Yumurtalık Kanseri Erken Teşhisi İçin Umut Verici Bir Araç Olarak Fallop Tüpünün Tubal Sitolojisi

Özet

Yumurtalık kanseri erken teşhisinin bir aracı olarak fallop tüpünü direkt olarak cerrahi sonrası eksizyonu örnekleyerek bir tubal sitolojik yöntem araştırdık. Burada, yeni alınan cerrahi örneklerden fallop tüp hücreleri toplamak için bir protokol sunuyoruz.

Özet

Günümüzde, over yüksek dereceli seröz karsinomanın (HGSC) büyük çoğunluğunun fallop tüpünden kaynaklandığı yaygın olarak kabul edilmektedir. Bununla birlikte, yumurtalık kanseri tanımlaması için belirteçlerin veya araçların olmamasından dolayı, HGSC'nin erken teşhisi zorlayıcı olmaya devam etmektedir. Fallop tüpünün doğrudan örneklenmesi, tümör gözle görünmüyorsa neoplastik hücrelerin saptanması için duyarlılığı artırabilir. Yeni alınan cerrahi örneklerden fallop tüp hücrelerini doğrudan toplamak için bir prosedür geliştirdik ve bu histolojik bulgularla mükemmel korelasyon gösterdi. Bu yaklaşım, gelecekte yüksek riskli hasta popülasyonlarında minimal invaziv laparoskopik taramanın kullanılmasına zemin hazırlamaktadır.

Giriş

Yumurtalık yüksek dereceli seröz karsinom (HGSC), en yaygın ve öldürücü yumurtalık kanseri türüdür ve halk sağlığı için büyük bir tehdit olmaya devam etmektedir. Son on yılda, araştırmacılar HGSC vakalarının büyük çoğunluğunun yumurtalık yerine ^{1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6} fallop tüplerinden kaynaklandığını öne sürmüşlerdir. Serum tubal intraepitelyal karsinom (STIC), HGSC ^{1 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11'in} prekürsörü olarak yaygın olarak kabul edilmektedir. Şimdiye kadar, yumurtalık kanseri erken teşhisi zor olmaya devam etmektedir. Kombine kanser antijen 125 (CA-125) ve transvajinal ultrason ile mevcut tarama protokolüHasta mortalitesi üzerine çok az etki ^{12 , 13} . Over kanseri saptamasında endometriyal örnekleme son derece düşük hassasiyet gösterdi ¹⁴ . ^{15 , 16} nolu iki öncü çalışma, iyi huylu fallop tüplerinin laparoskopik doğrudan örneklenmesinin kullanımını araştırmış ve benign tübal epitelin sitolojik özelliklerini karakterize etmiştir. Fallop tüpünden direkt örneklemenin, tümörün görüntüleme ile görülemediği erken bir aşamada STIC veya HGSC'nin saptanması için pratik ve doğrudan bir yol olabileceğine inanıyoruz.

Nihai amaç, yüksek risk faktörlü hastalarda minimal invaziv laparoskopik taramanın faydası olmasına rağmen, şu andaki çalışmanın asıl amacı şudur: 1) Benign tübal epitelin bazal sitolojik özelliklerini oluşturmak; Ve 2) yumurtalık kanseri tespitinde tüp sitolojisinin hassasiyetini ve özgüllüğünü test etmekErs ve kanser öncülleri. Bu nedenle, bu protokolün HGSC ve onun prekürsörü STIC ^17'nin saptanmasında etkinliğini test etmek için aşağıdaki temel tüp sitolojisi yöntemini geliştirdik. Bu çalışmada, düzenli olarak alınan cerrahi örneklerin büyük bir bölümünü kullandık ve düzenli grossing prosedürlerine ek olarak cerrahi olarak kesilen fallop tüpünün doğrudan örneklenmesini yaptık.

Bizim son çalışmada ¹⁷ malign veya malignite şüphesi sitolojik tanı son derece HGSC (% 100) histolojik tanı ile ilişkili olduğunu göstermiştir. Buna ek olarak, tubal sitolojik değerlendirme, bu çalışmaya katılan iki histolojik olarak doğrulanmış STIC olgusunda intratubal neoplaziyi saptamıştır. Tüp sitolojisinin erken tespitte büyük potansiyele sahip olduğuna ve hasta yönetimi için değerli bilgiler sağlayacağına inanıyoruz.

Protokol

Bu çalışmanın yürütülmesinden dolayı University of Arizona tarafından Kurumsal Değerlendirme Kurulu onayı alındı. Bilgilendirilmiş hasta onay formları elde edildi.

1. Hasta Seçimi

NOT: Bir Kurumsal Gözden Geçirme Kurulu onayı Arizona Üniversitesi'nden alınmıştır. Toplam 38 hasta çalışmaya alındı. Hastaların yaşları 32-86 arasında değişmekte olup, ortalama yaş 55, bunlardan 26'sı menopoz sonrası, 12'si menopoz öncesi idi.

1. Her bir hastanın bilgilendirilmiş onayı alın.

2. Fallop Tüp Hücreleri Toplama Prosedürü

NOT: Mevcut çalışmaya dahil olan hastaların profilaktik risk azalması veya malignite için total histerektomi ve bilateral salpingo-oofrektomi yapılması planlandı. Ameliyatın ayrıntıları, sitoloji çalışmasını yapan patolog için bilinmemektedir.

1. Surgi bittikten hemen sonraRahim, iki taraflı yumurtalıklar ve bilateral fallop tüplerini içeren taze doku örneğini inceleyerek ikili fallop tüpünü tanımlayın.
2. Kan kaynağını kelepçelendirerek 30 dakika içinde fallop tüp hücrelerini koruyucunun içine yerleştirin (bakınız Malzeme Tablosu). Önerilen koruyucu, metanol bazlı, tamponlanmış bir koruyucu çözeltidir.
   NOT: Tüp hücresi toplanması için hafif bir dokunmatik fırça kullanın (gelecek adımlar). Fallop tüpünün uterusdan ayrıldığı ender durumlarda hariç olmak üzere, tubal fimbriadan hücreleri toplamak için bir fırça kafası takmak, genellikle fallop tüpü uterusa bağlandığında gerçekleşir.
   1. Küçük bir forseps yardımı ile fırçayı fimbrianın ucundan fallop tüpünün lümenine sokun (bkz . Malzeme Tablosu ). Yavaşça saat yönünde döndürün ve fırçayı sonbaharın infundibular kısmı boyunca öne doğru hareket ettirinOpian tüpünü, ardından ampülden isthusa ulaşana kadar.
   2. Fırçayı dışarı çekmek için yavaşça döndürün ve fırçayı saat yönünün tersine tersine çevirin. Fırçanın lümen içindeki maksimum hızının 1 cm / s'den daha yavaş olduğundan emin olun.
   3. Fırça, solüsyonda 10 kez döndürüp döndürerek koruyucu bir solüsyonda (bir flakondaki) durulayın.
   4. Şişe kapağını sıkıştırın.
   5. Hastanın bilgilerini ve numunenin yanallığını kaydedin.
   6. Şişeyi 4 ° C'lik bir buzdolabında (6 ay kadar) saklayın.

3. Tubal Sitoloji Slayt Hazırlama

1. Slayt hazırlığı için örnek şişeyi otomatik işlemciye yükleyin.
   NOT: Otomatik işlemciyi slayt hazırlığı için kullanırız. Aşağıdaki adımlar, numune şişesinin işlemciye yerleştirilmesinden sonra otomatik olarak gerçekleştirilir: (i) Hücreler ve enkaz, numunedeki test filtresinin dönüşü ile ayrılır ve dağılır.şişe. (Ii) Tüp hücreleri, hafif bir vakumla filtrenin dış yüzeyinden toplanır. (Iii) Filtrenin ters çevrilmesi ve hücrelerin slayt içindeki dairesel bölgeye yapışmasına izin vermek için slaydın üzerine basılması. (Iv) Slayt, bir hücre fiksatif banyosunda sabitlenir ve boyama ve sitoloji analizi için hazırdır. Ne yazık ki, benzer kalitede sonuçlar verebilecek alternatif bir manuel yöntem yok.

4. Değiştirilmiş Papanicolaou Boyama Protokolü

1. Tablo 1'de gösterildiği gibi, otomatize non-gyn boyama prosedürünü çalıştırarak adım 3.1'de hazırlanan slaytları boyayın.
   NOT: Boyama yöntemi, jinekolojik olmayan örnekler için rutin olarak kullandığımız Papanicolaou boyama tekniğinin bir değişikliğini temsil eder. Bazı slaytları leke yapmak için otomatik bir doku işlemcisi kullanıyoruz. Bu çalışmada Gyn boyama prosedürü üzerinden Non-Gyn boyama prosedürünü seçtik. Kullanılan Eosin, EA-65 yerine EA-50 olarak kullanılır.Jinekolojik numuneler (Pap smear örneği). Ek olarak, esasen skuamöz hücre boyaması için olan Gyn boyama prosedüründe OG-6, boyama prosedürüne dahil değildir, çünkü bu çalışmada skuamoz hücrelerin görülmesi beklenmemektedir. EA65 (Eosin Azure), Eozin Y, Hızlı yeşil FCF ve Bismarck kahverengi Y olmak üzere 3 boya içeren bir sayaç boyama çözeltisidir. Prosedür, Tablo 1'de gösterilmektedir.
2. Aşağıdaki gibi manuel hızlı bir Pap boyama prosedürü uygulayın.
   1. Adım 3.1'de hazırlanan slaydı, her bir daldırma yaklaşık 1 s süren 10 kat% 95 etanol içine daldırın.
   2. Yaklaşık 1 saniye alan her daldırma ile, _H2O, 10 kat içine slayt batırın.
   3. Slayt 10 - 60 s boyunca hematoksilen içinde görünür hale getirilir.
   4. Yaklaşık 1 saniye alan her daldırma ile, _H2O, 10 kat içine slayt batırın.
   5. Her daldırma yaklaşık 1 s süren slayt% 95 etanol içine 10 kez batırın.
   6. EA65'deki slaydı 1 - 3 dakika süreyle ortaya çıkarın.
   7. Dip slayt intH ₂ O, 10 defa, her bir daldırma yaklaşık 1 s sürer.
   8. Her daldırma yaklaşık 1 s süren slayt% 95 etanol içine 10 kez batırın.
   9. Slayt kaybolana kadar slaydonu ksilen içine daldırın.
      NOT: Bu, değiştirilmiş bir Papanicolaou boyama prosedürüdür. Bu yöntem yerinde ince iğne aspirasyonu ve STAT numuneleri gibi sınırlı zaman veya mekan olan vakalar için daha hızlı bir leke yöntemi olarak kullanılır. Bu prosedür, otomatize Non-Gyn boyama prosedürü olarak karşılaştırılabilir kaliteli lekeler sağlar. İşlem Tablo 2'de gösterilmektedir.

5. Hücreleri Slaytlara Döndürün

NOT: Her numune için üç sitospin slayt yapılır. Bir slayt, sitoloji slaydı ile morfolojik karşılaştırma için boyanmış H & E'dir. Gelecekteki IHC boyama çalışması için iki lekelenmemiş slayt yapılmıştır. Bu bölümün ayrıntılı adımları bu makalenin odak noktası değildir; Bu nedenle, onları genişletilmiş d'de tartışmayacağızetails.

1. İncelenecek her numune için etiketli bir slayt, numune hunisi ve filtre ile bir sitosentrifüj hazırlayın.
2. 200 x g'de 5 dakika santrifüj ederek hücreleri konsantre hale getirin.
3. Süpernatanın yaklaşık yarısını çıkarın ve yavaşça pipetle hücreleri tekrar askıya alın.
4. Her bir hücre süspansiyonunun 200 μL'ini örnek hunisine ekleyin.
5. 5 dakika 250 x g'de döndürün. Slaytları sitozentrifüjden dikkatlice çıkarın ve tespit için% 95 etanol'e aktarın.
6. Boyamadan önce ve uzun süre saklama için hava kurur.
   NOT: Son slaytlardaki hücre yoğunluğuna bağlı olarak, adım 5.2 ve adım 5.3 atlanabilir veya ayarlanabilir. Bu çalışmada, yeterli hücre yoğunluğu için yüksek güç görünümü başına en az 2 hücre kümesi mevcut olmasını gerektirir.

6. Fimbriasyon Sonu (SEE-FIM) Protokolünü Bölümlendirme ve Kapsamlı Olarak İnceleme

1. Tüm örneği düzeltin (rahim, bilateral fallop tüpleri ve yumurtalıklar dahil)Eksfoliyasyonu en aza indirgemek için grossing öncesi% 10 formalin içinde.
2. Küçük forseps ve makas kullanarak fallop tüplerini izostan dokudaki uterusdan hafifçe ve dikkatle ayırın. Yapışma varsa, küçük forseps ve bir makas kullanarak yumurtalık yüzeyden tırtıklı kenarı dikkatlice parçalayın; Bu adımlar, yumurtalık ve fallop tüpleri arasındaki yakınmalarından ötürü tümör çapraz kontaminasyonunu en aza indirgemek için çok önemlidir.
3. Numunenin geri kalanından gelen infundibulum ve fimbriale segmenti (distal 1.0 - 2.0 cm fallop tüpü) parçalayın.
4. Infundibulum ve fimbriaları boyuna olarak 2 mm aralıklarla kes. Histolojik muayene için tüm bölümleri toto'ya gönderin.
5. Ayırma ve ampül 2 - 3 mm aralıklarla kesilip tamamen gönderin.

Sonuçlar

Önceki çalışmamız, hafif bir dokunuş fırçası kullanılarak kesilmiş fallop tüpünden doğrudan numuneleşmenin daha fazla sitolojik değerlendirme için niceliksel ve niteliksel olarak yeterli numuneye neden olabileceğini gösterdi. Buna ek olarak, otomatik slayt hazırlama ve modifiye Papanicolaou boyama kombinasyonu, patologun doğru tanı koymak için sitolojik ayrıntılarını daha iyi görselleştirmesini sağlar. İyi huylu fallop tüplerinden alınan bir numunenin ell...

Tartışmalar

Profilaktik bilateral salpenjektomi veya salpingo-ooforektominin, BRCA gen mutasyonları ve güçlü ailesel kanser öyküsü olan kadınlar gibi yüksek riskli popülasyonlarda HGSC gelişme riskini azalttığı gösterilmiştir. Bununla birlikte ameliyatın neden olduğu kısırlık ve cerrahi menopoz ciddi sonuçlar doğurur ve özellikle doğurganlık çağındaki kadınlar için zor bir karar verir. Bir önceki çalışmada tüp sitoloji ve histoloji ¹⁷ arasında mükemmel bir korelasyon gö...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cytobrush plus GT gentle touch of Medscand sample collection kit	CooperSurgical	C0112
ThinPrep preservCyt solution	HOLOGIC	234005
ThinPrep 2000 Processor	HOLOGIC	70031-001
Papanicolaou Stain, EA 65	sigma aldrich	HT40432
95% Ethanol	sigma aldrich	652261
100% Ethanol	sigma aldrich	493538
Xylene	sigma aldrich	214736
Hematoxylin	sigma aldrich	H9627
Sakura Tissue Tek 2000 tissue processor	SAKURA	TISSUE-TEK VIP 2000
Mayo Dissecting Scissors,5.5 straight	Pilgrim medical equiment	FA710-45
Chemware Forceps	United state plastic corp	76122
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades,short	SAKURA	4785
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades handle,short	SAKURA	4786