Ce que nous avons introduit aujourd’hui est une méthode simplifiée modifiée et chirurgicalement efficace, pour établir l’ischémie du membre postérieur chez les souris ApoE. Cette méthode peut être mise en œuvre dans n’importe quelle animalerie. Le principal avantage de la méthode synoviale est un faible caractère invasif, utilisant une incision de moins de cinq millimètres.
La méthode a un hof d’apprentissage. Nous conseillons donc de pratiquer sur des modèles microchirurgicaux avant de travailler sur les animaux, qui vont être inclus dans l’analyse finale. La méthode sera démontrée par Kaixuan Yan, un docteur en médecine et l’étudiant de mon laboratoire.
Commencez par préparer l’équipement et les outils nécessaires à la chirurgie. Après avoir administré l’anesthésie à la souris, appliquez cette pommade sur les yeux pour prévenir la sécheresse. Ensuite, placez la souris sur un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle centrale à environ 37 degrés Celsius.
À l’aide d’un coton-tige et d’une crème dépilatoire, enlevez soigneusement les poils de la peau des membres postérieurs du côté droit. Posez la souris en position couchée sur le coussin chauffant sous un microscope à dissection. Utilisez de l’alcool pour désinfecter la peau et essuyez avec le coton loin du côté végétal de l’incision.
En utilisant la pince pointue et les ciseaux chirurgicaux, faites une incision d’environ trois à quatre millimètres au milieu de la région inguinale. Retirez soigneusement le tissu adipeux sous-cutané à l’aide d’une pince fine pointue pour exposer le faisceau neurovasculaire fémoral proximal. À l’aide d’un coton-tige humidifié avec une solution saline, éloignez soigneusement l’artère fémorale du nerf fémoral et de la veine fémorale.
Ensuite, à l’aide de la pointe d’une suture 7.0, percez soigneusement la membrane de la gaine fémorale. Ensuite, passez à 7-0 sutures résorbables à travers l’artère fémorale proximale et faites des nœuds doubles à l’aide des ciseaux à ressorts. Ensuite, transectez l’artère fémorale entre les deux liens.
Passez la suture résorbable 6-0 à travers le bord inférieur de l’incision et faites glisser doucement l’incision vers la région du côté droit du genou du membre postérieur pour exposer l’artère fémorale distale. Déplacez soigneusement le tissu sous-cutané de côté pour exposer le faisceau neurovasculaire. Disséquez l’artère fémorale de la veine fémorale et du nerf fémoral et utilisez du coton pour protéger le nerf.
Ensuite, à l’aide de la pointe d’une suture 7.0, percez la membrane de la gaine fémorale. Passez deux sutures résorbables 7-0 à travers l’artère fémorale distale et faites des nœuds doubles à l’aide des ciseaux à ressort pour transecter l’artère fémorale entre deux attaches. Ensuite, cousez l’incision à l’aide des sutures résorbables 6-0.
Placez la souris sur un coussin chauffant dans une cage propre et continuez à surveiller ses paramètres vitaux jusqu’à la récupération. Déterminer le succès de la double ligature de l’artère fémorale ou DLFA le lendemain par IRM. Avant la procédure DLFA, le poids des souris variait de 29,6 à 38,0 grammes.
Sept jours après la chirurgie DLFA, les poids variaient de 26,5 à 34,1 grammes, ce qui est nettement inférieur aux poids pré-DLFA. Les régions proximales et distales de l’AF droite n’ont montré aucune perfusion. Les résultats de l’échelle de Tarlov ont été significativement diminués un jour après la chirurgie.
Bien qu’ils aient lentement augmenté au cours des jours suivants, ils étaient encore inférieurs à la ligne de base jusqu’au septième jour. Les pattes des membres postérieurs ischémiques chez sept souris étaient incapables de s’étirer naturellement par rapport au côté controlatéral. De plus, quatre des souris présentaient une légère décoloration des pattes par rapport au côté controlatéral.
La coloration H & E du muscle GM droit a révélé des myofibres qui présentaient une nécrose ischémique irrégulière, où les cellules satellites proliférantes avaient remplacé les myofibres nécrotiques et étaient distribuées dans une masse ou avec une dispersion régulière. Les myofibers présentant une infiltration inflammatoire par des macrophages multinucléés avaient perdu leurs caractéristiques morphologiques normales, avec très peu de myofibres régénérés présents. Les sections transversales de ces myofibres régénérés étaient rondes.
Le cytoplasme était coloré en rouge et un petit noyau ou plusieurs noyaux étaient situés au centre. Cependant, ce type de schéma inflammatoire n’a pas été observé dans le GM gauche. La coloration des anticorps CD31 effectuée pour observer la densité microvasculaire a indiqué que les membres postérieurs ischémiques présentaient une densité microvasculaire significativement plus élevée que le côté non ischémique. La chose la plus importante est la dissection de l’artère fémorale.
L’opérateur doit avoir de l’expérience dans les techniques microchirurgicales et se familiariser avec l’anatomie des membres postérieurs de la souris. En principe, cette méthode pourrait également être utilisée pour étudier les lésions d’ischémie-reperfusion dans la jambe. Ainsi, l’artère peut être obstruée avec une pince à vaisseau mou avant de permettre la reperfusion.
