Quantification des anticorps autoréactifs chez la souris lors d’une encéphalomyélite auto-immune expérimentale

Résumé

L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) est un modèle animal de la sclérose en plaques (SEP), qui partage avec la maladie humaine une réponse auto-immune humorale robuste. Ici, nous rapportons un protocole ELISA simple et flexible pour quantifier les auto-anticorps dans le sérum de souris immunisées contre l’EAE.

Résumé

L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) est un modèle de maladie qui récapitule la maladie auto-immune de la sclérose en plaques (SEP) aux niveaux histopathologique et moléculaire. L’EAE est induite par l’immunisation d’animaux de laboratoire par injection sous-cutanée de peptides de myéline courts associés à des adjuvants spécifiques pour stimuler la réponse immunitaire. Comme leurs homologues humains, les souris EAE développent des lésions démyélinisantes, une infiltration de cellules immunitaires dans le système nerveux central (SNC), une activation gliale et des lésions neuronales. De nombreuses données probantes confirment également l’existence d’un rôle mécaniste du dysfonctionnement des lymphocytes B dans l’étiologie de la SP et de l’EAE. Les lymphocytes B peuvent servir de cellules présentatrices d’antigènes ainsi que de source primaire de cytokines pro-inflammatoires et d’auto-anticorps. Dans l’EAE, des anticorps sont générés contre les peptides de myéline qui ont été utilisés pour induire la maladie. Il a été démontré que ces auto-anticorps médient soit la perte de myéline, soit la réactivation des lymphocytes T pathogènes dans le SNC. Cet article décrit un protocole efficace basé sur l’ELISA pour quantifier les auto-anticorps dans le sérum de souris C57BL/6J immunisées avec le peptide de la glycoprotéine 35-55 de la myéline oligodendrocyte (MOG35-55). La méthode proposée constitue un outil puissant pour étudier la spécificité et l’ampleur de la réponse humorale aberrante dans le contexte de la démyélinisation auto-immune.

Introduction

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie auto-immune chronique du système nerveux central (SNC) caractérisée par une infiltration focale de cellules immunitaires dans le parenchyme cérébral, une dégradation des gaines de myéline enveloppant les axones, une activation de la glie et une perte neuronale¹. En plus du rôle bien établi des lymphocytes T pathogènes, de multiples éléments de preuve ont mis en évidence l’implication des lymphocytes B dans la médiation de la réponse auto-immune contre le SNC. Les lymphocytes B subissent une expansion clonale dans le cerveau de la SP et des anticorps dirigés contre les composants de la myéline ont

Protocole

Toutes les procédures impliquant des souris ont été effectuées conformément aux directives expérimentales approuvées par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de l’Université de Caroline de l’Est (IACUC). Des souris femelles Wildtype C57BL/6J âgées de 8 à 10 semaines ont été utilisées dans cette étude. Les animaux proviennent d’une source commerciale (voir la Table des matières). L’EAE a été induite à la suite de rapports précédemment publiés 12,13,14.

1. Collection de sérum

1. Euthan....

Discussion

Ici, un protocole simple et efficace basé sur l’ELISA a été rapporté pour quantifier avec précision la réponse humorale dans un modèle animal pertinent de la pathologie de la SEP. Cette méthode a récemment été utilisée pour décrire le nouveau rôle de la protéine ataxine-1 dans le contrôle des taux sériques d’auto-anticorps dans le paradigme MOG35-55/C57BL6J EAE¹². À cet égard, un certain nombre de facteurs doivent être pris en considération afin d’obtenir des résultats .......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mL syringes	BD Biosciences	309628
1.5 mL microcentrifuge tubes	Fisher	05-408-129
25 G needles	BD Biosciences	305122
3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) substrate	Thermo Fisher	N301	Store at 4 °C
Adhesive seals	Thermo Fisher	AB0558
Bovine serum albumin (BSA)	Sigma	A7906	Store at 4 °C
C57BL/6J female mice	The Jackson Laboratory	000664	Animals between 8-10 weeks of age should be used for EAE experiments
Cryogenic tubes	Fisher	10-500-25
Dissection tray	Fisher	S111022
Dissector scissors	Fine Science Tools	14082-09
ELISA coating buffer	BioLegend	421701	Store at 4°C
Excel software	Microsoft		Analysis spreadsheet
Forceps	Fine Science Tools	11152-10
Goat Anti-Mouse IgG, Human ads-HRP	SouthernBiotech	1030-05	Store at 4 °C
LED light source	Fisher	AMPSILED21
Microplate reader	Fisher	14-377-575
Molecular biology grade water	Corning	46-000-Cl
Mouse MOG35-55 peptide	EZBiolab	cp7203	Store at -80 °C
Multichannel pipette	Axygen	AP-12-200-P
Noyes spring scissors	Fine Science Tools	15011-12
Nunc MaxiSorp 96-well plates	BioLegend	423501
Orbital shaker	Fisher	88-861-023
Oven	VWR	445-0024
Phosphate buffer saline (PBS)	Thermo Fisher	14190144
Refrigerated tabletop centrifuge	Thermo Fisher	75002441
Stop solution	Thermo Fisher	N600
Tween 20	Bio-Rad	1706531