Autore in primo piano: Semplificare la costruzione di librerie di plasmidi a livello di genoma utilizzando CRISPRmass

Lo screening genomico funzionale offre un approccio potente per sondare la funzione genica e si basa sulla costruzione di librerie plasmidiche a livello di genoma. Gli approcci convenzionali per la costruzione di librerie di plasmidi richiedono molto tempo e laboriosità. Per rispondere a questa domanda, sviluppiamo un metodo semplice ed efficiente, l'assemblaggio modulare basato su CRISPR o CRISPRmass.

Attraverso la scissione di sequenze vettoriali condivise di cDNA o plasmide ORF da parte di CRISPR/Cas9 e il successivo inserimento di moduli UAS mediante assemblaggio adiacente, la procedura di costruzione di una libreria di plasmidi a livello di genoma mediante CRISPRmass è standardizzata come reazioni in provetta in due fasi massivamente parallele prima della trasformazione batterica. CRISPRmass consente la costruzione semplice, veloce, efficiente ed economica di varie librerie di plasmidi. Può anche essere applicato all'editing di varie librerie di plasmidi a livello di genoma in generale, ed è un'alternativa alla tecnologia gateway nell'editing di librerie di plasmidi ad alto rendimento, aprendo la strada agli studi globali sulle reti biologiche.