Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés liées à la lutte biologique contre les pathogènes végétaux transmis par le sol. L’étalon-or pour tester des matériaux comme le compost est d’avoir un bioassay végétal pour tester s’il est toxique pour les plantes. Toutefois, cela prend trois semaines.
Cette méthode peut être faite en environ deux à trois jours. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est simple, abordable et efficace. Cet essai est un criblage rapide du compost spécifique pour supprimer la croissance de Rhizoctonia solani.
Cependant, cet essai peut également être employé contre d’autres pathogènes végétaux soilborne, tels que fusariums, pythiums, et phytophthoras. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle parce qu’elle prend soin d’isoler et de maintenir une culture pure d’un champignon tout en évitant la contamination. Taylor Readyhough, un étudiant diplômé de mon laboratoire, démontrera la procédure d’isolement.
Emma Wright, une étudiante de premier cycle de mon laboratoire, fera la démonstration de l’analyse du concours. Pour commencer, semer des graines de radis rouge dans le sol connu pour avoir des antécédents de maladie causée par R.solani. Après trois à quatre semaines, retirer les semis du sol et les rincer à l’eau du robinet.
À l’aide d’une lame de rasoir, couper des segments d’un centimètre de l’hypocotyle et de la racine qui ont une couleur brune. Ensuite, utilisez des forceps stérilisés par flamme pour tremper les segments dans une solution d’eau de Javel à 10 % pendant une minute. Après cela, rincer les segments à l’eau stérile.
Ensuite, utilisez des forceps stérilisés par flamme pour transférer les segments dans une serviette en papier. Tapoter les segments secs, et les transférer dans une boîte de Pétri avec de l’agar d’eau. Placez la boîte de Pétri à l’intérieur d’un récipient avec un couvercle et incubez les segments à température ambiante.
Pour établir une culture de fille, transférez un des segments au centre d’une plaque fraîche d’agar de dextrose de pomme de terre. Après cela, autoclave tubes à essai de 25 millilitres contenant 10 millilitres d’eau. Ajouter deux échantillons de 0,5 gramme de chaque échantillon d’essai à une paire de tubes à essai autoclavés avec 10 millilitres d’eau stérile, et secouer les tubes à essai pendant la nuit.
Après 24 heures, ajouter 1,5 gramme d’agar nature et 90 millilitres d’eau distillée à une paire de flacons coniques. Après avoir autoclavant les flacons, placez-les dans un bain d’eau de 45 degrés Celsius pendant 30 minutes. Ensuite, versez l’échantillon de référence autoclavé et l’échantillon vivant dans l’agar fondu.
Verser les mélanges de chaque flacon dans cinq boîtes de Pétri. Pour protéger les microbes indigènes, il est important de ne pas ajouter le compost pendant que l’agar est trop chaud. Par conséquent, laisser refroidir l’agar à 45 degrés Celsius avant d’ajouter le compost.
En utilisant la technique aseptique, transférer des morceaux de R.solani à chaque paire de plaques d’échantillon. Ensuite, incuber les assiettes à température ambiante pendant un à deux jours. Enfin, utilisez une règle claire et plate et un microscope stéréo pour mesurer le rayon du mycélium dans chaque plaque au millimètre près.
Dans ce protocole, des extraits de composts vivants ont supprimé la croissance de R.solani sensiblement plus que les échantillons autoclavés, démontrant que l’effet était microbien et non à base de nutriments. La suppression est mesurée comme une réduction de la croissance par rapport au contrôle autoclavé. La croissance n’a pas été affectée par la durée de maturation ou de séchage du compost.
La croissance a été sensiblement affectée par la méthode de compost et les ingrédients de recette, spécifiquement avec le vermicompost, les processus de sillon, et les recettes avec l’écorce de bois dur. Après son développement, cette technique peut être un candidat à la certification commerciale du compost pour les propriétés répressives de la maladie.
