Pour commencer, ajoutez deux millilitres de tampon de digestion dans un flacon de transport de cinq millilitres contenant le tissu cardiaque de la souris, et quatre millilitres de tampon de digestion dans un tube à centrifuger de 15 millilitres contenant le tissu squelettique de la souris. Placez le tissu musculaire du cœur et du quadriceps isolé d’une souris épineuse sur le couvercle d’une boîte de Pétri. À l’aide d’une paire de ciseaux à tissus, coupez-le en morceaux de moins d’un millimètre cube.
Transférez le tissu haché dans les tubes de digestion respectifs. Faites tourbillonner le contenu des tubes pendant deux secondes à basse vitesse. Après 20 minutes, retirez les tubes du rotateur.
Laissez les morceaux de tissu se déposer. À l’aide d’une pipette P 1000, aspirez le surnageant. Transférez le surnageant dans des tubes à centrifuger de 50 millilitres contenant 20 millilitres de tampon FACS glacé.
Remplissez les tubes de digestion avec les volumes respectifs de tampon de digestion. Incuberez-les à nouveau sur le rotateur. Après avoir soumis les muscles à un autre cycle de digestion, ajoutez un tampon FACS glacé pour éteindre la digestion.
Placez une crépine à cellules de 40 micromètres sur un tube à centrifuger de 50 millilitres. Filtrez la suspension de digestion et supinez à travers la passoire. Centrifuger la suspension cellulaire à 500 G pendant huit minutes à quatre degrés Celsius.
Après avoir retiré le surnageant, ajoutez trois millilitres de tampon de lyse ACK à la pastille et remettez en suspension. Incuber la suspension pendant cinq minutes sur de la glace. Complétez le volume à 40 millilitres avec le tampon FACS.
Centrifugez à nouveau les échantillons à 500 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Après décantation du surnageant, remettre le granulé en suspension dans 0,5 millilitre de tampon FACS. Enfin, filtrez la suspension à travers un capuchon de crépine à cellules de 40 micromètres, placé sur un tube à fond rond en polystyrène de cinq millilitres.
