Ces méthodes peuvent aider à répondre aux questions clés dans l’atrésie biliaire. Des vues de BA au sujet de la maladie, de la pathogénie et du traitement. Le principal avantage de cette technique est que la technique néonatale d’injection de souris aidera les chercheurs à se familiariser avec la méthode pour d’autres études néonatales du modèle de souris.
Les implications de cette technique s’étendent vers la thérapie de BA comme plusieurs nanoparticules d’importance Bien que cette méthode puisse fournir un aperçu dans le traitement de BA, elle peut également être appliquée à d’autres systèmes tels que les modèles néonatals de souris de la pathogénie de ceci généralement de la manière ceci à cette méthode parce que la petite taille des souris néonatales peut avoir comme conséquence la construction du processus d’injection. Pour établir l’atrésie biliaire dans un modèle de souris, chargez le rotovirus rhésus dans une seringue d’insuline d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 29, et livrez intraperitoneally 1,2 fois 10 à la 5ème plaque-formation des unités de virus dans 20 microlitres du milieu modifié d’aigle de Dulbecco à chaque nouveau-né dans les 24 heures de naissance. Ensuite, retournez les nouveau-nés à leur mère pour la surveillance quotidienne et le pesage.
Lorsque les animaux néonatals commencent à présenter des signes d’ictère, chargez une seringue d’un millilitre munie d’une aiguille de calibre 29 avec 50 microlitres de solution de collagène nanoparticule d’argent fraîchement préparée par animal et utilisez l’annulaire pour appuyer obliquement sur la cuisse droite de la jambe d’un animal jaunisse. Introduire lentement l’aiguille à un angle de 15 degrés dans le péritoine, et en atteignant la surface du bord inférieur du foie, injecter le mélange de collagène nanoparticule d’argent. Lorsque tout le mélange a été injecté, retirez lentement l’aiguille et laissez reposer l’animal pendant dix minutes pour permettre au collagène de se solidifier et d’empêcher la mère de lécher le site d’injection.
Ensuite, retournez les souris dans leurs cages pour une surveillance quotidienne. Le jour neuf ou douze après l’inoculation, stériliser le haut et le bas de l’abdomen avec 75% d’éthanol, et immobiliser les membres d’une souris infectée. Ouvrez la peau, le muscle et le péritoine le long de la ligne médiane au xyphoïde, et utilisez un coton-tige stérile pour enlever le tractus gastro-intestinal pour exposer complètement le diaphragme.
Insérez l’aiguille d’une seringue d’insuline d’un millilitre déchargée dans le ventricule gauche du cœur, et rétractez lentement le piston à seringues pour obtenir le volume sanguin maximal. Transférer le sang dans un tube de 1,5 millilitre pendant une incubation de 30 minutes à température ambiante et pelleter les globules rouges par centrifugation. Puis recueillir le sérum pour une analyse ultérieure.
Pour la cholangiographie extrahépatique, utilisez un coton-tige pour exposer complètement le foie, la vésicule biliaire et les canaux biliaires extrahépatiques. Après avoir photographié l’apparence du foie et des canaux biliaires sous un microscope disséquant, utilisez des forceps ophtalmiques pour saisir doucement le fond de la vésicule biliaire et insérer lentement l’aiguille d’une seringue d’un millilitre chargée de solution bleu méthylène dans la cavité vésicule biliaire. Saisir l’aiguille avec les forceps, infuser lentement 10-20 microlitres de bleu méthylène.
Lorsque le colorant passe à travers les canaux biliaires extrahépatiques au jejunum, obtenir une autre photographie du tissu. Ensuite, pour l’hématoxyline et la coloration de l’éosine, récolter le foie de chaque animal pour la fixation pendant la nuit dans 10% formaline. Le lendemain matin, intégrer les échantillons dans la paraffine pour la section, suivie par la réhydratation de désestation avec une série d’éthanol et la coloration de l’hématoxyline et de l’éosine selon les protocoles d’analyse histopathologique standard.
Comparés aux souris biliaires non traitées d’atrésie, les animaux traités à la nanoparticule argentée démontrent la jaunisse réduite et maintiennent leur poids corporel normal. Les niveaux du métabolisme de bilirubin et de la transaminase hépatique tombent aux valeurs normales de commande, suggérant que les nanoparticules argentées améliorent considérablement la fonction hépatique. La cholangiographie extrahépatique avec la coloration bleue de méthylène confirme la patency de conduit biliaire après traitement de nanoparticule argentée, et la coloration de H&E indique une diminution significative de l’infiltration inflammatoire de cellules dans la zone hépatique de portail des souris traitées avec des nanoparticules argentées comparées aux contrôles.
Le site d’écoulement et l’analyse métrique indiquent la présence de beaucoup moins de cellules NK dans le foie des animaux traités par nanoparticules argentées par rapport aux souris infectées par le rotavirus rhésus non traité. D’autres taches immunohistochimiques révèlent une expression sensiblement réduite de la coloration de marqueur de cellules NK dans la triade portail des souris traitées à la nanoparticule argentée par rapport aux animaux infectés par le rotavirus rhésus. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler que la pratique donnera les meilleurs résultats.
Suite à cette procédure, comme des méthodes comme la conjugaison des nanoparticules d’argent à d’autres choses peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur l’activité des lésions dans les traitements de BA dans les modèles de souris. est le développement. Cette technique a fourni un moyen pour les chercheurs dans le domaine de la gastroentérologie à BA ou d’autres maladies telles que la cholestase dans le foie.
N’oubliez pas que travailler avec le rotavirus de recherche peut être extrêmement dangereux, et donc des précautions telles que le port de l’équipement de protection individuelle approprié doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.
