이러한 방법은 종양 조직 과 세포학 표본 모두에서 PD-L1 발현을 결정하기 위해 22C3 항체 농축액을 이용하여 면역요법을 위한 비소세포 폐암 환자의 선택을 신뢰할 수 있고 재현가능한 방식으로 평가하는 실험실의 능력을 확대할 것이다. 이 기술의 주요 장점은 금 본위제 분석과 매우 일치하며 전 세계 지역에서 신뢰할 수있는 고품질 PD-L1 테스트를 지원할 것이라는 것입니다. 일반적으로, 이 방법에 새로운 병리학자는 때때로 관찰된 과립 염색 때문에 투쟁할 것입니다.
더욱이, 인간 세포의 염색은 금 본위제로 관찰된 것보다 다소 강렬하다. 따라서 병리학자의 훈련은 22C3 LDT로 PD-L1 염색의 정확한 해석을 얻기 위하여 필요합니다. 절차를 시연하는 것은 부인이 될 것입니다.
마라메 하밀라, 내 실험실에서 기술자. 시작하려면 종양 조직을 카세트에 10% 중성 완충 된 포르말린으로 수정하고 텍스트 프로토콜에 설명 된 대로 파라핀에 카세트를 포함시킴을 포함하십시오. 용융 파라핀으로 채워진 몰드 내부에 침투 된 조직을 포함.
파라핀이 고화될 때까지 조직이 금형에 머무르게 하십시오. 그 후, 3 마이크로미터의 두께로 파라핀 임베디드 조직을 절제하기 위해 마이크로토메를 사용한다. 파라핀 리본을 양충전 유리 현미경 슬라이드로 옮기.
그런 다음 슬라이드를 섭씨 37도에서 1 시간 동안 건조시하십시오. 첫째, 방부제 용액으로 기관지 세척을 수집합니다. 세탁을 50밀리리터 원내 튜브로 옮기십시오.
DL-Dithiothreitol 2 그램을 추가하고 튜브를 30 분 동안 소용돌이치고 실온에서 5 분 동안 250 배 g의 원심분리기를 제공합니다. 상체를 제거하고 점막 용액의 10 밀리리터를 추가합니다. 샘플을 20분 동안 중간 속도로 흔들고 원심분리기를 실온에서 5분 동안 250배 g로 흔들어 줍니다.
그 후, 상체를 제거하고 세포 펠릿을 10% 중성 버퍼링 포르말린을 포함하는 수집 튜브에 증정한다. 셀 블록 준비 제의 네 방울을 추가합니다. 셀 펠릿을 카세트로 옮기습니다.
이전에 종양 조직 샘플을 준비하기 위해 설명된 프로세스를 사용하여 파라핀 포함 및 단면에 대한 세포 펠릿을 수정합니다. 시작하려면 자동 스테인러와 컴퓨터에 전원을 공급합니다. 자동 염색자 아이콘을 두 번 클릭하고 사용자를 선택합니다.
레이블 만들기를 클릭한 다음 프로토콜에서 클릭합니다. 22C3 프로토콜을 두 번 클릭합니다. 환자의 ID를 입력하고 인쇄를 클릭합니다.
이 후 레이블을 슬라이드에 붙입니다. 선택한 슬라이드 서랍의 버튼을 눌러 열고 라벨이 있는 슬라이드를 열 패드에 놓고 라벨이 위쪽으로 향하고 있습니다. 슬라이드 서랍을 닫습니다.
다음으로 디스펜서에서 캡을 제거합니다. 시약 랙에 시약을 로드합니다. 스테너의 후드를 열고 시약 회전 목마에 시약 랙을 놓고 제대로 맞고 제자리에 고정한 다음 후드를 닫습니다.
소프트웨어에서 사용할 계측기를 클릭한 다음 실행 실행을 클릭합니다. IHC 절차가 끝나면 한 방울의 세척 용액과 함께 수돗물을 사용하여 슬라이드를 몇 초 동안 헹구십시오. 각각 몇 초 동안 두 개의 에탄올 욕조에 순차적으로 침전하여 슬라이드를 탈수한 다음 슬라이드를 커버슬립 기계에 넣고 커버 슬립을 자동으로 로드합니다.
PD-L1 염색의 품질을 평가하기 시작하려면 환자 표본을 검사하기 전에 양수 및 음수 대조군을 분석합니다. 현미경을 사용하여, 적어도 100개의 실행 가능한 종양 세포의 존재를 확인합니다. 4배의 낮은 배율에서 잘 보존된 모든 양수 및 음수 종양 부위를 평가합니다.
그 후, 부분 또는 완전한 세포막 염색점수를 매기고 잘 보존된 종양 부위에 존재하는 모든 종양 세포에 비해 PD-L1 양성 종양 세포의 비율을 평가하여 종양 비율 점수를 계산한다. 이 연구에서는, 종양 비율 점수 또는 TPS는 기관지 세차또는 흉막 삼포액으로부터 제조된 세포 블록에 있는 쌍조직 생검 견본을 위해 평가됩니다. 생검 시편을 이용한 대표적인 염색 패턴은 PD-L1 IHC 22C3 동반자 분석과 비교하여 22C3 항체 농축액을 비교하는 데 사용된다.
TPS 점수의 상관관계를 연속 변수로 측정하는 데 사용되는 인트라클래스 상관관계 계수는 LDT와 금본위제 사이의 99%이다. 세포학 시편을 이용한 대표적인 염색 패턴은 또한 PD-L1 IHC 22C3 동반자 분석과 22C3 항체 농축액을 비교하는 데 사용된다. LDT와 생검 및 세포학 샘플의 일치속도는 TPS 컷 포인트 중 하나를 사용할 때 95% 이상입니다.
TPS를 연속 변수로 사용하는 동안 클래스 내 상관 관계 계수는 0.88에서 0.90 사이입니다. 일단 마스터되면, 이 기술은 조직 과 세포학 견본 둘 다에 대한 양성 또는 종양 조직학에 대한 차단을 평가하는 금 본위제와 높은 일치비율을 줍니다. 이 절차를 시도하는 동안, 시료는 HE 슬라이드에 대한 참조로 평가되어야하며 면역 세포를 평가하기 위한 보완적인 얼룩이 종양 세포에서만 PD-L1 발현의 오해를 배제하기 위해 수행될 수 있음을 기억하는 것이 중요합니다.
이 절차에 따라 미세 바늘 생검, EUS-FNAs 또는 기관지 브러시와 같은 다른 표본을 평가할 수 있습니다. 클리닉에서 설정 한 후, 분석 견고성은 인증을 추구하여 시간이 지남에 따라 유지되어야하며, 표준 운영 절차를 따르고, 정기적으로 외부 품질 평가 계획에 참여하여. 이 비디오를 본 후, 비소세포 폐암 환자로부터 생검 및 세포학 샘플모두에서 널리 이용 가능한 IHC 오토스테너에 22C3 항 PD-L1 항체 농축을 사용하여 최적화된 프로토콜을 구현하는 방법에 대한 좋은 이해를 가져야 한다.
