Tümör dokusu ve sitoloji örneğinde PD-L1 ekspresyonunu belirlemek için 22C3 antikor konsantresini kullanan bu yöntem, laboratuvarların immünoterapi için küçük hücreli dışı akciğer kanseri olan hastaların seçimini güvenilir ve tekrarlanabilir bir şekilde değerlendirme yeteneğini genişletecektir. Bu tekniğin en büyük avantajı, altın standart test ile son derece uyumlu olması ve dünya çapında bölgeler arasında güvenilir, yüksek kaliteli PD-L1 testlerini destekleyecek olmasıdır. Genel olarak bu yönteme yeni gelen patologlar zaman zaman gözlenen tanecikli boyama nedeniyle mücadele edeceklerdir.
Ayrıca, insan hücrelerinin boyanma biraz daha altın standart ile gözlenen daha yoğundur. Bu nedenle 22C3 LDT ile PD-L1 boyamadoğru yorumunu elde etmek için patologların eğitimi gereklidir. Prosedürü gösteren Bayan olacaktır.
Marame Hamila, laboratuvarımda teknisyen. Başlamak için, tümör dokusunu %10 nötr tamponlu formalin ile bir kasete sabitleyin ve kaseti metin protokolünde belirtildiği gibi parafine gömün. Erimiş parafin le dolu bir kalıba sızmış dokuyu gömün.
Parafin katılanına kadar dokunun küfte kalmasına izin verin. Bundan sonra, parafin gömülü doku üç mikrometre kalınlığında bölüm için bir mikrotom kullanın. Parafin şeridini pozitif yüklü cam mikroskop slaytına aktarın.
Sonra, 37 santigrat derece bir saat slayt kuru. İlk olarak, koruyucu bir çözelti içinde bronşiyal yıkama toplamak. Yıkamaları 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın.
DL-Dithiothreitol iki gram ekleyin ve 30 dakika boyunca tüp girdap, sonra oda sıcaklığında beş dakika boyunca 250 kez g santrifüj. Supernatant çıkarın ve bir mukolitik çözelti 10 mililitre ekleyin. Odayı 20 dakika orta hızda sallayın ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca 250 kez g santrifüj.
Bundan sonra, supernatant çıkarın ve% 10 nötr-tamponlu formalin içeren bir toplama tüpü içine hücre pelet mevduat. Bir hücre bloğu hazırlama aracısı dört damla ekleyin. Hücre peletini kasete aktarın.
Daha önce tümör doku örnekleri hazırlamak için açıklanan süreci kullanarak parafin katıştırma ve kesit için hücre pelet düzeltin. Başlamak için, autostainer ve bilgisayar üzerinde güç. Autostainer simgesine çift tıklayın ve kullanıcıyı seçin.
Etiket Oluştur'a ve ardından Protokol'e tıklayın. 22C3 protokolüne çift tıklayın. Hastanın kimliğini doldurun ve Yazdır'ı tıklatın.
Bundan sonra etiketi slayta yapıştırın. Açmak için seçilen slayt çekmecesindeki düğmeye basın ve etiketlenmiş slağı yukarı ve içe bakacak şekilde termal pede yerleştirin. Slayt çekmecesini kapatın.
Ardından, dağıtıcılardan kapakları çıkarın. Reaktifleri reaktif rafına yükleyin. Boyanın kaputunu açın ve reaktif raflarını reaktiflerin atlıkarıncaya yerleştirin, düzgün bir şekilde sığdığından ve pozisyonda tuttuklarından emin olun, sonra kaputu kapatın.
Yazılımda, kullanılacak enstrümana tıklayın ve ardından Çalıştır'ı tıklatın. IHC prosedürünün sonunda, kaydırağı birkaç saniye durulamak için tek bir damla temizleme çözeltisi ile musluk suyu kullanın. Kaydırağı her biri birkaç saniye liğine iki etanol banyosuna sırayla batırarak susuzlaştırın, ardından kapağı otomatik olarak yüklemek için kaydırağı bir kapak makinesine yerleştirin.
PD-L1 boyama kalitesini değerlendirmeye başlamak için, hasta örneğini incelemeden önce pozitif ve negatif kontrolleri analiz edin. Bir mikroskop kullanarak, en az 100 canlı tümör hücresinin varlığını doğrulayın. 4 kez düşük büyütme, tüm iyi korunmuş pozitif ve negatif tümör alanları değerlendirmek.
Bundan sonra, kısmi veya tam hücre zarı boyama puan ve iyi korunmuş tümör bölgelerinde mevcut tüm tümör hücrelerine göre PD-L1-pozitif tümör hücrelerinin oranını değerlendirerek tümör oranı hesaplamak. Bu çalışmada bronşiyal yıkar veya plevral efüzyondan hazırlanan hücre bloklarında tümör oran skoru veya TPS eşleştirilmiş doku biyopsisi örnekleri için değerlendirildi. 22C3 antikor konsantresini PD-L1 IHC 22C3 eşlik eden analizile karşılaştırmak için biyopsi numuneleri ile temsili boyama desenleri kullanılır.
TPS skorunun sürekli bir değişken olarak korelasyonunu ölçmek için kullanılan sınıf içi korelasyon katsayısı LDT ile altın standardı arasında %99'dur. 22C3 antikor konsantresini PD-L1 IHC 22C3 eşlik eden analizle karşılaştırmak için sitoloji örnekleri ile temsili boyama desenleri de kullanılmaktadır. Biyopsi ve sitoloji örneklerinin LDT ile uyum oranı TPS kesme noktalarından herhangi birini kullanırken %95'ten fazladır.
TPS sürekli değişken olarak kullanırken sınıf içi korelasyon katsayısı 0.88 ile 0.90 arasındadır. Bir kez hakim, bu teknik hem doku ve sitoloji örnekleri için pozitiflik veya tümör histolojisi için kesme değerlendirmek altın standart ile yüksek bir uyum oranı verir. Bu prosedürü denerken, örneklerin HE slaytı ile birlikte değerlendirilmesi gerektiğini ve bazı zor durumlarda bağışıklık hücrelerini değerlendirmek için tamamlayıcı lekelerin sadece tümör hücrelerinde PD-L1 ekspresyonunun yanlış yorumlanmasını dışlamak için yapılabileceği unutulmamalıdır.
Bu işlem den sonra ince iğne biyopsisi, EUS-FNA veya bronşiyal fırça gibi diğer örnekler değerlendirilebilir. Kliniklerde ayarı sonrasında, taht ın sağlamlığının akreditasyon aranarak, standart çalışma prosedürlerini izleyerek ve düzenli olarak dış kalite değerlendirme programlarına katılarak zaman içinde korunması gerekmektedir. Bu videoyu izledikten sonra, küçük hücreli dışı akciğer kanseri olan hastalardan yaygın olarak kullanılabilir IHC otostainer hem biyopsi ve sitoloji örnekleri üzerinde 22C3 anti-PD-L1 antikor konsantresi kullanarak optimize protokolü uygulamak için iyi bir anlayışa sahip olmalıdır.
