Application du code-barres ADN pour identifier les plantes médicinales

Résumé

Le présent protocole décrit l’utilisation de la technologie de codage à barres de l’ADN pour authentifier les matériaux médicinaux à base de plantes et la plante médicinale Angelica sinensis (Oliv.) Diels a été cité en exemple.

Résumé

Les plantes médicinales sont des ressources précieuses dans le monde entier et sont utilisées dans le monde entier pour maintenir la santé et traiter les maladies ; Cependant, la présence d’une falsification entrave leur développement. Le code-barres de l’ADN, une technique d’identification des espèces par des régions d’ADN standard, facilite l’identification rapide et précise des plantes médicinales traditionnelles. Le processus de codage à barres de l’ADN comporte six étapes de base : 1) le traitement des plantes médicinales, 2) l’extraction de l’ADN total de haute qualité des plantes médicinales à l’aide de la méthode de la colonne centrifuge, 3) l’amplification de l’espaceur 2 transcrit interne de la région de l’ADN cible (ITS2) avec des amorces universelles de plantes et la réalisation d’un séquençage de Sanger, 4) l’épissage et l’alignement de la séquence pour obtenir la séquence cible, 5) faire correspondre la séquence de code-barres avec la bibliothèque de codes-barres pour l’identification, 6) aligner la séquence, comparer les variations intraspécifiques et interspécifiques, construire un arbre phylogénétique de jonction de voisins. Comme le montrent les résultats, l’amorce universelle peut amplifier la région cible. L’outil de recherche d’alignement local de base (BLAST) démontre que le pourcentage identifié était de 100 %, et l’arbre de jonction de voisinage démontre que les séquences d’épissage ont été regroupées avec le clade A. sinensis OR879715.1 et que la valeur de support de clade est de 100. Ce protocole fournit une référence pour l’application de la technologie du codage à barres de l’ADN comme méthode efficace d’identification des plantes médicinales et des adultérants.

Introduction

Les plantes médicinales ont un large éventail d’effets pharmacologiques et sont des substances importantes pour le traitement et la prévention des maladies. La demande du marché pour les plantes médicinales dans les plantes médicinales et les produits pharmaceutiques est énorme et continue de croître. Avec l’augmentation du marché des plantes médicinales, le problème de la falsification a entravé le développement des plantes médicinales. Actuellement, l’adultération des plantes médicinales souffre des raisons suivantes : 1) la morphologie similaire des plantes médicinales rend difficile leur identification et l....

Protocole

1. Préparation de l’échantillon

1. La présente étude a utilisé A. sinensis , âgé de deux ans, avec une température basse et un long ensoleillement à une altitude de 2800 m du comté de Min, dans la province du Gansu, comme matériel expérimental. Trois plantes ont été sélectionnées parmi lesquelles plus de trois racines ont été sélectionnées pour l’expérimentation. Rincez d’abord les racines avec de l’eau stérilisée, puis nettoyez-les avec un pulvérisateur d’alcool ou des tampons imbibés d’alcool pour éviter toute contamination qui pourrait affecter la précision des résultats expérimentaux. Coupez les ra....

Discussion

La technologie d’identification moléculaire est plus facile à apprendre et à maîtriser que les méthodes d’identification traditionnelles. Il surmonte les limites de l’identification traditionnelle des plantes médicinales, car il n’est pas affecté par le stade de croissance de la plante et ne repose pas sur un jugement subjectif ou l’accumulation d’une expertise spécialisée³⁵. D’autres espèces sont confondues avec A. sinensis en rai.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
CTAB Rapid Plant Genomic DNA Extraction Kit	Shanghai Huiling Biotechnology Co.	NG411M	Suitable for rapid extraction of high quality genomic DNA from different tissues of a wide range of plants
DL5000 DNA Marker	Nanjing vazyme Bio-technology Co.	MD102-02	Ready-to-use product, take an appropriate amount of this product directly for electrophoresis when running the gel.
Electrophoresis	Beijing Liuyi Biotechnology Co.	DYY-6C	Adopt touch screen design, can display set voltage, set current at the same time, parallel output
Ethylenediaminetetraacetic acid	BeijingpsaitongBiotechnologyCo.,Ltd	E70015-100G	Nuclear Isolation Buffer formulation reagents.
Goldview Nucleic Acid Gel Stain(10,000×)	Yisheng Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd	10201ES03	When using agarose gel electrophoresis to detect DNA, it binds to DNA and produces a strong fluorescent signal.
High-Speed Tabletop Centrifuge	Changsha High-tech Industrial Development Zone Xiangyi Centrifuge Instrument Co.	H1650	For fast and efficient separation of samples, this compact and lightweight centrifuge offers reliable safety
High-Throughput Tissue Grinder	Shanghai Jingxin Industrial Development Co.	Tiss-48	A high-frequency vibration instrument for grinding samples
http://www.gpgenome.com/	Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences	-	HerbGenomics database includes genome sequences, gene sets, organelle genomes, low coverage genome data and DNA barcode sequences.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/	U.S. National Library of Medicine	-	The National Center for Biotechnology Information advances science and health by providing access to biomedical and genomic information.
Kylin-Bell	Haimen Qilinbel Instrument Manufacturing Co.	VORTEX-5	Rapid mixing in the form of a high-speed vortex, mixing speed, uniformity, thoroughness
LifeTouch	Hangzhou BORI Technology Co.	TC-96/G/H(b)B	Adoption of advanced thermoelectric refrigeration technology and newly created TAS technology to enhance its overall performance
Multi-functional Gel Image Analysis System	Southwest Operation Center of Shanghai Tianneng Life Science Co.	Tanon-Mini Space 2000	Performs rapid gene amplification experiments with a gradient function for mapping amplification conditions and a gradient temperature range of up to 30°C
NaCl	Beijing Solarbio Science&Technology Co.,Ltd.	S8210-100	Nuclear Isolation Buffer formulation reagents.
Nanodrop One	Genes Ltd.	ND ONE	Quantify DNA, RNA and protein samples in seconds with just 1-2 µL of sample
Polyvinyl pyrrolidone	Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd	S30268-500g	Nuclear Isolation Buffer formulation reagents.
Snowflake Ice Maker	Shanghai Zhixin Experimental Instrument Technology Co.	ZX-60X	Adopting rotary extrusion ice making method, fast ice making speed and high efficiency of ice production
Stainless Steel Beads for Tissue Homogenizer	Beyotime Biotechnology.	F6623	Equipment for grinding and mixing of tissue and other samples by vibration
Tris Acetate-EDTA buffer	Beyotime Biotech Inc	ST716	TAE is a commonly used buffer for DNA electrophoresis, frequently employed in agarose gel electrophoresis.
Tris-HCl	Beijing Solarbio Science&Technology Co.,Ltd.	T8230	Nuclear Isolation Buffer formulation reagents.
Water bath Kettle	Shanghai Senxin Experimental Instrument Co.	DK-8D	Precise thermostat and temperature regulation, accurate and reliable temperature control
β-mercaptoethanol	Shanghai Eon Chemical Technology Co.	R054186-100ml	Nuclear Isolation Buffer formulation reagents.