Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Этот протокол описывает надежную и эффективную модель гематоэнцефалического барьера in vitro . Метод использует клетки эндотелия сосудов головного мозга мышей bEnd.3 и измеряет трансмембранное электрическое сопротивление.

Аннотация

Гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) представляет собой динамическую физиологическую структуру, состоящую из микрососудистых эндотелиальных клеток, астроцитов и перицитов. Координируя взаимодействие между ограниченным транзитом вредных веществ, всасыванием питательных веществ и клиренсом метаболитов в головном мозге, ГЭБ играет важную роль в сохранении гомеостаза центральной нервной системы. Построение моделей ГЭБ in vitro является ценным инструментом для изучения патофизиологии неврологических расстройств и создания фармакологических методов лечения. В данном исследовании описана процедура создания модели монослойных клеток ГЭБ in vitro путем посева клеток bEnd.3 в верхнюю камеру 24-луночного планшета. Для оценки целостности барьерной функции клеток использовали обычный эпителиальный клеточный вольтметр для регистрации трансмембранного электрического сопротивления нормальных клеток и CoCl 2-индуцированных гипоксических клеток в режиме реального времени. Мы ожидаем, что вышеуказанные эксперименты дадут эффективные идеи для создания in vitro моделей ГЭБ и препаратов для лечения заболеваний центральной нервной системы.

Введение

ГЭБ представляет собой уникальный биологический интерфейс между кровообращением и нервной тканью, который состоит из эндотелиальных клеток сосудов, перицитов, астроцитов, нейронов и других клеточных структур1. Поток ионов, химических веществ и клеток между кровью и мозгом строго регулируется этим барьером. Этот гомеостаз защищает нервные ткани от токсинов и болезнетворных микроорганизмов, а также обеспечивает надлежащую работу нервов головного мозга 2,3. Поддержание целостности ГЭБ может эффективно предотвращать развитие и прогрессирование нарушений, влияющих на центральную нервную сист....

протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Эндотелиальные клетки, полученные из мозга мышей.3 (bEnd.3), были инокулированы в камеры 24-луночного планшета для построения простой модели ГЭБ in vitro в определенных условиях среды. ТЭЭР нормальных и гипоксических клеток измеряли с помощью измерителя TEER (рис. 1 и рис. 2).

1. Приготовление раствора

  1. Приготовьте питательную среду для клеток DMEM, содержащую FBS (10%, v/v), 100 ЕД/мл пенициллина и 10 мг/мл стрептомицина (см. таблицу материалов).
  2. Приготовьте 100 мМ исходного раствора CoCl2 , добав....

Результаты

Этот протокол позволял регистрировать изменения значений сопротивления клеток по параметрам, заданным в трансэндотелиальном резисторном измерителе. Жизнеспособность клеток bEnd.3 (количество живых клеток), обработанных различными концентрациями CoCl2 , проводили скрининг с помощь?.......

Обсуждение

Один из наиболее развитых органов тела, мозг контролирует широкий спектр сложных физиологических процессов, включая память, познание, слух, обоняниеи движение. Мозг является одним из самых сложных и больных органов человеческого тела одновременно. Возникновение многих ра.......

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы высоко ценим финансовую поддержку со стороны Национального фонда естественных наук Китая (82274207 и 82104533), Программы ключевых исследований и разработок Нинся (2023BEG02012) и Проекта содействия научным исследованиям Xinglin Университета ТКМ в Чэнду (XKTD2022013).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
24-well transwell plateCorning (Corning 3470, 0.33 cm2, 0.4 µm)10522023
75 % ethanolChengDu Chron Chemicals Co,.Ltd2023052901
96-well plateGuangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd220412-078-B
bEnd.3 cellsHunan Fenghui Biotechnology Co., LtdCL0049
Cell counting kit-8 (CCK-8)Boster Biological Technology Co., LtdBG0025
Cell culture dish (100mm)Zhejiang Sorfa Life Science Research Co., Ltd1192022
Cobalt Chloride (CoCl2)Sigma15862
DMSOBoster Biological Technology Co., LtdPYG0040
Dulbecco's modified eagle medium (1x)Gibco ThermoFisher Scientific8121587
Fetal bovine serumGibco ThermoFisher Scientific2166090RP
GraphPad Prism softwareGraphPad Software9.0.0(121)
Matrigel (Contains collagen IV)MedChemexpressHY-K6002
Microplate readerMolecular DevicesSpectraMax iD5
OriginPro 8 softwareOriginLab Corporationv8.0724(B724)
Penicillin-Streptomycin (100x)Boster Biological Technology Co., Ltd17C18B16
Phosphate buffered saline (PBS, 1x)Gibco ThermoFisher Scientific8120485
Sodium hypochloriteChengDu Chron Chemicals Co,.Ltd2022091501
Transmembrane resistance meterWorld Precision Instruments LLCVOM3 (verison 1.6)
Trypsin 0.25% (1x)HyCloneJ210045

Ссылки

  1. Kim, Y., et al. CLEC14A deficiency exacerbates neuronal loss by increasing blood-brain barrier permeability and inflammation. J Neuroinflammation. 17 (1), 48 (2020).
  2. Bagchi, S., et al.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

BEnd 3in vitro24CoCl2

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены