Enregistrement de l’intégrité fonctionnelle de la barrière sur les cellules endothéliales vasculaires bEnd.3 via la détection de résistance électrique transendothéliale

Résumé

Ce protocole décrit un modèle in vitro fiable et efficace de la barrière hémato-encéphalique. La méthode utilise des cellules endothéliales vasculaires cérébrales de souris bEnd.3 et mesure la résistance électrique transmembranaire.

Résumé

La barrière hémato-encéphalique (BHE) est une structure physiologique dynamique composée de cellules endothéliales microvasculaires, d’astrocytes et de péricytes. En coordonnant l’interaction entre le transit restreint des substances nocives, l’absorption des nutriments et la clairance des métabolites dans le cerveau, la BHE est essentielle à la préservation de l’homéostasie du système nerveux central. La construction de modèles in vitro de la BHE est un outil précieux pour explorer la physiopathologie des troubles neurologiques et créer des traitements pharmacologiques. Cette étude décrit une procédure de création d’un modèle de cellules monocouches de BHE in vitro en ensemencant des cellules bEnd.3 dans la chambre supérieure d’une plaque à 24 puits. Pour évaluer l’intégrité de la fonction de barrière cellulaire, le voltmètre de cellules épithéliales conventionnel a été utilisé pour enregistrer en temps réel la résistance électrique transmembranaire des cellules normales et des cellules hypoxiques induites par la CoCl₂. Nous prévoyons que les expériences ci-dessus fourniront des idées efficaces pour la création de modèles in vitro de BHE et de médicaments pour traiter les troubles des maladies du système nerveux central.

Introduction

La BHE est une interface biologique unique entre la circulation sanguine et le tissu nerveux, qui est composée de cellules endothéliales vasculaires, de péricytes, d’astrocytes, de neurones et d’autres structures cellulaires¹. Le flux d’ions, de produits chimiques et de cellules entre le sang et le cerveau est strictement régulé par cette barrière. Cette homéostasie protège les tissus nerveux contre les toxines et les agents pathogènes tout en permettant le bon fonctionnement des nerfs du cerveau ^2,3. Le maintien de l’intégrité de la BHE peut prévenir efficacement le développement et la....

Protocole

NOTE : Des cellules endothéliales dérivées du cerveau de souris.3 (bEnd.3) ont été inoculées dans les chambres d’une plaque à 24 puits pour construire un modèle in vitro simple de la BHE dans des conditions de milieu spécifiques. Les TEER des cellules normales et des cellules hypoxiques ont été mesurés à l’aide d’un TEER (Figure 1 et Figure 2).

1. Préparation de la solution

1. Préparer le milieu de culture cellulaire DMEM contenant du FBS (10 %, v/v), 100 U/mL de pénicilline et 10 mg/mL de streptomycine (voir le tableau des matériaux

Discussion

L’un des organes corporels les plus développés, le cerveau contrôle un large éventail de processus physiologiques complexes, notamment la mémoire, la cognition, l’ouïe, l’odorat et^{le mouvement.} Le cerveau est à la fois l’un des organes les plus compliqués et les plus malades du corps humain. L’apparition de nombreux troubles du système nerveux central montre une tendance croissante d’année en année en raison de facteurs tels que la pollution de l’air, les habitudes aliment.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
24-well transwell plate	Corning (Corning 3470, 0.33 cm2, 0.4 µm)	10522023
75 % ethanol	ChengDu Chron Chemicals Co,.Ltd	2023052901
96-well plate	Guangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd	220412-078-B
bEnd.3 cells	Hunan Fenghui Biotechnology Co., Ltd	CL0049
Cell counting kit-8 (CCK-8)	Boster Biological Technology Co., Ltd	BG0025
Cell culture dish (100mm)	Zhejiang Sorfa Life Science Research Co., Ltd	1192022
Cobalt Chloride (CoCl2)	Sigma	15862
DMSO	Boster Biological Technology Co., Ltd	PYG0040
Dulbecco's modified eagle medium (1x)	Gibco ThermoFisher Scientific	8121587
Fetal bovine serum	Gibco ThermoFisher Scientific	2166090RP
GraphPad Prism software	GraphPad Software	9.0.0(121)
Matrigel (Contains collagen IV)	MedChemexpress	HY-K6002
Microplate reader	Molecular Devices	SpectraMax iD5
OriginPro 8 software	OriginLab Corporation	v8.0724(B724)
Penicillin-Streptomycin (100x)	Boster Biological Technology Co., Ltd	17C18B16
Phosphate buffered saline (PBS, 1x)	Gibco ThermoFisher Scientific	8120485
Sodium hypochlorite	ChengDu Chron Chemicals Co,.Ltd	2022091501
Transmembrane resistance meter	World Precision Instruments LLC	VOM3 (verison 1.6)
Trypsin 0.25% (1x)	HyClone	J210045