Modèle de carcinogenèse de la peau induitparé par des produits chimiques à l'aide de Dimethylbenz[a]Anthracene et 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

Ce modèle de cancer de la peau en deux étapes permet l’étude du rôle de l’inflammation dans le cancer de la peau et permet à l’étude l’initiation tumorale comme un processus distinct de la progression tumorale. La formation tumorale dans ce modèle est induite chimiquement et permet l’utilisation de souches knockout pour étudier les effets des facteurs environnementaux ou des candidats thérapeutiques. Le modèle est bien adapté pour étudier le rôle du système immunitaire et de l’angiogenèse dans le cancer.

Il démontre une pathologie semblable de maladie au carcinome squamous de cellules dans les patients humains. Bien que cette méthode soit relativement facile à conduire, un calendrier précis est essentiel. Il est également important de prendre les mesures de sécurité appropriées lors de la manipulation du DMBA, qui est cancérigène.

Avant de commencer l’expérience, abritez des souris agressives âgées de sept à neuf semaines dans des cages séparées pour éviter les combats et les lésions cutanées. Pour l’induction du papillome cutané, rasez d’abord la peau arrière des animaux expérimentaux et pesez les souris individuellement. 48 heures après le rasage, utiliser une pipette pour appliquer 50 microgrammes de DMBA dans 200 microlitres d’acétone sur la zone rasée de chaque souris anesthésiée.

Pour la promotion du papillome cutané, sept jours après l’application du DMBA traiter la peau avec cinq microgrammes de TPA dans 200 microlitres d’acétone deux fois par semaine jusqu’à la fin de l’expérience. Examinez les animaux à la recherche de papillomes et photographiez et enregistrez la taille de chaque papillome individuel sur une carte chaque semaine. Une masse palpable supérieure à un millimètre de diamètre est considérée comme un papillome s’il reste plus d’une semaine.

Quand la réponse de tumeur atteint un plateau, récoltez le matériel approprié d’échantillon des animaux 24 heures après la dernière application de TPA et collectez des morceaux pleins d’épaisseur de peau pour l’analyse immunohistochemical. Utilisez un poinçon de biopsie pour recueillir des morceaux de peau à partir d’échantillons de papillome et de peau non papilloma pour l’expression des gènes et ou des anaylses protéiques et utilisez un scalpel pour recueillir des morceaux de papillome et de peau non papilloma pour l’analyse immunohistochimique. Puis recueillir la peau drainant les ganglions lymphatiques et un morceau de la rate pour l’analyse cytométrique de flux que vous le souhaitez.

Une différence statistiquement significative dans le temps libre de papillome et dans le nombre de papillomes entre les groupes expérimentaux est typiquement observée dans le modèle de tumeur de TPA de DMBA. Les analyses histologiques conviennent à l’étude de la structure des papillomes, de la morphologie de la peau ou de l’infiltration de cellules immunitaires d’intérêt. Il est essentiel d’appliquer uniformément le DMBA et le TPA sur la peau et d’appliquer le TPA à intervalles réguliers.

Il est également important de compter les papillomes régulièrement. Les mécanismes qui affectent le nombre et l’heure de la formation de tumeur peuvent être étudiés utilisant différentes méthodes, y compris l’immunohistochimie, la cytométrie de flux, le PCR quantitatif, et l’analyse de protéine. Cette technique conventionnelle peut être facilement adaptée et appliquée pour étudier les effets de différents gènes, facteurs environnementaux, ou thérapeutiques d’intérêt sur l’initiation et la progression tumorales.

La prudence est de mise lors de l’exécution de la technique puisque le DMBA est cancérigène et que l’acétone s’évapore rapidement. Un masque respiratoire approprié et l’utilisation de l’armoire d’écoulement sont recommandés.