Assemblage modulaire basé sur CRISPR pour la construction à haut débit d’une bibliothèque de plasmides UAS-cDNA/ORF

Le criblage génomique fonctionnel offre une approche puissante pour sonder la fonction des gènes et repose sur la construction de bibliothèques de plasmides à l’échelle du génome. Les approches conventionnelles pour la construction de bibliothèques de plasmides prennent du temps et sont laborieuses. Pour répondre à cette question, nous développons une méthode simple et efficace, l’assemblage modulaire basé sur CRISPR, ou CRISPRmass.

Grâce au clivage de séquences vectorielles partagées d’ADNc ou de plasmide ORF par CRISPR/Cas9 et à l’insertion ultérieure de modules UAS par assemblage adjacent, la procédure de construction d’une bibliothèque de plasmides à l’échelle du génome par CRISPRmass est normalisée comme des réactions massivement parallèles en tube à essai en deux étapes avant la transformation bactérienne. CRISPRmass permet la construction simple, rapide, efficace et rentable de diverses banques de plasmides. Il peut également être appliqué à l’édition de diverses banques de plasmides à l’échelle du génome en général, et c’est une alternative à la technologie des passerelles dans l’édition de bibliothèques de plasmides à haut débit, ouvrant la voie à l’étude mondiale des réseaux biologiques.