Montagem modular baseada em CRISPR para construção de alto rendimento de uma biblioteca de plasmídeos UAS-cDNA/ORF

A triagem genômica funcional oferece uma abordagem poderosa para sondar a função do gene e depende da construção de bibliotecas de plasmídeos em todo o genoma. As abordagens convencionais para a construção de bibliotecas de plasmídeos são demoradas e trabalhosas. Para resolver essa questão, desenvolvemos um método simples e eficiente, a montagem modular baseada em CRISPR, ou CRISPRmass.

Por meio da clivagem de sequências vetoriais compartilhadas de cDNA ou plasmídeo ORF por CRISPR/Cas9 e subsequente inserção de módulos UAS por montagem adjacente, o procedimento de construção de uma biblioteca de plasmídeos em todo o genoma por CRISPRmass é padronizado como reações massivamente paralelas de tubo de ensaio de duas etapas antes da transformação bacteriana. O CRISPRmass permite a construção simples, rápida, eficiente e econômica de várias bibliotecas de plasmídeos. Também pode ser aplicado à edição de várias bibliotecas de plasmídeos de todo o genoma em geral, e é uma alternativa à tecnologia de gateway na edição de bibliotecas de plasmídeos de alto rendimento, abrindo caminho para os estudos globais de redes biológicas.