Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de la reproduction. Et l’endocrinologie. Et sont applicables à l’étude du syndrome des ovaires polykystiques ou pcos et hyperandrogénie.
L’avantage de cette technique est qu’elle facilite une libération cohérente, uniforme et à long terme des hormones d’une manière efficace coûteuse. JHUs traitant la procédure sera Ping Xue, un technicien de mon laboratoire. Pour la préparation de granulés de dihydrotestostérone ou de DHT, utilisez une lame de rasoir pour couper un morceau de tube de silicone de 15 millimètres.
Et utilisez une seringue de trois millilitres équipée d’une aiguille émoussée de calibre 20 pour injecter du silicone adhésif médical de deux à cinq millimètres dans une extrémité du tube. Laisser sécher le tube toute la nuit. Et vérifiez s’il y a des bulles d’air à l’extrémité scellée.
Le port de l’équipement de protection individuelle approprié verser la poudre DHT dans un bateau de chemin en plastique dans le flowhood. Impressionnez l’extrémité ouverte du tube plafonné adhésif dans la poudre. À l’aide d’un grand trombone redressé, remamez la poudre dans le tube, jusqu’à ce que la DHT atteigne la profondeur expérimentale appropriée.
Ensuite, sceller le côté ouvert du tube avec du silicone pendant la nuit. Le lendemain matin, couper chaque côté scellé pour obtenir une longueur de deux millimètres de silicone des deux côtés de la DHT et pas de granulés de contrôle DHT. Conservez ensuite les granulés dans le tube conique de 50 millilitres enveloppé de papier d’aluminium à température ambiante jusqu’à trois mois.
Pour la génération de modèles de souris PCOS, équilibrer jusqu’à 20 DHT ou contrôler les granulés dans des tubes coniques distincts de 50 millilitres contenant 30 millilitres de salin de 0,9 % pendant 24 heures à 37 degrés Celsius. Le lendemain, confirmer l’absence de réponse au pincement des orteils chez une souris femelle anesthésiée de deux mois et utiliser de la gaze stérile pour administrer l’iode séquentiel povidone et 70 pour cent de gommages d’éthynol à la zone chirurgicale. Ensuite, faire une incision de cinq millimètres à travers la peau près du cou.
Et utilisez un trocar de dix jauges pour faire un tunnel de 15 millimètres dans la direction rostrale. Utilisez le trocart pour insérer une pastille dorsalement dans le tunnel et sceller l’incision avec l’adhésif chirurgical. Rapprochez manuellement les bords de la plaie avec des forceps et utilisez des coups de brossage doux pour appliquer trois couches minces de film d’adhésif liquide à un centimètre de chaque côté des bords de la plaie opposés.
Placez ensuite la souris seule dans une cage sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à ce que la charge complète. Remplacement de la pastille toutes les quatre semaines pour maintenir un niveau constant d’exposition aux androgènes. Trois jours après l’insertion de granulés, utilisez une pipette p10 pour gicler dix microlitres de solution saline stérile dans la cavité vaginale et utiliser la pointe pipette pour récupérer immédiatement la solution saline.
Étendre l’échantillon salin des cellules vaginales sur une lame étiquetée. Et laisser sécher la solution saline à température ambiante. Fixer les glissières séchées dans un contenant de 100 pour cent d’éthynol pendant au moins cinq minutes.
Ensuite, tacher les diapositives pendant une minute chacune dans le tampon B et tampon C à partir d’un kit de coloration dif-rapide. À la fin de l’incubation tampon C, laver les glissières avec de l’eau du robinet pendant trois secondes et les sécher à température ambiante. Pour déterminer la cyclicité estrous voir les diapositives sous l’objectif dix fois d’un microscope léger.
Comptez les jours dans chaque étape et divisez par le nombre total de jours pour calculer le temps de pourcentage à chaque étape. Pour tester la tolérance au glucose, 20 jours d’insertion DHT, jeûner les souris pendant la nuit. Pesez les souris le lendemain matin, et utilisez un glucomètre et des bandes d’essai pour mesurer le taux de glucose basilic du sang de veine de queue.
Injecter aux souris deux grammes par kilogramme de poids corporel de 20 pour cent de dextrose. Mesurez ensuite le taux de glucose des échantillons de sang de veine de queue à 15, 30, 60, 90, 120 minutes après administration de dextrose. Pour acquérir la progéniture femelle des dames insérées de DHT, déplacez la souris femelle à l’essai dans la cage avec un mâle fertile prouvé au jour 15, suivant l’insertion de granulés.
Documentez le poids corporel des dames chaque semaine pour déterminer si la souris est enceinte. Le septième jour postnatal, tremper une pointe de lancette dans la pâte de tatouage et marquer chaque chiot avec un tatouage sur l’orteil. Peser les souris marquées tous les sept jours jusqu’à l’âge de 70 jours.
Entre la date postnatale 12 à 16, l’oreille poinçonner les souris pour les numéroter selon le système comme illustré dans la figure. Pour distinguer le sexe, examinez le côté ventral de chaque souris marquée. Les femelles auront des mamelons visibles.
Pour recueillir des échantillons de sang pour diverses analyses en aval utiliser une lancette pour recueillir le volume expérimental approximatif de sang entre neuf et dix heures par saignement de veine submandibulaire. Et centrifuger les échantillons pour permettre la collecte du sérum. Rangez ensuite les échantillons de sérums dans des tubes de micro-centrifugeuse de 1,5 millilitre à moins 80 degrés Celsius jusqu’à leur analyse.
Pour évaluer la puberté chez la progéniture femelle DHT, tous les jours après le sevrage au jour post-natal 21, vérifiez l’ouverture vaginale par inspection visuelle. Et utiliser des calibres pour mesurer la distance ano-génitale. Bien que les valeurs absolues du sérum DHT soient différentes entre la spectrométrie de masse et l’analyse Elisa, le changement folklorique relatif de la DHT par rapport à l’insertion sans DHT est similaire à la fois des analyses et des expériences.
Les niveaux de DHT sont sensiblement augmentés de la pré-conception par la grossesse dans les souris de DHT et aucune souris de DHT. Cependant, les niveaux de DHT sont deux fois plus élevés chez les souris DHT par rapport à aucune souris DHT à la fois aux points de temps pré-conceptionnel et gestationnel. Les filles adultes de DHT montrent des différences dans la fonction reproductrice.
Par exemple, la cyclicité eestrous perturbée comparée à l’adulte aucune fille de DHT éprouvant des temps sensiblement plus longs dans metestrus diestrus et moins de temps dans pro-esterous et esterous. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler d’incuber les granulés pendant 24 heures avant qu’ils ne soient utilisés pour la libération uniforme de l’hormone. Après cette procédure, les conséquences reproductives et métaboliques de l’exposition au DHT peuvent également être examinées.
Après son développement, cette technique a ouvert la voie à des chercheurs dans le domaine de l’endrochronologie et des interactions fœtales maternelles pour étudier le SOPK et l’impact de l’hyperandrogénie de bas niveau chez les souris femelles. N’oubliez pas que le travail avec DHT peut être extrêmement dangereux et les précautions telles que le port de gants et d’un masque et lunettes, et le travail dans une hotte de bio-sécurité, doit toujours être prise lors de l’exécution de cette procédure.
