המחברים מבקשים להודות לד&quot;ר Biagio Pietra לעבודה הקודמת שלו במעבדה שלנו.

כל בעלי החיים ששוכנו בתנאי הפתוגן ללא באוניברסיטת מתקן בעלי החיים קולורדו ברברה מרכז דייוויס תחת אישור IACUC וטופלו על פי הנחיות NIH. עומק ההרדמה נשפט על ידי קמצוץ הבוהן בתחילה ועל ידי שמירה על קצב נשימה ברגע שהחל את ההליך. 1. תורם לב קציר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את עכבר התורם על ידי הזרקת pentobarbital (60 מ&quot;ג / קילוגרם IP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשתק את העכבר על ידי ריסון 4-way וקליפ הפרווה. לנגב את העור עם אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לנתח את העור, פותח את חלל הבטן על ידי ביצוע חתך רוחבי נחות רק לסרעפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הסרעפת אחורית לכניסת costal והרם את בית החזה הקדמי anteriorly וsuperiorly חושף את הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרחב את עובי מלא לחתוך את חלל בית החזה לרוחב האחורי בצדדים ימני והשמאליים של החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד אתנחות וריד נבוב (IVC) ולמקם את תפר רופף 5-0 משי סביב IVC בסמוך לכניסתה לעלייה הימנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1.0 סמ&quot;ק של 4 ° C מלוחים heparinized (200 u / סמ&quot;ק) לIVC, ולאחר מכן לקשור את הכלי עם תפר משי 5-0 ולהתחלק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את הווריד הנבוב מעולה תקין (rSVC) באופן דומה ולקשור עם 5-0 תפר משי ולהתחלק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות מגלגל את הלב לכיוון הצד הימני של החיות ולבודד את הווריד הנבוב מעולה השאיר (lSVC), ולקשור עם תפר משי 5-0 ולחלק חושף את עורק הריאה השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את הלב תחת גזה רטובה תוך התימוס בוטה גזור מהעורק הראשי הריאתי (PA) והשמאל וסניפי הרשות הפלסטינית הנכונים ועולה קשת אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בוטה לנתח אב העורקים קשת החופשית של הרקמות הסובבות. מיקרו המספריים משמשים לחלק את הפרוקסימלי אב העורקים לעורק זרוע-cephalic תקין, כלומר לא צריכה להיות שום סניפים בין הלב והחלוקהנקודה של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק זה של קשת אב העורקים מהווה את השרוול העורקי לתהליך השתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משקף את שרוול אב העורקים inferiorly לחשוף את תא המטען של הרשות הפלסטינית וסניפי ימין ועל השמאל ברשות הפלסטינית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בוטה לנתח סניפי הרשות הפלסטינית ימין ועל שמאל מהרקמות הסובבות כרחוקה מלב ככל האפשר. זה מאפשר לנתיחה קלה של תא המטען של הרשות הפלסטינית מרקמות הסובבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלקים את תא המטען של הרשות הפלסטינית כdistally כהפרוקסימלי אפשרי, רק כדי הסתעפותה. חלק זה של עורק הריאה מהווה את השרוול ורידית לתהליך השתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח תפר משי 5-0 סביב הבסיס של הלב והעניבה. הלב לאחר מכן לחתוך חופשי בבסיס, והניח ב4 מלוח מעלות צלזיוס. זמן קציר כולל הוא כ. 10-15 דקות. </li></ol> 2. טכניקה שתל לב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את עכברי נמען עם pentobarbital (60 מ&quot;ג / קילוגרם מינון ראשוני ה-IP, אם נדרש 25 מ&quot;ג / קילוגרם המינון משלים IP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קליפ הפרווה ולשתק את העכבר על ידי ריסון 4 כיוונים ומכין את העור עם povidone-יוד ולעטוף בצורה סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך בבטן קו האמצע אנכי 2 סנטימטר ולהיכנס לחלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחזור בי המעי superiorly ומוחצן על החזה. שמור עטוף בגזה סטרילית לחה (תמיסת מלח סטרילית) לאורך כל המקרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את אב העורקים בבטן ונחות וריד נבוב (IVC) מתחת לכלי הכליות ומקום 4-0 קשרי כותנה סביב אב העורקים וIVC מעולה אז נחותים לאתר ההשקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות כל כלי המותני בתחום ולקשור עם 10-0 תפר ניילון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קשר קשרי הכותנה, ראשון ואחרי נחותים על ידי מעולה. בדרך זו קצת דם נשמרים באב העורקים עושים aortotomy קל יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טופס aortotomy עם מחט 30 G כדי להיכנס ללומן של אב העורקים. להאריך את החתך עם מספריים מיקרו קנס באורך של כ -2 מ&quot;מ. חתך זה הוא עשה בקו ישר לאורך זמן רבציר itudinal של כלי השיט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קץ להשקת צד של אב העורקים התורם לאב העורקים הנמען באופנה הבאה. הנח תפר שהות תפר 10-0 ניילון באב העורקים ותורם לזווית הנחותה של החתך באב העורקים הנמען והעניבה. מניחים ניילון 10-0 שני מול הראשון באב העורקים התורמים והפינה מעולה של החתך באב העורקים ובעניבה בבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קו תפר פועל ממעולה לנחות בקיר לרוחב של אב העורקים ולקשור נגד תפר השהות הניח בעבר. הקפד להביא intimas (משטח כלי פנימי) יחד כמו שאתה תופר. אז תפר את הצד המדיאלי באופנת ריצה ובעניבה. התפר הראשון ואחרון בכל צד צריך להיות ממוקם קרוב לתפרי השהות ככל האפשר. אז שואף להיות 3 תפרים במרווחים שווים בין שני אלה עושים בסך הכל 5 תפרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קץ להשקת צד של עורק הריאה התורם למקבל IVC באופנה הבאה. Punctיור IVC עם מחט G 30 ולהרחיב את החתך עבור כ. 2 מ&quot;מ עם מספריים מיקרו בסדר. חתך זה הוא עשה בקו ישר לאורך ציר האורך של כלי השיט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור את עורק הריאה התורם לפינה הנחות של החתך בIVC עם 10-0 ניילון. מניחים ניילון 10-0 שני מול הראשון בעורק התורם והפינה מעולה של החתך בIVC והעניבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קו תפר פועל בין עורק הריאה וIVC ועניבה. התפר הראשון ואחרון בכל צד צריך להיות ממוקם קרוב לתפרי השהות ככל האפשר. אז שואף להיות 5 תפרים במרווחים שווים בין שני אלה עושים בסך הכל 7 תפרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את זרימת דיסטלי 4-0 הכותנה העניבה מחדש הקמת ורידים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע עצירת דימום של ההשקה הוורידים נצפתה עניבת הכותנה הפרוקסימלי 4-0 הוא התיר בהדרגה וההשקה העורק נצפתה לעצירת דימום. כאשר שני anastomoses נחשב מאובטח, להסיר את גotton קושר מהעכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את המעי בבטן. דופן הבטן סגורה בשתי שכבות באמצעות 5-0 תפר משי באופנת ריצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל בולוס 1.0 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית, חמה נורמלית לתוך הבטן כהחייאת נוזלים במועד הסגירה, ו0.8 מיליליטר של תמיסת מלח רגילה מוזרק מתחת לעור לאחר ניתוח. אין צעדים תומכים נוספים נדרשים במהלך הניתוח. לשחזר את החיה על שמיכה מחממת. זמן שתל כולל הוא כ. 90-120 דקות למתחילים, דקות 45-60 עם ניסיון. לנהל שיכוך כאבים עצירות, 0.05 מ&quot;ג / קילוגרם, SC, 0.1-0.2 מיליליטר בתחילת ההליך ובכל שעה 6-12 ל72 מנותחות שעה. </li></ol> 3. הערכת שתל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכת תפקוד שתל מדי יום על ידי מישוש טרנס בטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את העכבר כאילו היו שיש לתת זריקת intraperitoneal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ בעדינות את קצה אצבע על קיר הבטן ולברר את str המכותength וסדירות של השתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן איכות מישוש ציון מ4 (משרעת ותדירות נורמליות) ל -0 (לא מכות דחו שתל). </li></ol> הערות חשובות: כל המכשירים הם מעוקרים, כפפות סטריליות שחוקות לאורך כל ההליך, והוא שמר על שדה סטרילי. הניתוחים התורמים והמקבל מבוצעים תוך השימוש במיקרוסקופ הפעלה. ודא שanastomoses הם &quot;נקי&quot;. כלומר, שיחזור קירותיו לא נתפסו בעת ביצוע תפרים. זה יגרום להתכווצות משמעותית לזרום שתגרום יותר סביר בשתל נכשל, ובמקרים קיצוניים לאחורית גפי שיתוק. כמו כן, חשוב וחיוני שעובי מלא עובר כולל adventitia כלי הדם ואינטימה של מחט תפר מושגות. Evertion של הקצוות גם מבטיח כי יש קשר אינטימה לאינטימה, אשר מסייע באיטום וריפוי של anastomoses. עוד עובדה חשובה וחיוניאו הוא להבטיח כי המתח של קווי תפר בהשקה הוא גם אופטימלי. רפוי מדי ולא תהיה דליפה בלתי הפיכה, הדוק מדי וצרות לזרום יגרמו. אם בצד העורקים זה יביא זלוף הלקוי של השתל, אם בצד ורידי לב צפוף יגרום.

<ol>
	<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343 (1973).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+experience+of+3,000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3,000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123 (2001).</li><li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse.">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> J Invest Surg. 26 (4), 223 (2013).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+suture+technique+in+a+mouse+heart+transplant+model.">Modified suture technique in a mouse heart transplant model.</a> Asian J Surg. 34 (2), 86 (2011).</li><li>Mao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+knotless+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice.">A novel and knotless technique for heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> J Heart Lung Transplant. 28 (10), 1102 (2009).</li><li>Csencsits, K. L., Bishop, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+alloreactive+CD4++and+CD8++T+cells:+there's+more+to+it+than+MHC+restriction.">Contrasting alloreactive CD4+ and CD8+ T cells: there's more to it than MHC restriction.</a> Am J Transplant. 3 (2), 107 (2003).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nat Protoc. 2 (3), 471 (2007).</li><li>Linfert, D., Chowdhry, T., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocytes+and+ischemia-reperfusion+injury.">Lymphocytes and ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Rev. 23 (1), (2009).</li><li>Grazia, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+cardiac+allograft+rejection+by+directly+cytotoxic+CD4+T+cells:+parallel+requirements+for+Fas+and+perforin.">Acute cardiac allograft rejection by directly cytotoxic CD4 T cells: parallel requirements for Fas and perforin.</a> Transplantation. 89 (1), 33 (2010).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp. (6), (2007).</li><li>Plenter, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> European Society for Surgical Research. 45th Annual Congress. , (2010).</li></ol>

יש המחברים אין לחשוף.

טכניקה ניתוחית זו אינה קלה לשלוט, אבל ברגע שמשתלט עליו היא כלי מחקר רב עצמה. החוקר / המנתח מתוגמל על ידי עקביות של טכניקה ועל ידי תשומת לב לפרטים. הסבלנות במהלך שלב הלמידה היא מפתח. כפי שפורסם על ידי Niimi 3, בסיועם של כלי למידה מבוססת וידאו זה לוקח בממוצע של 11 ניסיונות להשגת ההליך המוצלח הראשון ו78 ניסיונות להשיג שיעור הצלחה 90%. וידאו הפכו לכלי חשוב בהוראת הניתוח 11,12. פתרון בעיות דימום מanastomoses עלול להתרחש וזה כנראה עקב או חוסר המתח נכון בתפרים, או מעט מדי תפרים. בעוד קרישת גרימת סוכן כגון Gelfoam יכולה להיות שימושית לצמצום דליפות, אנו ממליצים שהמנתח צריך להסתמך על טכניקה טובה. לב אינו פועם צפוף הוא נפוץ ביותר עקב anastomoses כי הם הדוקים מדי, במיוחד בצד הוורידים. הלא beating, שתל אינו perfused נגרם בדרך כלל על ידי בועות אוויר שנסעה לאחד מהעורקים הכליליים. זה חשוב לשמור על שדה לח לרטוב, כדי למנוע את כניסתם של בועות לתוך כלי הדם. מגבלות של הטכניקה טכניקה זו אינה מתאימה אם חוקר רוצה לחקור השפעות על תפקוד לב באופן מלא. שיחייב טכניקת השתלת orthotopic, שעד כה הוכיחה את הבלתי אפשרית לביצוע. משמעות ביחס לשיטות קיימות אם האדם רוצה לחקור את ההשפעות על השתלת vascularized באופן מלא, מוצקה איבר בעכבר, ולאחר מכן את מודל הלב הוא כנראה הפשוט ביותר כדי לשלוט. מודלים עכבר של ריאות, כליה והשתלה כבד אכן קיימים, אבל הם הרבה יותר קשים ללמוד ומושלמים. שלבים קריטיים במסגרת הפרוטוקול זה חשוב ביותר, כי עמ &#39;עובי מלאהתחת כולל adventitia כלי הדם ואינטימה של מחט תפר מושגות. Evertion של הקצוות גם מבטיח כי יש קשר אינטימה לאינטימה, אשר מסייע באיטום וריפוי של anastomoses. גורם חשוב וחיוני נוסף הוא להבטיח שהמתח של קווי תפר בהשקה הוא גם אופטימלי. רפוי מדי ולא תהיה דליפה בלתי הפיכה, הדוק מדי וצרות לזרום יגרמו. אם בצד העורקים זה יביא זלוף הלקוי של השתל, אם בצד ורידי לב צפוף יגרום. מעל לכל, חזרה, עקביות של הליך ואת תשומת לב מתמדת לפרטים תניב תוצאות מצוינות ונתונים fundable ופרסום.

בעידן שבו ניתן לבצע השתלות כליה, ריאות, כבד ולבלב בעכברים, אבן הפינה של השתלת איברים בסיסית ומחקר אימונולוגיה מאז 1973 1-4 נשאר המודל להשתלת לב heterotopic בעכבר. בשנים שחלפו כמה מאמרים שפורסמו מפרטים 5,6 שיפורים / חידודים להליך זה. כמודל של השתלה בעיקר vascularized איברים מוצקים הליך זה הוא ראשון במעלה. שולט ברגע שהליך זה משאיל את עצמו למחקר לתגובות אלוגנאית דחיית 7, הפיתוח של vasculopathies הכרוני 8 והמנגנונים של reperfusion איסכמיה פציעה 9. המפתחות ללמידת הליך זה בהצלחה הם בדיוק כמו כל ניתוח אחר, סבלנות מצד המאמן והמתאמן ותשומת הלב לפרטים. בתחילתו של התהליך למנתח החדש ימצא לא כיהיי יבלה שעות רבות בכל השתלה. הניסיון הוא צבר, פעמים כירורגית, ולכן איסכמיה, יהיו להפחית באופן דרסטי. שימת לב לפרטים של כל שלב ושלב במוקדם או במאוחר תוביל להצלחה. בעוד שהמורה יכול לעשות כמיטב יכולתם כדי להעביר הלאה, ולצפות מראש, את כל הנפילות הבור אפשריות שעשויות להיות נתקלים במהלך ניתוחים אלה, החניך &quot;יצירתי&quot; סביר להניח שימצא כמה משלהם! היסודות של ההליך הם כדלקמן. התורם עולה קשת אב העורקים הוא מקצה לצד anastomosed לאב העורקים בבטן הנמען ועורק הריאה התורם הוא מקצה לצד anastomosed לוריד נמען הבטן הנחות הנבוב (IVC). דם זורם מאב עורקי הנמען בצורה מדרדר דרך אב עורקי התורם לעורקים הכליליים. ברגע שהדם זרם דרך המערכת כלילית הוא מנקז לתוך העלייה הימנית דרך הסינוס כלילית, נשאב לתוך החדר ממני ולאחר מכן דרך עורק הריאה לנמען IVC. בדרך זו המערכת כלילית מסופקת דם העורקי וקצב סינוס חוזר לשתל בתוך 1-2 דקות של reperfusion. מאז התאים השמאליים של הלב הם בעצם לחץ טעון מתחת לקיר החופשי של החדר השמאלי יהיה התנוון לאורך זמן.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:608px;" width="607">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:247px;">Instrument</td>
			<td style="width:109px;">Roboz #</td>
			<td style="width:147px;">Fine Science Tools #</td>
			<td style="width:105px;">Arosurgical #</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight micro-dissecting forcep #5</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curved micro-dissecting forcep #7</td>
			<td>RS-5047</td>
			<td>11297-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curved serrated forcep</td>
			<td>RS-5137</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas micro-dissecting scissors, short</td>
			<td>RS-5610</td>
			<td></td>
			<td>09.140.08</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td colspan="2" height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long</td>
			<td></td>
			<td>11.602.11</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro spring handle needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>11.549.15</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight mosquito forcep</td>
			<td></td>
			<td>91308-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, straight, blunt</td>
			<td>RS-5962</td>
			<td>14078-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, curved, blunt</td>
			<td>RS-5981</td>
			<td>14079-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro retractor</td>
			<td>RS-6540</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Instrument tray, 10&#8221; x 6 &#189;&#8221; x &#190;&#8221;</td>
			<td>RT-1350S</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Silk suture, 5/0, 22.5m spool</td>
			<td></td>
			<td>18020-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">10/0 nylon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>T4A10Q07</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">5/0 silk</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>E19A05N</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Gloves</td>
			<td></td>
			<td>Drapes</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Biogel from Medex Supply</td>
			<td></td>
			<td>Precept, #64-9012-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Syringes</td>
			<td></td>
			<td>Cotton applicators</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">B-D 1cc insulin, #329424</td>
			<td></td>
			<td colspan="2">Fisher-brand, #23-400-100</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-Iodine swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PDI, #B40600</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">4/0 Cotton ties</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td colspan="2" height="17" style="height:17px;">Domestic cotton autoclaved with instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine heterotopic heart transplant technique

עכשיו זה יותר מארבעים שנה מאז טכניקה זו דווחה לראשונה על ידי קורי, וין וראסל. למרות שזה לקח כמה שנים למעבדות אחרות כדי להיות מיומנים ובלנצל את הטכניקה הזאת, עכשיו זה בשימוש נרחב על ידי מעבדות רבות ברחבי העולם. עידון משמעותי לטכניקה המקורית שפותח ודווח ב2001 על ידי Niimi. שתוארו כאן הם הטכניקות שהתפתחו במשך יותר מעשור בידיהם של שלושה מנתחים (Plenter, גרציה, Pietra) במרכז שלנו. כעת טכניקות אלו מועברות על דור צעיר של מנתחים וחוקרים. מבוסס במידה רבה על ניסיון Niimi, הנהלים המשמשים התפתחו בפרטים הקטנים - הפרטים שבו אנו נשתדל להתייחס כאן באופן כזה שאנשים אחרים יוכלו להשתמש במודל זה מאוד שימושי. כמו Niimi, מצאנו שוידאו סיוע ללמידה הוא משאב יקר ערך עבור המתחילים.

<html> הניצול של טכניקה ניתוחית זו פותח את הדרך לשני מחקרים פשוטים הישרדות שתל / דחייה, או פרוטוקולי ניסוי מורכבים למדי. במחקר המתואר בקצרה בתרשים שלהלן, בקשנו להגדיר את המעורבות, אם בכלל, של פאס ו / או perforin כמנגנונים של דחיית תאי T מסוג CD4 בתיווך לב. זה התאפשר על ידי המערך יוצא דופן של זני עכבר הזמינים כיום. תוצאות מראות כי הדחייה הישירה של allografts לב על ידי תאי T מסוג CD4 מפעיל דורשת תרומה החלופית של שתל ביטוי פאס וביטוי perforin תא T. למיטב ידיעתנו, זו ההפגנה הראשונה שפעילות cytolytic על ידי תאי T מסוג CD4 יכולה לשחק תפקיד מחייב לדחיית שתל חריפה העיקרית בגוף חי. &quot;/&gt; 1.jpg . איור 1 Perforin ופאס לייצג מחייב ומסלולים מקבילים של B6 T מסוג CD4 תא בתיווך דחיית לב, B6 PFPKO (perforin עקום החוצה), וGLD B6 תאים (לקויים פאס ליגנד) T מסוג CD4 נוצלו כדי לשקם סמרטוט B6 - / - מקבלי סוג C3H בר או C3H פאס הלקוי LPR allografts לב. הסרת פאס לבד (♦, p = NS לעומת שליטת Wt C3H + B6 תאי T מסוג CD4) מלב התורם או ההסרה או perforin לבד מתאי T מסוג CD4 (■, p = NS לעומת שליטת Wt C3H + B6 T מסוג CD4 תאים) לא בטלו דחייה. מעניין לציין, כי הסרת FasL ממפעיל תאי T מסוג CD4 עשתה דחיית עיכוב משמעותית (● p &lt;0.02 לעומת תאי Wt C3H + B6 T מסוג CD4, p &lt;0.01 לעומת תאי Wt C3H + B6 PFPKO T מסוג CD4, וp &lt;0.01 לעומת . LPR C3H + B6 תאי T מסוג CD4). עם זאת, רוב allografts עדיין דחה (4 מתוך 5). באופן משמעותי, להסרת בו זמנית של שני perforin התא התורם פאס וT מסוג CD4דחייה בטלה לחלוטין (○, p &lt;0.002 לעומת שליטת Wt C3H + B6 + תאי T מסוג CD4 +, B6 תאי T מסוג CD4 PFPKO, וLPR C3H Wt C3H B6 תאי T מסוג CD4). ביטול זה היה באופן משמעותי חזק יותר מההסרה בודדת של FasL תא T מסוג CD4 (○, p &lt;שליטה 0.003 לעומת C3H Wt + GLD B6 תאי T מסוג CD4). מגרציה ואח&#39; 10. הודפס מחדש באישור.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Heterotopic Heart Transplant Technique at JoVE.com

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

כתב היד מתארת ​​את הצעדים הנדרשים כדי לבצע את השתלת לב heterotopic בעכבר.

טכניקת השתלות Murine Heterotopic לב

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

murine-heterotopic-heart-transplant-technique

Research

JoVE Journal

Medicine

16.7K Views.  University of Colorado Denver.  כתב היד מתארת ​​את הצעדים הנדרשים כדי לבצע את השתלת לב heterotopic בעכבר. 

Video: Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma and devastating tissue loss. Despite favorable and highly encouraging early and intermediate functional outcomes, rejection of the highly immunogenic skin component of a VCA and potential adverse effects of chronic multi-drug immunosuppression continue to hamper widespread clinical application of VCA. Therefore, research in this novel field needs to focus on translational studies related to unique immunologic features of VCA and to develop novel immunomodulatory strategies for immunomodulation and tolerance induction following VCA without the need for long term immunosuppression.
This article describes a reliable and reproducible translational large animal model of VCA that is comprised of an osteomyocutaneous flap in a MHC-defined swine heterotopic hind limb allotransplantation. Briefly, a well-vascularized skin paddle is identified in the anteromedial thigh region using near infrared laser angiography. The underlying muscles, knee joint, distal femur, and proximal tibia are harvested on a femoral vascular pedicle. This allograft can be considered both a VCA and a vascularized bone marrow transplant with its unique immune privileged features. The graft is transplanted to a subcutaneous abdominal pocket in the recipient animal with a skin component exteriorized to the dorsolateral region for immune monitoring.
Three surgical teams work simultaneously in a well-coordinated manner to reduce anesthesia and ischemia times, thereby improving efficiency of this model and reducing potential confounders in experimental protocols. This model serves as the groundwork for future therapeutic strategies aimed at reducing and potentially eliminating the need for chronic multi-drug immunosuppression in VCA.

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vascularized Composite Allotransplantations (VCA) have become a clinical reality. However, broad clinical application of VCA is limited by chronic multi-drug immunosuppression. The authors present a reliable and reproducible large animal model to translate novel immunomodulatory strategies that can minimize or potentially eliminate the need of immunosuppression in VCA.

דגם השתלות Heterotopic החזירים הינד איבר השתנה לTranslational vascularized Composite Allotransplantation מחקר (VCA)

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents available. A difficulty is presented due to the small size of the animal and the considerable technical challenges of the microsurgery involved in heart transplantation. In particular, a high rate of technical failure early after transplantation may result from recipient death and post-operative complications such as hind limb paralysis or a non-beating heart. Here, the complete technique for heterotopic mouse heart transplantation is demonstrated, involving harvesting the donor heart and its subsequent implantation into a recipient mouse. The donor heart is harvested immediately following in situ perfusion with cold heparinized saline and transection of the ascending aorta and pulmonary artery. The recipient operation involves preparation of the abdominal aorta and inferior vena cava (IVC), followed by end-to-side anastomosis of the donor aorta with the recipient aorta using a single running 10-0 microsuture and a similar anastomosis of the donor pulmonary artery with the recipient IVC. Following the operation the animal is injected with 0.6 ml normal saline subcutaneously and allowed to recover on a 37&#160;&#176;C heating pad. The results from 227 mouse heart transplants are summarized with a success rate at 48 hr of 86.8%. Of the 13.2% failures within 48 hr, 5 (2.2%) experienced hind limb paralysis, 10 (4.4%) had a non-beating heart due to graft ischemic injury and/or thrombosis, while 15 (6.6%) died within 48 hr.

A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.

שיטה שונה לHeterotopic מאוס לב Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft involves anastomosis of donor inferior vena cava (IVC) to recipient IVC, and donor ascending aorta (Ao) to recipient abdominal Ao. The right upper and middle lung lobes are preserved and function as conduits for blood flow from right heart to left heart.
There are several advantages to using this technique, and it lends itself to a broad range of applications. Because the graft is transplanted in a configuration that allows for dyamic volume-loading, cardiac function may be directly assessed in vivo. The use of pressure-volume conductance catheters permits characterization of load-dependent and load-independent hemodynamic parameters. The graft may be converted to a loaded configuration by applying a clamp to the recipient&#8217;s infra-hepatic IVC. We describe modified surgical techniques for both donor and recipient operations, and an ideal myocardial protection strategy. Depending on the experimental aim, this model may be adapted for use in both acute and chronic studies of graft function, immunologic status, and variable ventricular loading conditions. The conducting airways to the transplanted lung are preserved, and allow for acute lung re-ventilation. This facilitates analysis of the effects of the mixed venous and arterial blood providing coronary perfusion to the graft.
A limitation of this model is its technical complexity. There is a significant learning curve for new operators, who should ideally be mentored in the technique. A surgical training background is advantageous for those wishing to apply this model. Despite its complexity, we aim to present the model in a clear and easily applicable format. Because of the physiologic similarity of this model to orthotopic transplantation, and its broad range of study applications, the effort invested in learning the technique is likely to be worthwhile.

We describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The transplant configuration results in a partially loaded graft circulation, allowing direct functional assessment. This model may be employed for acute or chronic studies of function and immunologic status of the transplanted graft.

עכברוש Heterotopic בטן לב / השתלת ריאה בודדת בתצורה טעונה נפח

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

טכניקת השתלת כליה בעכברים

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

Heterotopic צוואר הרחם לב השתלה בעכברים

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone splenectomy regardless of precipitating causes are prone to develop an overwhelming post-splenectomy infection and experience increased risks of deep venous thrombosis and malignancies. Recently, epidemiological studies indicated that splenectomy might be associated with the occurrence of cardiovascular diseases, suggesting that physiological functions of the spleen have not yet been fully recognized. Here, we introduce a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, which not only can be utilized to study the function and behavioral activity of splenic immune cell subsets in different biologic processes, but also can be a powerful tool to test the therapeutic potential of spleen transplantation in certain diseases. The main surgical steps of this model include donor spleen harvest, the removal of recipient native spleen, and spleen graft revascularization. Using congenic mouse strains (e.g., mice with CD45.1/CD45.2 backgrounds), we observed that after syngeneic transplantation, both donor-derived splenic lymphocytes and myeloid cells migrated out of the graft as early as post-operative day 1, concomitant with the influx of multiple types of recipient cells, thus generating a unique chimera. &#160;Despite relatively challenging techniques, this procedure can be performed with &#62;90% success rate. This model allows tracking the fate, longevity, and function of splenocytes during steady state and in a disease setting following a spleen transplantation, thereby offering a great opportunity to discover the distinct role for spleen-derived immune cells in different disease processes.

This protocol details the surgical steps of a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, a technically challenging model that can serve as a powerful tool in studying the fate and longevity of spleen cells, the mechanisms of distinct spleen cell populations in disease progression, and transplant immunity.

מודל של העכבר של ואסיאני הטרוגרההשתלת הטחול ללמוד תא הטחול ביולוגיה וחסינות להשתלות

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. However, only minor improvement in the long-term results of transplanted solid organs could be observed over the past decades. In this context, chronic allograft vasculopathy (CAV) still represents the leading cause of late organ failure in cardiac, renal and pulmonary transplantation.
Thus far, the underlying pathogenesis of CAV development remains unclear, explaining why effective treatment strategies are presently missing and emphasizing a need for relevant experimental models in order to study the underlying pathophysiology leading to CAV formation. The following protocol describes a murine heterotopic cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique. In this technique, a segment of the thoracic aorta is interpositioned in the right common carotid artery. With the use of the non-suture cuff technique, an easy to learn and reproducible model can be established, minimizing the possible heterogeneity of sutured vascular micro anastomoses.

Here, we present a protocol of heterotopic aortic transplantation in mice using the non-suture cuff technique in a cervical murine model. This model can be used to study the underlying pathology of chronic allograft vasculopathy (CAV) and can help evaluate new therapeutic agents in order to prevent its formation.

מורי צוואר הרחם מורנה השתלת מודל באמצעות שינוי שאינו תפר שיטה השרוול

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.