Tubal ציטולוגיה של שפופרת Tube ככלי מבטיח עבור סרטן השחלות איתור מוקדם

Summary

בחנו שיטת ציטולוגית צינלית על ידי דגימה של צינור החצוצרה ישירות כריתה שלאחר הניתוח ככלי של סרטן השחלות איתור מוקדם. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאסוף תאים צינור החצוצרות מן הדגימות כירורגית קיבל.

Abstract

נכון לעכשיו, מקובל כי הרוב המכריע של השחלות גבוהה כיתה קרצינומה (HGSC) מקורם בחצוצרות. עם זאת, בשל היעדר סמנים או כלים לזיהוי סרטן השחלות, איתור מוקדם של HGSC נשאר מאתגר. הדגימה הישירה של צינור החצוצרות יכולה להגביר את הרגישות לאיתור תאים ניאופלסטיים כאשר הגידול אינו גלוי לעין. פיתחנו נוהל לאיסוף תאי צינור החצוצרה ישירות מדגימות כירורגיות שהתקבלו לאחרונה, אשר הראו מתאם מצוין עם ממצאים היסטולוגיים. גישה זו מציבה בסיס לתועלת העתידית של הקרנה לפרוסקופית מינימלית פולשנית באוכלוסיות חולים בסיכון גבוה.

Introduction

Ovarian high-grade sercinoma serius (HGSC) הוא הנפוץ ביותר וקטלני סוג של סרטן השחלות, והוא נשאר איום גדול על בריאות הציבור. בעשור האחרון, החוקרים הציעו כי הרוב המכריע של מקרים HGSC נובעים מן החצוצרות במקום השחלה עצמה ^{1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6} . קרצינומה של הסרום intraepithelial קרצינומה (STIC) הוא מקובל כמבשר של HGSC ^{1 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11} . עד כה, גילוי מוקדם של סרטן השחלות נשאר קשה. פרוטוקול ההקרנה הנוכחי עם אנטיגן משולב סרטן 125 (CA-125) ו אולטרסאונד transvaginal הראוהשפעה קטנה על תמותת המטופלים ^{12 , 13} . דגימת רירית הרחם לאבחון סרטן השחלות הראתה רגישות נמוכה ביותר ¹⁴ . שני מחקרי חלוצים ^{15 , 16} בחנו את השימוש של דגימה ישירה לפרוסקופי של צינורות חצוצרות שפירים מאופיין תכונות ציטולוגיות של אפיתל שפיר שפיר. אנו מאמינים כי דגימה ישירה של צינור החצוצרות יכול להיות גם דרך מעשית ופשוטה לאיתור STIC או HGSC בשלב מוקדם כאשר הגידול אינו דמיינו על ידי הדמיה.

למרות המטרה הסופית היא התועלת של הקרנה לפרוסקופית פולשנית מינימלית בחולים עם גורמי סיכון גבוה, המטרות המיידיות של המחקר הנוכחי הם: 1) כדי לקבוע את התכונות הבסיסיות cytological של epithelia tubal שפיר; ו - 2) לבדוק את הרגישות ואת הספציפיות של ציטולוגיה צינורי באיתור סרטן השחלותErs ו מבשרי הסרטן. לכן פיתחנו את השיטה הבסיסית cytology tubal כדי לבדוק את האפקטיביות של פרוטוקול זה בזיהוי HGSC ו מבשר STIC ^{17 שלה} . במחקר זה, ניצלנו את נפח גדול של דגימות כירורגיות קיבל באופן קבוע, וביצע דגימה ישירה של החצוצרה החצוצרה נכרת בנוסף נהלים שגרה שגרתית.

מחקר שנערך לאחרונה שלנו ¹⁷ הראה כי אבחנה ציטולוגית של ממאירים או חשד לממאירות בקורלציה גבוהה עם האבחנה היסטולוגית HGSC (100%). בנוסף, הערכה ציטולוגית tubal זיהו neoplasia intratubal רק בשני מקרים היסטולוגית אישר STIST מעורב במחקר זה. אנו מאמינים כי cytology tubal יש פוטנציאל גדול גילוי מוקדם יספק מידע בעל ערך עבור ניהול המטופל.

Protocol

אישור של מוסד ביקורת התקבל מאוניברסיטת אריזונה על ביצוע מחקר זה. טופלו הסכמות הסכמה בחולה.

1. בחירת החולה

הערה: אישור מועצת המנהלים של המוסד התקבל מאוניברסיטת אריזונה. סך של 38 חולים גויסו. הגילאים של החולים נעו בין 32 ל -86 שנים עם ממוצע של 55 שנים, מתוכם 26 חולים היו לאחר גיל המעבר ו -12 חולים היו לפני גיל המעבר.

1. לקבל הסכמה מדעת מכל חולה.

2. נוהל שפופרות תאי החצוצרות

הערה: החולים שנכללו במחקר הנוכחי היו מתוכננים כולם לכריתת רחם מלאה וכריתת שתן דו-צדדית דו-צדדית עבור הפחתת סיכון מניעתי או ממאירות. הפרטים של ניתוח לא היו ידועים עבור הפתולוג שביצע את המחקר ציטולוגיה.

1. מיד לאחר הניתוחכריתה קלית, לבחון את דגימת הרקמות הטריות כולל הרחם, השחלות הדו-צדדיות, ואת צינורות החצוצרה הדו-צדדיים בזהירות כדי לזהות את החצוצרה הדו-צדדית.
2. איסוף ומקום תאים צינור חצץ לתוך פתרון משמר (ראה טבלה של חומרים) בקבוקון בתוך 30 דקות של clamping את אספקת הדם; המשמר המומלץ הוא פתרון מתרן המבוסס על מתנול.
   הערה: השתמש במברשת מגע עדינה לאוסף תא הגנבים (השלבים הבאים). למעט מקרים נדירים שבהם החצוצרה נשלחת מנותקת מן הרחם, החדרת ראש מברשת לאיסוף תאים מן fimbria tubal מתרחשת בדרך כלל כאשר החצוצרות מחוברת לרחם.
   1. בעזרת מלקחיים קטנים, הכנס את המברשת (ראה טבלה של חומרים ) לתוך לומן של החצוצרה דרך סוף fimbriae. לאט לאט לסובב בכיוון השעון ולהזיז את המברשת קדימה דרך החלק infundibular של הנפילהצינור אפיאני, ואז אמפולה עד שהיא מגיעה אל האצבע.
   2. לאט לאט לסובב את המברשת נגד כיוון השעון כדי למשוך את המברשת. ודא כי המהירות המקסימלית של המברשת בתוך לומן הוא איטי יותר 1 ס"מ / ש.
   3. שוטפים את המברשת בתמיסה המשמרת (בבקבוקון) על ידי סיבוב ומערבל את המברשת 10 פעמים בפתרון.
   4. הדק את מכסה הבקבוקון.
   5. רשום את המידע של המטופל ואת לרוחב של הדגימה.
   6. חנות בקבוקון במקרר 4 מעלות צלזיוס (עד) 6 חודשים.

3. Tubal ציטולוגיה הכנת שקופיות

1. טען את הבקבוקון מדגם לתוך המעבד האוטומטי להכנת שקף.
   הערה: אנו משתמשים במעבד האוטומטי להכנת הכנת שקפים. השלבים הבאים מבוצעים באופן אוטומטי לאחר הבקבוקון מדגם ממוקם לתוך המעבד: (1) התאים ופסולת מופרדים ו מפוזרים באמצעות סיבוב של מסנן הבדיקה בתוך המדגםצְלוֹחִית. (2) תאים Tubal נאספים מן המשטח החיצוני של המסנן על ידי ריק עדין. (Iii) המסנן הוא הפוך ולחץ על השקופית כדי לאפשר לתאים לדבוק באזור עגול בתוך השקופית. (Iv) השקופית היא קבועה נוספת באמבטיה מקבע התא ומוכן מכתים וניתוח cytology. למרבה הצער, אין שיטה ידנית חלופית, אשר יכול להניב תוצאות עם איכות דומה.

4. השתנה Papanicolaou פרוטוקול מכתים

1. הכתם את השקופיות שנעשו משלב 3.1 על ידי הפעלת הליך אוטומטי non-gyn automatized, כפי שמוצג בטבלה 1 .
   הערה: שיטת מכתים מייצג שינוי של טכניקת מכתים Papanicolaou שאנחנו משתמשים באופן שגרתי עבור דגימות שאינם גינקולוגים. אנו משתמשים במעבד רקמות אוטומטי כדי להכתים כמה שקופיות. בחרנו את הליך Non-Gyn מכתים על ההליך מכתים גין במחקר זה. Eosin בשימוש הוא EA-65, במקום EA-50 המשמשדגימות גינקולוגיות. בנוסף, OG-6 בהליך מכתים גין, אשר בעיקר עבור מכתים תא קשקשי, אינו נכלל בהליך מכתים מאז תאים קשקשיים צפויים להיראות במחקר זה. EA65 (Eosin Azure) הוא פתרון הכתם הנגדי המורכב של 3 צבעים: Eosin Y, ירוק FCF ירוק, חום ביסמרק Y. ההליך מתואר בטבלה 1 .
2. בצע הליך הידוק מהיר של פאפ באופן הבא.
   1. טובלים את השקופית עשה בשלב 3.1 לתוך אתנול 95%, 10 פעמים, עם כל מטבל לוקח בערך 1 s.
   2. טובלים את השקופית לתוך H ₂ O, 10 פעמים, עם כל מטבל לוקח בערך 1 s.
   3. יוצאים את השקופית hematoxylin עבור 10 - 60 s.
   4. טובלים את השקופית לתוך H ₂ O, 10 פעמים, עם כל מטבל לוקח בערך 1 s.
   5. טובלים את השקופית לתוך אתנול 95%, 10 פעמים, עם כל מטבל לוקח בערך 1 s.
   6. יוצאים שקופית EA65 עבור 1 - 3 דקות.
   7. טובלים את שקופית intO H ₂ O, 10 פעמים, עם כל מטבל לוקח בערך 1 s.
   8. טובלים את השקופית לתוך אתנול 95%, 10 פעמים, עם כל מטבל לוקח בערך 1 s.
   9. טובלים את השקופית בקסילן עד שהשקופית תתבהר.
      הערה: זהו שינוי Papanicolaou הליך מכתים. שיטה זו משמשת שיטת כתם מהירה יותר במקרים עם זמן מוגבל או שטח כמו השאיפה באתר המחט בסדר דגימות STAT. הליך זה מספק מכתים איכות דומה כמו הליך non-Gyn automatized stain. הנוהל מתואר בטבלה 2 .

5. ספין תאים על שקופיות

הערה: שלושה שקופיות cytospin מיוצרים עבור כל הדגימה. שקופית אחת היא H & E מוכתמים להשוואה מורפולוגית עם שקופית ציטולוגיה. שני שקפים לא מוכתמים נעשו עבור המחקר בעתיד IHC מכתים. השלבים המפורטים של סעיף זה אינם מוקד מאמר זה; לכן, לא נדון בהם בהרחבהetails.

1. הכן cytocentrifuge עם שקופית שכותרתו, משפך הדגימה מסנן עבור כל דגימה להיבדק.
2. לרכז את התאים על ידי centrifuging במשך 5 דקות ב 200 x גרם.
3. הסר כמחצית supernatant ולאחר מכן מחדש להשעות את התאים על ידי pipetting עדין.
4. הוסף 200 μL של ההשעיה כל תא למשפך הדגימה.
5. ספין ב 250 xg במשך 5 דקות. בזהירות להסיר את השקופיות (ים) מן cytocentrifuge ולהעביר אותם אתנול 95% עבור קיבעון.
6. יבש יבש לפני מכתים ולאחסון לטווח ארוך.
   הערה: בהתאם לצפיפות התאים בשקופיות הסופיות, ניתן לדלג או להתאים את שלב 5.2 ואת שלב 5.3. במחקר זה, אנו דורשים לפחות 2 אשכולות התא הנוכחי לכל להציג כוח גבוה לצפיפות הסלולר נאותה.

6. חתך ובוחן בהרחבה את פרוטוקול הסיום (SEE-FIM)

1. תקן את הדגימה כולה (כולל הרחם, צינורות החצוצרה הדו-צדדית והשחלות)ב 10% פורמלין לפני גרוס כדי למזער פילינג.
2. בעדינות ובזהירות לנתק את החצוצרות צינורות מן הרחם בבית היתוך באמצעות מלקחיים קטנים מספריים. אם הידבקות קיים, בזהירות לנתח את סוף fimbriated ממשטח השחלה באמצעות מלקחיים קטנים מספריים; צעדים אלה הם חיוניים כדי למזער זיהום לחצות את הגידול בין השחלה ואת החצוצרות בגלל הקירבה האינטימית שלהם.
3. לקטוע את infundibulum ו fimbriae קטע (דיסטלי 1.0 - 2.0 ס"מ של החצוצרות צינור) משאר הדגימה.
4. סעיף infundibulum ו fimbriae longitudinally במרווחי 2 מ"מ. שלח את כל הסעיפים בטוטו לבחינה היסטולוגית.
5. סעיף ismmus ו ampulla במרווחים 2-3 מ"מ להגיש לחלוטין.

תוצאות

המחקר הקודם שלנו הראה כי דגימה ישירות מן החצוצרות החצוצרות נכרת באמצעות מברשת מגע עדין יכול להניב כמותית ואיכותית נאותה הדגימה להערכה ציטולוגית נוספת. בנוסף, השילוב של הכנת שקופיות אוטומטית שינוי Papanicolaou מכתים לאפשר הפתולוג כדי לדמיין טוב יותר את ה...

Discussion

ניתוחי מלחה דו-צדדיים מניעתית או סלפינגו-אופורקטומומיה הראו ירידה בסיכון לפתח HGSC באוכלוסיות בסיכון גבוה, כמו נשים עם מוטציות גנטיות של BRCA ותולדות סרטן משפחתיות חזקות. עם זאת, סטריליות ואת גיל המעבר כירורגית שנגרמו על ידי ניתוח הן השלכות חמורות ולעשות החלטה קשה, במיו?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cytobrush plus GT gentle touch of Medscand sample collection kit	CooperSurgical	C0112
ThinPrep preservCyt solution	HOLOGIC	234005
ThinPrep 2000 Processor	HOLOGIC	70031-001
Papanicolaou Stain, EA 65	sigma aldrich	HT40432
95% Ethanol	sigma aldrich	652261
100% Ethanol	sigma aldrich	493538
Xylene	sigma aldrich	214736
Hematoxylin	sigma aldrich	H9627
Sakura Tissue Tek 2000 tissue processor	SAKURA	TISSUE-TEK VIP 2000
Mayo Dissecting Scissors,5.5 straight	Pilgrim medical equiment	FA710-45
Chemware Forceps	United state plastic corp	76122
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades,short	SAKURA	4785
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades handle,short	SAKURA	4786