Этот метод с использованием антитела 22C3 для определения экспрессии PD-L1 как в опухолевой ткани, так и в цитологии позволит расширить возможности лабораторий по оценке отбора пациентов с немоокелесным клеточным раком легких для иммунотерапии надежным и воспроизводимым образом. Основным преимуществом этой техники является то, что она в значительной степени соедна с анализом золотого стандарта и будет поддерживать надежное, высококачественное тестирование PD-L1 в разных регионах по всему миру. В общем, патологоанатомы, новые для этого метода будет бороться из-за гранулированного окрашивания время от времени наблюдается.
Кроме того, окрашивание клеток человека несколько более интенсивным, чем наблюдается с золотым стандартом. Поэтому обучение патологоанатомов необходимо для получения правильной интерпретации Окрашивания PD-L1 22C3 LDT. Демонстрация процедуры будет г-жа
Мараме Хамила, техник из моей лаборатории. Для начала зафиксите опухолевую ткань в 10%нейтрально-буферном формалине в кассете и ввести кассету в парафин, как указано в текстовом протоколе. Вставлять проникли ткани внутри формы, которая наполнена расплавленным парафином.
Пусть ткани остаются в форме, пока парафин затвердеет. После этого используйте микротом для сечения парафин-встроенной ткани толщиной три микрометра. Перенесите парафиновую ленту на позитивно заряженный слайд стеклянного микроскопа.
Затем высушите горку в течение одного часа при 37 градусах по Цельсию. Во-первых, собирать бронхиальные промывки в консервантной растворе. Перенесите стирку в 50-миллилитровую коническую трубку.
Добавить два грамма DL-Dithiothreitol и вихрь трубки в течение 30 минут, затем центрифугу при 250 раз g в течение пяти минут при комнатной температуре. Удалите супернатант и добавьте 10 миллилитров муколитического раствора. Встряхните образец на средней скорости в течение 20 минут и центрифугу при 250 раз g в течение пяти минут при комнатной температуре.
После этого удалите супернатант и свяйте клеточные гранулы в коллекторную трубку, содержащую 10%нейтральный буферный формалин. Добавьте четыре капли агента по подготовке блока ячейки. Перенесите клеточные гранулы на кассету.
Исправить клеточные гранулы для встраивания парафина и секции с использованием процесса, ранее описанного для подготовки образцов опухолевых тканей. Для начала, питание на автостраховщик и компьютер. Дважды нажмите на значок autostainer и выберите пользователя.
Нажмите на кнопку Создать этикетку, а затем на протокол. Дважды нажмите на протокол 22C3. Заполните удостоверение пациента и нажмите Print.
После этого, придерживаться этикетки на слайде. Нажмите кнопку на выбранном ящике слайда, чтобы открыть его и поместить помеченный слайд на тепловой панели с этикеткой, обращенной вверх и внутрь. Закройте ящик слайда.
Затем снимите колпачки с дозаторов. Загрузите реагенты на стойку реагентов. Откройте капот пятна и поместите стойки реагента на реагенты карусели, убедившись, что они подходят должным образом и держать в положении, а затем закрыть капот.
В программном обеспечении нажмите на инструмент, который будет использоваться, а затем нажмите Запуск. В конце процедуры IHC используйте водопроводную воду с одной каплей раствора для очистки слайда в течение нескольких секунд. Обезвоживите слайд, погрузив его последовательно в две ванны этанола в течение нескольких секунд каждый, а затем поместите слайд в крышку машины для автоматической загрузки крышки скольжения.
Чтобы начать оценку качества окрашивания PD-L1, проанализируйте положительный и отрицательный контроль перед изучением образца пациента. Используя микроскоп, подтвердите наличие не менее 100 жизнеспособных опухолевых клеток. При низком увеличении в 4 раза оцените все хорошо сохранившиеся положительные и отрицательные участки опухоли.
После этого оценка частичного или полного окрашивания клеточной мембраны и рассчитать оценку пропорции опухоли путем оценки доли PD-L1-положительных опухолевых клеток по сравнению со всеми опухолевыми клетками, присутствующими в хорошо сохранившихся опухолевых областях. В этом исследовании, оценка пропорции опухоли или TPS оценивается для парных тканей биопсии образцов в блоках клеток, подготовленных из бронхиальных моет или плевральных выпотов. Репрезентативные модели окрашивания с образцами биопсии используются для сравнения концентрата 22C3-антитела с анализом спутника PD-L1 IHC 22C3.
Коэффициент корреляции внутрикласса, который используется для измерения корреляции балла TPS как непрерывной переменной, составляет 99% между LDT и золотым стандартом. Репрезентативные модели окрашивания с образцами цитологии также используются для сравнения концентрата 22C3-антитела с анализом спутника PD-L1 IHC 22C3. Скорость согласия образцов биопсии и цитологии с LDT превышает 95%при использовании любой из точек разреза TPS.
Коэффициент внутриклассовой корреляции при использовании TPS в качестве непрерывной переменной составляет от 0,88 до 0,90. После освоения, этот метод дает высокий уровень согласия с золотым стандартом в оценке отсечения для положительности или гистологии опухоли для тканей и цитологии образцов. При попытке этой процедуры, важно помнить, что образцы должны быть оценены со ссылкой на слайд HE и в некоторых сложных случаях дополнительные пятна для оценки иммунных клеток могут быть выполнены, чтобы исключить неправильное толкование экспрессии PD-L1 только в опухолевых клетках.
После этой процедуры можно оценить другие образцы, такие как биопсия тонкой иглы, EUS-FNAs или бронхиальные щетки. После его установки в клиниках, анализ надежности необходимо поддерживать с течением времени, стремясь к аккредитации, следуя стандартным операционным процедурам, и регулярно участвуя во внешних схемах оценки качества. После просмотра этого видео, вы должны иметь хорошее понимание того, как реализовать оптимизированный протокол с помощью 22C3 анти-PD-L1 антитела сосредоточиться на широко доступных IHC аутостинер как биопсии и цитологии образцов у пациентов с не-малого рака легких клеток.
