La cytologie tubaire de la trompe de Fallope est un outil prometteur pour la détection précoce du cancer de l'ovaire

Résumé

Nous avons exploré une méthode cytologique des trompes en échantillonnant l'échappée post-chirurgicale directement à l'échappée de Fallope en tant qu'outil de détection précoce du cancer de l'ovaire. Ici, nous présentons un protocole pour recueillir des cellules tubulaires de Fallope à partir de spécimens chirurgicaux fraîchement reçus.

Résumé

Actuellement, il est largement admis que la grande majorité du carcinome séreux de haute qualité ovarien (HGSC) provient de la trompe de Fallope. Cependant, en raison du manque de marqueurs ou d'outils pour l'identification du cancer de l'ovaire, la détection précoce de HGSC reste difficile. L'échantillonnage direct de la trompe de Fallope peut améliorer la sensibilité pour la détection des cellules néoplasiques lorsque la tumeur n'est pas visible. Nous avons développé une procédure pour recueillir des cellules de trompe de Fallope directement à partir de spécimens chirurgicaux fraîchement reçus, ce qui a montré une excellente corrélation avec les résultats histologiques. Cette approche jette les bases de l'utilité future du dépistage laparoscopique minimalement invasif dans les populations de patients à haut risque.

Introduction

Le carcinome séreux de haute qualité ovarien (HGSC) est le cancer le plus fréquent et létal du cancer de l'ovaire et demeure une menace majeure pour la santé publique. Au cours de la dernière décennie, les chercheurs ont suggéré que la grande majorité des cas de HGSC proviennent de la trompe de Fallope plutôt que de l'ovaire lui-même ^{1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6} . Le carcinome intra-épithélial tubaire serieux (STIC) est largement accepté comme précurseur de HGSC ^{1 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11} . Jusqu'à présent, la détection précoce du cancer de l'ovaire reste difficile. Le protocole de dépistage actuel avec l'antigène combiné contre le cancer 125 (CA-125) et l'échographie transvaginale a montréPeu d'effet sur la mortalité des patients ^{12 , 13} . L'échantillonnage de l'endomètre pour la détection du cancer de l'ovaire a montré une sensibilité extrêmement faible ¹⁴ . Deux études pionnières ^{15 , 16 ont} exploré l'utilisation de l'échantillonnage direct laparoscopique des trompes de Fallope et ont caractérisé les caractéristiques cytologiques de l'épithélium tubaire bénin. Nous croyons que l'échantillonnage direct de la trompe de Fallope peut également être un moyen pratique et direct de détecter STIC ou HGSC à un stade précoce lorsque la tumeur n'est pas visualisée par imagerie.

Bien que l'objectif ultime soit l'utilité du dépistage laparoscopique minimalement invasif chez les patients présentant des facteurs à haut risque, les objectifs immédiats de l'étude actuelle sont les suivants: 1) établir les caractéristiques cytologiques de référence de l'épithélium tubaire bénin; Et 2) Pour tester la sensibilité et la spécificité de la cytologie tubaire dans la détection de cancer de l'ovaireEt les précurseurs du cancer. Nous avons donc développé la méthode de cytologie tubaire de base suivante pour tester l'efficacité de ce protocole dans la détection de HGSC et son précurseur STIC ¹⁷ . Dans cette étude, nous avons profité du grand volume de spécimens chirurgicaux régulièrement reçus et avons effectué un échantillonnage direct de la trompe de Fallope excisée chirurgicalement en plus des procédures de prélèvement de routine.

Notre étude récente ^{17 a} montré que le diagnostic cytologique de malignité ou de suspicion de malignité est fortement corrélé au diagnostic histologique de HGSC (100%). De plus, l'évaluation cytologique des trompes a identifié la néoplasie intratubal dans les deux cas cliniquement confirmés de STIC impliqués dans cette étude. Nous pensons que la cytologie des trompes a un grand potentiel dans le dépistage précoce et fournira des informations précieuses pour la gestion des patients.

Protocole

Une approbation de l'Office d'examen institutionnel a été reçue de l'Université de l'Arizona pour mener cette étude. Des formulaires de consentement éclairés ont été obtenus.

1. Sélection du patient

NOTE: Une approbation du Conseil d'examen institutionnel a été obtenue auprès de l'Université de l'Arizona. Au total, 38 patients ont été recrutés. L'âge des patients variait de 32 à 86 ans avec une moyenne de 55 ans, dont 26 patients étaient post-ménopausés et 12 patients étaient pré-ménopausés.

1. Obtenez le consentement éclairé de chaque patient.

2. Procédure de collecte des cellules de trompe de Fallope

NOTE: Les patients inclus dans l'étude actuelle ont tous été programmés pour l'hystérectomie totale et la salpingo-ooforectomie bilatérale pour la réduction du risque prophylactique ou la malignité. Les détails de la chirurgie étaient inconnus pour les pathologistes qui ont effectué l'étude de cytologie.

1. Immédiatement après la surgiExcision calcique, examiner attentivement l'échantillon de tissus frais comprenant l'utérus, les ovaires bilatéraux et les trompes de Falopie bilatérales afin d'identifier la trompe de Falopie bilatérale.
2. Recueillir et placer les cellules des trompes de Fallope dans le flacon de la solution de conservation (voir le Tableau des matériaux) dans les 30 minutes suivant le serrage de l'approvisionnement en sang; Le conservateur recommandé est une solution conservatrice tamponnée à base de méthanol.
   REMARQUE: Utilisez une brosse douce pour la collecte des cellules tubulaires (étapes à venir). À l'exception des cas rares où la trompe de Fallope est détachée de l'utérus, l'insertion d'une tête de brosse pour collecter des cellules à partir de la fimbrie tubaire se produit généralement lorsque la trompe de Fallope est attachée à l'utérus.
   1. À l'aide d'une petite pince, insérez la brosse (voir le tableau des matériaux ) dans la lumière de la trompe de Fallope à travers la fin des fimbrias. Tournez lentement dans le sens des aiguilles d'une montre et déplacez la brosse vers l'avant à travers la partie infondante de l'automneTube opian, puis l'ampoule jusqu'à ce qu'elle atteigne l'isthme.
   2. Tournez lentement et inversez la brosse dans le sens inverse des aiguilles d'une montre pour retirer la brosse. Veillez à ce que la vitesse maximale de la brosse dans la lumière soit plus lente que 1 cm / s.
   3. Rincer la brosse dans la solution de conservation (dans un flacon) en tournant et en faisant tourbillonner la brosse 10 fois dans la solution.
   4. Serrer le bouchon du flacon.
   5. Notez l'information du patient et la latéralité du spécimen.
   6. Conservez le flacon dans un réfrigérateur à 4 ° C (jusqu'à 6 mois).

3. Cytologie Tubal Préparation de la diapositive

1. Chargez le flacon d'échantillon dans le processeur automatisé pour la préparation de la diapositive.
   REMARQUE: Nous utilisons le processeur automatisé pour la préparation des diapositives. Les étapes suivantes sont effectuées automatiquement après que le flacon d'échantillon est placé dans le processeur: (i) Les cellules et les débris sont séparés et dispersés par la rotation du filtre de test dans l'échantillonampoule. (Ii) Les cellules tubulaires sont collectées à partir de la surface extérieure du filtre par un vide doux. (Iii) Le filtre est inversé et appuyé contre la glissière pour permettre aux cellules d'adhérer à la zone circulaire à l'intérieur de la glissière. (Iv) La glissière est encore fixée dans un bain de fixation cellulaire et prête pour l'analyse de coloration et de cytologie. Malheureusement, il n'y a pas de méthode manuelle alternative, qui peut donner des résultats avec une qualité similaire.

4. Protocole de coloration Papanicolaou modifié

1. Tenez les diapositives à partir de l'étape 3.1 en exécutant la procédure de coloration non gynisée automatisée, comme illustré dans le tableau 1 .
   NOTE: La méthode de coloration représente une modification de la technique de coloration Papanicolaou que nous utilisons habituellement pour les spécimens non gynécologiques. Nous utilisons un processeur de tissus automatisé pour tacher des diapositives. Nous avons choisi la procédure de coloration non-Gyn sur la procédure de coloration Gyn dans cette étude. L'Eosine utilisée est EA-65, au lieu de l'EA-50 utilisé pourSpécimens gynécologiques (échantillon de Papanicolaou). En outre, OG-6 dans la procédure de coloration Gyn, qui est principalement pour la coloration des cellules squameuses, n'est pas inclus dans la procédure de coloration car aucune cellule squameuse ne devrait être observée dans cette étude. EA65 (Eosin Azure) est une solution de contre-coloration composée de 3 colorants: Eosin Y, Fast FC vert et Bismarck Brown Y. La procédure est illustrée dans le Tableau 1 .
2. Effectuez une procédure manuelle manuelle de dépistage du papier comme suit.
   1. Trempez la glissière faite à l'étape 3.1 dans l'éthanol à 95%, 10 fois, chaque rampe prenant environ 1 s.
   2. Trempez la glissière dans H ₂ O, 10 fois, chaque rampe prenant environ 1 s.
   3. Émerger la glissière dans l'hématoxyline pendant 10 à 60 s.
   4. Trempez la glissière dans H ₂ O, 10 fois, chaque rampe prenant environ 1 s.
   5. Trempez la glissière dans l'éthanol à 95%, 10 fois, chaque rampe prenant environ 1 s.
   6. Émerger la diapositive dans EA65 pendant 1 à 3 min.
   7. Dip the slide intO H ₂ O, 10 fois, chaque rampe prenant environ 1 s.
   8. Trempez la glissière dans l'éthanol à 95%, 10 fois, chaque rampe prenant environ 1 s.
   9. Trempez la glissière en xylène jusqu'à ce que la glissière devienne claire.
      NOTE: Il s'agit d'une procédure de coloration Papanicolaou modifiée. Cette méthode est utilisée comme une méthode de tache plus rapide pour les cas avec un temps ou un espace limité comme l'aspiration à l'aspiration fine sur place et les spécimens STAT. Cette procédure fournit une coloration de qualité comparable à la procédure de coloration non-Gynisée automatisée. La procédure est illustrée dans le tableau 2 .

5. Spin Cells sur les diapositives

REMARQUE: Trois diapositives cytospin sont réalisées pour chaque spécimen. Une diapositive est réalisée par H & E pour la comparaison morphologique avec la glissière de cytologie. Deux diapositives non colorées ont été réalisées pour la future étude de coloration par IHC. Les étapes détaillées de cette section ne font pas l'objet de cet article; Par conséquent, nous ne les discuterons pas dans dEtails.

1. Préparez une cytocentrifugeuse avec un coulisseau marqué, un entonnoir à échantillon et un filtre pour chaque échantillon à examiner.
2. Concentrer les cellules en centrifugant pendant 5 min à 200 x g.
3. Retirer environ la moitié du surnageant, puis réinstaller les cellules par pipetage doux.
4. Ajouter 200 μl de chaque suspension cellulaire à un entonnoir à échantillon.
5. Tourner à 250 xg pendant 5 min. Retirez délicatement la (les) glissière (s) de la cytocentrifugeuse et transférez-les à 95% d'éthanol pour la fixation.
6. Sécher à l'air avant la coloration et pour le stockage à long terme.
   REMARQUE: en fonction de la densité de la cellule sur les diapositives finales, l'étape 5.2 et l'étape 5.3 peuvent être ignorées ou ajustées. Dans cette étude, nous avons besoin d'au moins 2 grappes de cellules présentes par vue de haute puissance pour une densité cellulaire adéquate.

6. Sectionnement et examen approfondi du Protocole de fin Fimbriated (SEE-FIM)

1. Réparez l'ensemble de l'échantillon (y compris l'utérus, les trompes de Falopie bilatérales et les ovaires)Dans 10% de formol avant l'extraction pour minimiser l'exfoliation.
2. Détachez doucement et soigneusement les trompes de Fallope de l'utérus à l'isthme à l'aide de petites pinces et des ciseaux. Si l'adhérence est présente, dissécher soigneusement l'extrémité fimbrée de la surface de l'ovaire à l'aide de petites pinces et des ciseaux; Ces étapes sont essentielles pour minimiser la contamination croisée des tumeurs entre l'ovaire et la trompe de Fallope en raison de leur proximité intime.
3. Amputez le segment infundibulum et fimbriae (le 1,0 - 2,0 cm distal de trompe de Fallope) du reste de l'échantillon.
4. Sectionz l'infundibulum et les fimbriae longitudinalement à des intervalles de 2 mm. Soumettre toutes les sections en toto pour l'examen histologique.
5. Sectionz l'isthme et l'ampoule aux intervalles de 2 à 3 mm et soumettez-les entièrement.

Résultats

Notre étude précédente a montré que l'échantillonnage directement à partir de la trompe de Fyopie excisée à l'aide d'une brosse douce pourrait produire un échantillon quantitatif et qualitativement adéquat pour une évaluation cytologique supplémentaire. En outre, la combinaison de la préparation automatisée de la diapositive et de la coloration Papanicolaou modifiée permet au pathologiste de mieux visualiser les détails cytologiques pour faire un diagnostic pr...

Discussion

La salpingectomie bilatérale prophylactique ou la salpingo-ooforectomie a montré qu'il diminue le risque de développer un HGSC dans des populations à haut risque, comme les femmes présentant des mutations génétiques BRCA et une forte histoire de cancer familial. Cependant, la stérilité et la ménopause chirurgicale causées par l'intervention chirurgicale sont des conséquences graves et font une décision difficile, en particulier pour les femmes en âge de procréer. L'étude précédente a montr?...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cytobrush plus GT gentle touch of Medscand sample collection kit	CooperSurgical	C0112
ThinPrep preservCyt solution	HOLOGIC	234005
ThinPrep 2000 Processor	HOLOGIC	70031-001
Papanicolaou Stain, EA 65	sigma aldrich	HT40432
95% Ethanol	sigma aldrich	652261
100% Ethanol	sigma aldrich	493538
Xylene	sigma aldrich	214736
Hematoxylin	sigma aldrich	H9627
Sakura Tissue Tek 2000 tissue processor	SAKURA	TISSUE-TEK VIP 2000
Mayo Dissecting Scissors,5.5 straight	Pilgrim medical equiment	FA710-45
Chemware Forceps	United state plastic corp	76122
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades,short	SAKURA	4785
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades handle,short	SAKURA	4786