Rat modèle orthotopique de transplantation hépatique est un outil puissant pour étudier de multiples aspects de la transplantation hépatique. D’une réponse immunitaire sur l’infection, aux aspects techniques de la procédure. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle peut réduire les complications, mieux représenter la transplantation hépatique comely, et améliorer la survie du receveur.
Ce protocole modifié de transplantation orthotopique de foie de rat imite étroitement des aspects de la transplantation humaine de foie et servira de modèle de recherche variable et médicalement pertinent. Nous espérons qu’à travers la démonstration visuelle, les spectateurs peuvent apprendre tous les détails et raccourcir la courbe d’apprentissage pour maîtriser les compétences en microchirurgie requises pour cette technique. Après avoir injecté 300 unités internationales d’héparine de sodium dans le cava vena inférieur intrahépatique d’un rat anesthésié de 12 à 14 semaines, faire une incision de cinq millimètres sous la bifurcation du canal biliaire et insérer le stent du canal biliaire dans le canal biliaire commun.
Fixez le stent avec une ligature de soie 7-0, un millimètre au-dessus de l’incision, et une ligature 10 millimètres au-dessous de la bifurcation. Couper le canal biliaire entre les deux traverses et exposer l’artère hépatique appropriée. Divisez l’artère gastroduodénanale entre deux ligatures de soie 7-0, et exposez l’artère gastrique gauche, l’artère splénique et le tronc coeliaque.
Puis couper l’artère gastrique gauche, artère splénique, et le tronc coeliaque entre les liens de l’artère. Utilisez une seringue de 20 millilitres munie d’une aiguille de calibre 21,5 pour injecter lentement 20 millilitres de solution lactate de 4 degrés Celsius Ringer dans la veine du portail. Pour préparer le foie donneur, coupez la bifurcation du tronc coeliaque, de l’artère splénique et de l’artère gastrique gauche pour former une manchette artérielle plus grande et insérez l’enfilent artélial de 1,5 millimètre de longueur 24 dans l’artère hépatique commune du donneur par l’intermédiaire du brassard.
Ensuite, fixez le stent avec un 8-0 ligature en polypropylène et rincer le stent avec la solution lactate de Ringer. Après avoir exposé la veine portail d’un receveur de rat de 12 à 14 semaines, divisez le canal biliaire receveur à 0,5 centimètres au-dessous d’une bifurcation de carrelage, et insérez un stent de canal biliaire dans le canal biliaire commun distal. Exposez les artères hépatiques gauches, moyennes et droites et attachez les vaisseaux distal à la bifurcation de l’artère hépatique.
Couper les artères près du foie au-dessus des traverses et placer un long morceau mince de gaze derrière le cava vena inférieur super hépatique. Placez un porte-vena intrahépatique imprimé en 3D derrière le cava de vena intrahépatique et utilisez une suture de monofilament non absorbable Tenno pour coudre ensemble les extrémités de la poignée imprimée en 3D. Attachez lâchement une ligature de soie 7-0 au-dessous du support imprimé 3D entre le cava intrahépatique de vena et la veine de portail, et serrez le cava intrahepatic de vena juste au-dessus de la veine rénale droite au-dessous du support imprimé de cava 3D.
Serrez la veine portail juste au-dessus de la veine pylorique et au-dessous du support PV imprimé 3D. À l’aide d’une seringue de trois millilitres avec une aiguille de calibre 27 attachée, rincer deux millilitres de la solution lactate de 37 degrés Celsius Ringer via la bifurcation de la veine portail, et serrer le cava vena super hépatique au-dessus du foie avec une pince Kitzmiller. Ensuite, coupez sous la pince aussi près du foie que possible et coupez au-dessus des supports imprimés 3D pour la veine portail et le cava de vena inter hépatique pour enlever le foie destinataire.
Pour la transplantation hépatique du donneur, orientez soigneusement le foie du donneur dans la cavité corporelle du receveur de manière à ce qu’une anastomose supérieure puisse être créée. Insérez le brassard de veine portail du donneur dans la veine du portail receveur et serrez la cravate en soie 7-0. Retirez la pince atraumatique du cava de vena super hépatique et retirez le clip microvasculaire pour la veine portail.
Après avoir réinfusé le foie avec du sang chaud, insérez le brassard de vena cava intrahépatique du donneur dans le cava de vena intrahépatique receveur et fixez le vaisseau avec la cravate en soie 7-0. Retirez ensuite le clip de cava de vena intrahépatique du donneur avant d’enlever le clip du destinataire. Pour effectuer une anastomose artérielle, coupez la partie du tronc coeliaque du donneur qui s’étend au-delà du stent, et serrez l’artère hépatique appropriée du destinataire.
Coupez la cravate à l’extrémité et tout tissu supplémentaire entourant le vaisseau. Et utilisez la solution lactate de Ringer pour rincer les lumens des extrémités du donneur et du vaisseau receveur. À l’aide d’une aiguille incurvée, placez une suture d’éthilon de 10 à 0 à travers l’aspect gauche de l’artère hépatique du donneur, 2,5 millimètres au-dessus de l’orifice distal de l’enfilage, et jusqu’à l’extrémité du stent.
Transfixer l’artère hépatique appropriée du receveur 0,5 millimètre sous l’orifice du navire du côté gauche du navire, vers le côté droit de l’artère. Placez la suture suivante à travers la paroi droite de l’artère hépatique donneur de l’intérieur vers l’extérieur, à une distance de l’orifice stent identique au point d’origine, et tirez vers le haut sur les deux extrémités de l’enfilament non absorbable 10-0 pour glisser l’artère hépatique appropriée destinataire vers le haut, et dans l’entrailles hépatique d’artère. Puis attacher le monofilament 10-0 nonabsorbable avec lui-même sur l’artère hépatique donneur.
Rincer les canaux biliaires du receveur et du donneur, et insérer les canaux biliaires donneurs stent dans le canal biliaire receveur. Serrez ensuite la cravate qui était précédemment placée autour du canal biliaire du receveur. Dans cette expérience représentative, le modèle orthotopique de greffe orthotopique d’anastomosis d’artère non hépatique a démontré 50 et 37.5%taux de survie, à 21 jours et 60 jours, après opération respectivement.
En revanche, la procédure optimisée de reconnexion de l’artère hépatique a considérablement augmenté la survie à long terme. L’analyse histologique d’un sous-ensemble représentatif des animaux transplantés sans reconnexion hépatique d’artère a indiqué des signes des dommages hypoxiques de foie avec la nécrose lobulaire centrale, aux jours six et treize post-greffe. La nécrose étendue de foie a été associée aux niveaux énormément élevés des transferts d’immuno d’alanine et du transferase d’aminé d’aspartate dans ces animaux.
En revanche, les rats transplantés avec la reconnexion hépatique d’artère n’ont montré aucun signe des dommages de foie et l’analyse histologique a indiqué une structure normale de parenchyme de foie, avec l’acini organisé, les lobules, les artères et les canaux biliaires. En outre, l’analyse histologique des foies des rats modèles non hépatiques de reconnection d’artère a indiqué des changements réactifs après des dommages hypoxiques de foie. Y compris la prolifération des canaux biliaires du marché, la fibrose péri portail et l’inflammation, et le parenchyme du foie déformé.
Ce protocole peut être adapté pour étudier de nombreux aspects immunologiques et chirurgicaux de la transplantation hépatique et peut servir de modèle pour tester de nouvelles interventions thérapeutiques pertinentes à la transplantation.
