22C3 Anti-PD-L1 抗体精矿在非小细胞肺癌活检及细胞学标本中的应用

该方法使用22C3抗体浓缩物确定肿瘤组织和细胞学标本中的PD-L1表达，将扩大实验室以可靠和可重复的方式评估非小细胞肺癌患者选择进行免疫治疗的能力。该技术的主要优点是，它高度符合金标准测定，并将支持可靠、高质量的PD-L1测试。一般来说，由于偶尔观察到的颗粒染色，新采用这种方法的病理学家会挣扎。

此外，人体细胞的染色比金本位观察的要强烈一些。因此，对于使用 22C3 LDT 正确解释 PD-L1 染色，必须培养病理学家。演示程序将是夫人

玛拉梅·哈米拉，我实验室的技术员首先，将肿瘤组织固定成盒式磁带中10%中性缓冲的甲醛，并将盒式磁带嵌入石蜡中，如文本协议中所述。将渗入的组织嵌入充满熔融石蜡的模具中。

让组织留在模具中，直到石蜡凝固。在此之后，使用微原子将石蜡嵌入的组织分部为三微米。将石蜡带转移到带正电的玻璃显微镜幻灯片上。

然后，在37摄氏度下将滑梯干燥一小时。首先，在防腐剂溶液中收集支气管洗涤剂。将洗涤液转移到 50 毫升锥形管中。

加入两克DL-Dithiothreitol，在管中旋30分钟，然后在室温下以250倍g离心5分钟。取出上一液，加入10毫升的粘液溶液。以中等速度摇动样品 20 分钟，在室温下以 250 次 g 离心 5 分钟。

在此之后，取出上流剂，将细胞颗粒沉积到含有10%中性缓冲甲素的收集管中。添加四滴单元格块准备代理。将细胞颗粒转移到盒式磁带上。

使用前面描述的制备肿瘤组织样本的过程，修复石蜡嵌入和切块的细胞颗粒。首先，打开自动机和计算机的电源。双击自动污染者图标并选择用户。

单击"创建标签"，然后单击"协议"。双击 22C3 协议。填写患者的 ID 并单击"打印"。

在此之后，将标签贴在幻灯片上。按所选幻灯片抽屉上的按钮将其打开，然后将标有的幻灯片放在热垫上，标签朝上朝向。关闭幻灯片抽屉。

接下来，从分配器上取下盖。将试剂加载到试剂架上。打开染色器的发动机罩，将试剂架放在试剂旋转木马上，确保它们正确安装并保持到位，然后关闭护罩。

在软件中，单击将使用的仪器，然后单击"运行"。在 IHC 程序结束时，使用自来水和一滴清洁溶液冲洗幻灯片几秒钟。通过按顺序将幻灯片浸入两个乙醇浴中几秒钟，将幻灯片放入盖板机中以自动加载盖滑，使幻灯片脱水。

要开始评估PD-L1染色的质量，在检查患者标本之前分析阳性和阴性对控。使用显微镜确认是否存在至少100个可行的肿瘤细胞。在4倍的低放大率下，评估所有保存完好的阳性和阴性肿瘤区域。

之后，通过评估PD-L1阳性肿瘤细胞相对于保存良好的肿瘤区域的所有肿瘤细胞的比例，对部分或完整的细胞膜染色进行评分并计算肿瘤比例分数。在这项研究中，肿瘤比例评分或TPS被评估在从支气管洗或胸膜输液准备的细胞块配对组织活检样本。具有活检样本的代表性染色模式用于将 22C3 抗体浓缩物与 PD-L1 IHC 22C3 配套测定进行比较。

类内相关系数用于测量 TPS 分数作为连续变量的相关性，LDT 和金标准之间的相关性为 99%。具有细胞学样本的代表性染色模式也用于比较 22C3 抗体浓缩物与 PD-L1 IHC 22C3 配套测定。使用 TPS 切割点时，活检和细胞学样本与 LDT 的一致性率大于 95%。

使用 TPS 作为连续变量时，类内相关系数介于 0.88 和 0.90 之间。一旦掌握，该技术在评估组织和细胞学标本的积极性或肿瘤组织学的截止时，具有与黄金标准的高一致性率。在尝试此程序时，重要的是要记住，样本必须参照 HE 幻灯片进行评估，在某些困难情况下，可以执行补充污渍来评估免疫细胞，以排除仅对肿瘤细胞中 PD-L1 表达的误解。

按照这个程序，可以评估其他标本，如细针活检，EUS-FNA或支气管刷。在诊所设立后，需要通过寻求认证、遵循标准操作程序以及定期参加外部质量评估计划来保持检测的稳健性。观看此视频后，您应该对如何使用 22C3 抗 PD-L1 抗体实现优化协议有一个良好的理解，该抗体集中在一种广泛可用的 IHC 自动标记器上，包括非小细胞肺癌患者的活检和细胞学样本。