שיטה זו באמצעות 22C3 תרכיז נוגדנים כדי לקבוע ביטוי PD-L1 הן רקמת הגידול ודגימה ציטולוגיה ירחיב את היכולת של מעבדות להעריך את הבחירה של חולים עם סרטן ריאות תאים שאינם קטנים עבור אימונותרפיה באופן אמין לשחזור. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאוד קונקורדנטית עם הבדיקה הסטנדרטית של הזהב ותתמוך בבדיקות PD-L1 אמינות ואיכותיות ברחבי העולם. באופן כללי, פתולוגים חדשים בשיטה זו ייאבקו בגלל הכתמים פרטני שנצפו מדי פעם.
יתר על כן, הכתם של התאים האנושיים הוא קצת יותר אינטנסיבי מזה שנצפה עם תקן הזהב. לכן אימון של פתולוגים יש צורך לקבל פרשנות נכונה של כתמי PD-L1 עם LDT 22C3. הפגנת ההליך תהיה גברת.
מרים חמילה, טכנאית מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, לתקן את רקמת הגידול בפורמלין 10%ניטרלי-מאגר בקלטת ולהטביע את הקלטת בפרפין כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט. להטמיע את הרקמה הסתנן בתוך עובש כי הוא מלא פרפין מותך.
תן לרקמה להישאר בתבנית עד הפרפין התגבש. לאחר מכן, השתמש במיקרוטום כדי לקטע את הרקמה המוטבעת בפרפין בעובי של שלושה מיקרומטרים. העבר את סרט הפרפין לשקופית מיקרוסקופ זכוכית טעונה באופן חיובי.
לאחר מכן, לייבש את המגלשה במשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס. ראשית, לאסוף את שטיפות הסופת בתתא משמר. מעבירים את הכביסה לצינור חרוט של 50 מיליליטר.
מוסיפים שני גרם של DL-Dithiothreitol ומערבולת הצינור במשך 30 דקות, ולאחר מכן צנטריפוגה ב 250 פעמים גרם במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. הסר את העל-טבעי והוסף 10 מיליליטר של פתרון mucolytic. לנער את המדגם במהירות בינונית במשך 20 דקות צנטריפוגה ב 250 פעמים גרם במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.
לאחר מכן, להסיר את supernatant ולהפקיד את גלולת התא לתוך צינור איסוף המכיל 10% ניטרלי-מאגר פורמלין. הוסף ארבע טיפות של סוכן הכנה בלוק תא. העבר את גלולת התא לקלטת.
לתקן את גלולת התא עבור הטבעה פרפין וקטע באמצעות התהליך שתואר בעבר להכנת דגימות רקמת הגידול. כדי להתחיל, לחץ על ה-autostainer ועל המחשב. לחץ פעמיים על סמל ה-autostainer ובחר את המשתמש.
לחץ על צור תווית ולאחר מכן על פרוטוקול. לחץ פעמיים על פרוטוקול 22C3. מלאו את תעודת הזהות של המטופל ולחצו על 'הדפס'.
לאחר מכן, תקע את התווית על השקופית. לחץ על הלחצן במגירת השקופיות שנבחרה כדי לפתוח אותה ול למקם את השקופית המסוווית על ה כרית התרמית כאשר התווית פונה כלפי מעלה והלאה. סגור את מגירת השקופיות.
לאחר מכן, להסיר את הכובעים מהמתקן. טען את הריג'ינים על מתלה הריג'ינים. פתח את מכסה המנוע של הכתם והצב את מתלי הריג'נט על קרוסלה של חברי ההנהלה, מוודא שהם מתאימים כראוי והחזק בעמדה, ולאחר מכן סגור את מכסה המנוע.
בתוכנה, לחץ על המכשיר שישמש ולאחר מכן לחץ על פועל. בסוף הליך IHC, השתמש במי ברז עם טיפה אחת של פתרון ניקוי כדי לשטוף את המגלשה במשך מספר שניות. ייבש את השקופית על ידי טבילה ברצף בשתי אמבטיות אתנול במשך מספר שניות כל אחת, ולאחר מכן מקם את השקופית לתוך מכונת כיסוי כדי לטעון באופן אוטומטי את החלקת המכסה.
כדי להתחיל להעריך את איכות הכתם PD-L1, לנתח את הפקדים החיוביים ושליליים לפני בחינת הדגימה החולה. באמצעות מיקרוסקופ, לאשר את נוכחותם של לפחות 100 תאים סרטניים קיימא. בהגדלה נמוכה של 4 פעמים, להעריך את כל האזורים הגידול חיובי ושלילי השתמר היטב.
לאחר מכן, ציון חלקי או מלא קרום התא מכתים ולחשב את ציון פרופורציית הגידול על ידי הערכת שיעור תאי הגידול PD-L1 חיובי יחסית לכל התאים הגידוליים הקיימים באזורי הגידול השתמרו היטב. במחקר זה, ציון פרופורציית הגידול או TPS מוערך עבור דגימות ביופסיה של רקמות מזווגות בתאים בלוקים שהוכנו משטיפת הסופות או התפכחות pleural. דפוסי כתמים מייצגים עם דגימות ביופסיה משמשים להשוואת 22C3-נוגדנים להתרכז נגד PD-L1 IHC 22C3 לוויה משוער.
מקדם המתאם הבין-מחלקתי, המשמש למדידת המתאם של ציון ה- TPS כמשתנה רציף, הוא 99% בין LDT לבין תקן הזהב. דפוסי כתמים מייצגים עם דגימות ציטולוגיה משמשים גם כדי להשוות את 22C3-נוגדנים להתרכז נגד PD-L1 IHC 22C3 לוויה מוסט. שיעור הקונקורדנס של דגימות ביופסיה וציטולוגיה עם LDT גדול מ- 95% בעת שימוש בכל אחת מנקודות החיתוך של ה- TPS.
מקדם המתאם הבין-מחלקתי בעת שימוש בת"ת כמשתנה רציף הוא בין 0.88 ל- 0.90. לאחר השליטה, טכניקה זו נותנת שיעור קונקורדנס גבוה עם תקן הזהב להעריך את הניתוק עבור חיוביות או היסטולוגיה הגידול עבור דגימות רקמות וציטולוגיה. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי יש להעריך את הדגימות בהתייחס לשקופית HE ובחלק מהמקרים קשה ניתן לבצע כתמים משלימים להערכת תאי החיסון כדי לא לכלול את התרגום השגוי של ביטוי PD-L1 בתאי הגידול בלבד.
בעקבות הליך זה, ניתן להעריך דגימות אחרות כמו ביופסיות מחט עדין, EUS-FNAs או מברשות הסנוכיה. לאחר הגדרתו במרפאות, יש לשמור על חוסן הבדיקה לאורך זמן על ידי חיפוש הסמכה, על ידי ביצוע נהלי הפעלה סטנדרטיים, ועל ידי השתתפות קבועה בהערכות איכות חיצוניות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה של איך ליישם את הפרוטוקול אופטימיזציה באמצעות 22C3 נוגדן נגד PD-L1 להתרכז autostainer IHC זמין נרחב הן ביופסיה ודגימות ציטולוגיה מחולים עם סרטן ריאות תאים שאינם קטנים.
