この方法は、22C3抗体濃縮物を用いて、腫瘍組織および細胞診標本の両方でPD-L1発現を決定し、信頼性の高い再現性のある方法で免疫療法のための非小細胞肺癌患者の選択を評価する実験室の能力を拡大する。この技術の主な利点は、ゴールドスタンダードアッセイと非常に一致しており、世界中の地域にわたって信頼性の高い高品質のPD-L1テストをサポートすることです。一般に、この方法に新しい病理学者は、時折観察される粒状染色のために苦労するだろう。
さらに、ヒト細胞の染色は、金本規格で観察されたものよりもやや強い。従って病理学者の訓練は22C3 LDTとのPD-L1染色の正しい解釈を得るために必要である。手順を実証することは夫人になります。
マラメ・ハミラ、私の研究室の技術者。まず、カセット内の10%中性緩衝ホルマリンで腫瘍組織を固定し、テキストプロトコルに概説されているようにパラフィンにカセットを埋め込みます。溶けたパラフィンで満たされた型の中に浸潤した組織を埋め込みます。
パラフィンが固まるまで組織を型に留まらせます。この後、3マイクロメートルの厚さでパラフィン埋め込まれた組織を切除するためにミクロトームを使用してください。パラフィンリボンを正に帯電したガラス顕微鏡スライドに移します。
その後、スライドを摂氏37度で1時間乾燥させます。まず、気管支の洗浄液を防腐液に集めます。洗浄液を50ミリリットルの円錐チューブに移します。
DL-Dithreitolを2グラム加え、チューブを30分間ボルテックスし、室温で5分間250倍gで遠心分離機を加えます。上清を取り除き、粘液溶液を10ミリリットル加えます。サンプルを中速20分間振り、遠心分離機を250倍gで室温で5分間振ります。
この後、上清を取り除き、セルペレットを10%中性緩衝ホルマリンを含む回収管に沈着させる。細胞ブロック調製剤を4滴追加します。細胞ペレットをカセットに移します。
腫瘍組織サンプルを調製するために先に説明したプロセスを用いてパラフィン埋め込みおよび切片のための細胞ペレットを固定する。まず、オートステイナーとコンピュータの電源を入れ、電源を入れ、操作を開始します。オートステイナーアイコンをダブルクリックし、ユーザーを選択します。
[ラベルの作成] をクリックし、[プロトコル] をクリックします。22C3 プロトコルをダブルクリックします。患者のIDを記入し、[印刷]をクリックします。
この後、ラベルをスライドに貼り付けます。選択したスライドドロワーのボタンを押して開き、ラベルを上向きと内側に向けたサーマルパッドにラベル付きスライドを置きます。スライドドロワーを閉じます。
次に、ディスペンサーからキャップを取り外します。試薬ラックに試薬を積み込みます。染色剤のボンネットを開き、試薬カルーセルに試薬ラックを置き、適切にフィットして所定の位置に保持していることを確認してから、フードを閉じます。
ソフトウェアで、使用する機器をクリックし、[実行中]をクリックします。IHC手順の最後に、洗浄液を1滴で水道水で使用し、スライドを数秒間洗い流します。スライドを2つのエタノール浴に順次に数秒間浸漬して脱水し、スライドをカバースリッピングマシンに入れて自動的にカバースリップをロードします。
PD-L1染色の品質の評価を開始するには、患者検体を検査する前に正と負のコントロールを分析します。顕微鏡を用いて、少なくとも100個の生存可能な腫瘍細胞の存在を確認する。4倍の低倍率で、全ての良好に保存された陽性および陰性腫瘍領域を評価する。
この後、部分的または完全な細胞膜染色をスコア付けし、良好に保存された腫瘍領域に存在するすべての腫瘍細胞に対するPD-L1陽性腫瘍細胞の割合を評価することによって腫瘍比率スコアを計算する。本研究では、腫瘍比率スコアまたはTPSは、気管支の流しまたは胸膜滲出液から調製された細胞ブロック内の対組織生検サンプルについて評価される。バイオプシー検体による代表的な染色パターンは、PD-L1 IHC 22C3コンパニオンアッセイに対して22C3抗体濃縮物を比較するために使用されます。
TPSスコアの相関を連続変数として測定するために使用されるクラス内相関係数は、LDTとゴールドスタンダードの間で99%です。細胞診標本による代表的な染色パターンは、PD-L1 IHC 22C3コンパニオンアッセイに対して22C3抗体濃縮物を比較するためにも使用されます。LDTを用いた生検および細胞診サンプルの結合率は、TPSカットポイントのいずれかを使用した場合、95%を超えています。
TPS を連続変数として使用している間のクラス内相関係数は、0.88 から 0.90 の間です。一度習得すると、この技術は、組織および細胞診標本の両方の陽性または腫瘍組織学のカットオフを評価する際に、金本格との高い一括率を与える。この手順を試みる間、サンプルはHEスライドを参照して評価する必要があり、いくつかの困難な場合には免疫細胞を評価するための相補的な染色が腫瘍細胞におけるPD-L1発現の誤解釈を排除するために行われることがあることを覚えておくことが重要です。
この手順に従って、細針バイオプシー、EUS-FNAまたは気管支ブラシのような他の標本を評価することができる。クリニックでの設定後、認定を求め、標準的な運用手順に従い、定期的に外部品質評価スキームに参加することで、アッセイの堅牢性を時間の経過とともに維持する必要があります。このビデオを見た後、22C3抗PD-L1抗体を使用して最適化されたプロトコルを実装する方法をよく理解している必要があります。
