסות לבצע מחדש את התפרים.
15. הסר את המהדקים בצד הוורידי. אם נתקלים בדימום, הפעילו לחץ עדין עם קצוות כותנה.
16. הסר את מלחציים על העורק ומיד להפעיל לחץ עדין עם קצוות כותנה.
    הערה: דימום מסוים צפוי בשלב זה, אשר בדרך כלל מפסיק לאחר 1 דקה עם לחץ עדין.
17. בדוק את שלמות זרימת הדם בעורק והווריד.
    הערה: עם זרימה עורקית שלמה, פעימה של עורק הצוואר התורם נראית בדרך כלל, ובלוטת התריס התורמת משתנה מהצבע השקוף הסמוק שלה בחזרה לצבע האדמדם המקורי שלה. צבע אדום של כלי קטן על קומפלקס LTE ניתן גם לראות.
18. להשקות את השדה הניתוחי עם תמיסת מלח heparinized ולסגור את החתך בעור עם תפר מונופילמנט 5-0 בצורה רצה. יש למרוח משחה אנטיביוטית או דבק עור על החתך.
19. להזריק 1 מ"ל של מלח חם תת עורית כדי להסביר את אובדן הנוזלים במהלך הניתוח.
20. עצור את ההרדמה והעבר את העכבר לכלוב התאוששות. התבונן בעכבר על כרית חימום עד שהוא ער לחלוטין כדי למנוע היפותרמיה.

תוצאות

אישור השתלה מוצלחת
באמצעות הפרוטוקול שתואר לעיל, ניתן להעריך את זרימת הדם למתחם LTE על ידי התבוננות בפעימה של עורק הצוואר התורם לאחר הסרת מלחציים כלי הדם. הפעימה נראית בדרך כלל, וצבע אדום מיידי של עורק התורם מאשר זרימת דם פעילה (איור 4A). אם האנסטומוזיס אינו יעיל, לע?...

Discussion

השכיחות והשכיחות של סרטן הגרון עלו ב -12% ו -24%, בהתאמה, במהלך שלושת העשורים האחרונים, ורבים מהחולים הללו עוברים כריתת גרון^{לטיפול 10}. הליך זה מחמיר באופן משמעותי את איכות חייו של האדם, ולכן רצוי טיפול חלופי. allotransplantation מרוכב וסקולרי של הגרון יכול לשפר את יכולתו של המטופל לנשום ולדב?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
#1 Paperclips	Staples	OP-7404	Clips are shaped manually to be used as retractors
1 cc Insulin Syringes	BD	329412	27 G 5/8
10-0 Ethilon Nylon Suture	Ethicon	2870G
25 G Precision Glide Needle	BD	305125	1 in
3 mL Luer-Lok Tip Syringe	BD	309657
30 G Sterile Standard Blunt Needles	Cellink	NZ5300505001
5-0 Monocryl Suture	Ethicon	Y822G
8-0 Ethilon Nylon Suture	Ethicon	2815G
Adson Forceps	Fine Science Tools	11027-12	Straight, 1 x 2 teeth
Adventitia scissors	S&T	SAS-10	19 mm, 10 cm, straight
Angled Forceps	Fine Science Tools	00109-11	45/11 cm
Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment	Akorn Animal Health	59399-162-35
Bandaid Fabric Fingertip	Cardinal Healthcare	299399
Betadine Solution Swabsticks	Purdue Products	67618-153-01
Buprenex Injection	CIII	12495-0757-1	0.3 mg/mL
Clamp applying forceps without lock	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.CAF5	14 cm
Cotton Swabs	Puritan	10806-001-PK
DeBakey forceps
Dermabond Mini	Cardinal Healthcare	315999
Dissecting Boards	Mopec	22-444-314
Falcon Sterile Disposable Petri Dish	Corning	25373-041	35 mm
Fine Scisssors	Fine Science Tools	14029-10	Curved Sharp-Blunt 10 cm
Golden A5 2-Speed Blade Clipper	Oster	008OST-78005-140	#10
Hair Remover Sensitive Formula	Nair	2260000033
Heparin	Meitheal Pharmaceuticals	71288-4O2-10	10,000 USP units per 10 mL
Isoflurane	Piramal Healthcare	66794-013-25
Low-Temp Micro Fine Tip Cautery	Bovie Medical	AA90
Mercian Visibility Background Material	Synovis Micro Companies	VB3	Green
Microvascular Approximator Clamp without Frame	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.ABB11V	0.4-1 mm Vessel Diameter
Mouse face mask kit	Xenotec	XRK-S	Small
Needle holder	S&T	C-14 W	5.5", 8 mm, 0.4 mm
Press n' Seal	Glad	70441
Scalpel	Braun	BA210	10 blade
Single Mini Vessel Clamp	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.ABB11M	.31 (8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Black Pair
Stereomicroscope	Olympus	SZ61
Sterile Alcohol Prep Pads	Fisherbrand	06-669-62
Sterile Disposable Drape Sheets	Dynarex	DYN4410-CASE
Sterile Gauze Pads	Dukal	1212
Sterile Saline	Hospira	236173	NaCl 0.9%
Sterile Surgical Gloves	Gammex	851_A
Straight Forceps	Fine Science Tools	00108-11	11 cm
Tissue forceps	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.JFLP3	13.5 cm, 8 mm, 0.3 mm
Vannas Pattern Scissors	Accurate Surgical & Scientific Instruments	ASSI.SDC15RV	15 cm, 8 mm, curved 7mm blade
Vannas Spring Scissors	Fine Science Tools	15000-10	3 mm cutting edge, curved
Vessel Dilator Tip	Fine Science Tools	00126-11	Diameter 0.1 mm/Angled 10/11 cm
Vessel Dilator, Classic line	S&T	D-5a.3 W	9 mm, 0.3 mm, angled 10