שיטה זו מאפשרת בדיקה של דינמיקת החלבון ב- vivo בתוך מערכת העצבים המרכזית ללא פגע כדי לענות על שאלות במדעי המוח ואימונולוגיה. היתרונות העיקריים של הליך זה הם יציבות תנועה מצוינת לרכישת תמונה, זמן ניתוחי קצר, חשיפה מופחתת מפעיל הרדמה גזית, ו backplates להתאמה אישית זול. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית קשה להסיר את העצם מבלי לפגוע ברקמת מערכת העצבים הבסיסית במהלך שלבי כריתת המעי הגס של ההליך.
לפני תחילת ההליך, השתמש בתוכנת עיצוב בעזרת מחשב תלת-ממדי כדי ליצור מודל לממדים שצוינו. אז יש לנו חפץ, שהוא האובייקט התלת מימדי, עם זה אנחנו יכולים להתחיל. מה שאני יכול לעשות אז הוא אנחנו יכולים לשים הגדרות על זה עבור גירסת ההדפסה.
אז אם אני פותח את ערוך את זה, להיכנס מתקדם, לפתוח חלון המאפשר לי להסתכל על כל ההגדרות האלה. הגדר את טמפרטורת הזרבובית ל-205 מעלות צלזיוס, את טמפרטורת המיטה ל-45 מעלות צלזיוס ואת מהירות ההדפסה ל-45 מילימטרים לשנייה במדפסת תלת-ממד. השתמש בזרבובית ent חמה 0.4 מילימטר וגובה שכבה של 0.2 מילימטר כדי להדפיס את הלוחות האחוריים.
לאחר מכן להעריך את הלוחות האחוריים המודפסים חזותית לשלמות המבנית שלהם. כשלים מבניים חמורים מצביעים על פגמים בהדפסה. כאשר הצלחות האחוריות מוכנות, מניחים את ראשו של עכבר הרדמה בן שמונה עד 12 שבועות על כרית חום בין פסי האוזן של מרסן כירורגי ולהחיל משחה על העיניים של החיה.
לאחר אישור חוסר תגובה קמצוץ בוהן, להשתמש בלהב מספר 11 כדי להפוך את rostral 1.5 ס"מ כדי caudal חתך קו האמצע מעל אזור המותני העליון בית החזה התחתון ולהפריד את העור מן הצדת. השתמש במקלפים כדי לקלף בחזרה כל רקמת חיבור שקופה שנותרה מתחת לעור כדי לחשוף את השרירים השטחיים. לעקור את השרירים עם חנית כירורגית קצף יחד עם השרירים העמוקים הנותרים של חוליית היעד.
כדי ליצור מושב עבור הצלחת האחורית, לנקות את השריר מן ההיבט האחורי של בית החזה 11 ואת ההיבט הקדמי של בית החזה 13. שימוש במדפים כדי להסיר את השריר הנותר מן הגידים לפי הצורך. כאשר כל השריר הוסר, בזהירות לחתוך את הגידים עם מדחיפים עד מספיק מקום לדמיין ולתפעל את חוט השדרה מושגת.
אשר כי מאטר דורה של החלל הבין חולייתי, עצם למינאר חצי תדר, כלי הדם השטחי המרכזי מתחת לעצם, ואת העורק המקרין לפנים גלויים בבירור. הרטב את האזור בנוזל מוח מלאכותי חם ולהשתמש מיקרו-מקדחה כדי לדלל את עצם למינאר באמצעות משיכות ישרות במקביל לציר הארוך של חוט השדרה. תופסים בעדינות את התהליך השטחי עם מטחנות, מרימים את החוליה.
העצם צריכה להרים בקלות. השתמש במדפים מספר ארבע כדי לנקות את כל שברי העצם, שליטה בכל דימום עם חנית כירורגית ולחץ יציב עדין לפי הצורך. לאחר מכן שטפו את הרקמה בנוזל מוח מלאכותי חם.
להשתלת זכוכית כיסוי, בעדינות להחיל זכוכית כיסוי borosilicate שלושה מילימטר על כבל חשוף. השתמש מרית קטנה כדי להחיל 39 מעלות צלזיוס התחמם 2% agarose על קצה הזכוכית ולאפשר פעולה נימי לצייר את agarose מתחת למשטח זכוכית כיסוי. החל דבק רקמות על תהליכי פרקי גרמי חשוף של החוליה הסמוכה שלם ברמה החזה 11 ו 13 קוצים חולייתיים.
החל דבק רקמה נוסף בטבעת סביב אתר כריתת למין מעל הגיד הסמוך ואת התהליך הרוחבי. לאחר מכן, השתמש מרית חדשה כדי להחיל מלט שיניים מעורבב עם מאיץ על שכבת דבק הרקמה ולהחיל צלחת אחורית על השדה כירורגי מרוכז מעל חלון זכוכית כיסוי. החלת שכבות דקות מרובות של מלט דנטלי גורמת להיתוך חזק יותר של צלחת אחורית, אך הקפד למקם את הצלחת האחורית במהירות לפני שהמלט הדנטלי מתחיל להתייבש.
לאחר מתן מלט שיניים לרפא במשך 10 דקות, למלא את הבסיס הפנימי ואת החלק התחתון של המקום האחורי עם דבק נוסף. החלת מלט שיניים בשכבות דקות יכול לעזור להפחית את הסיכון של מלט מתפשט על זכוכית כיסוי agarose, אשר יכול לסכן את הפרוטוקול כולו. כאשר המלט הדנטלי התייבש, יש למרוח מחזיק צלחת אחורית מנומקת על המיקום המתאים מעל החלון ולבורג את הצלחת האחורית למחזיק הצלחת האחורית.
לאחר מכן להחיל מלוחים על הצלחת האחורית כדי לבדוק דליפה. לאחר מכן ניתן להעביר את החיה ואת הפלטפורמה הכירורגית לשולחן האופטי של מיקרוסקופ שני פוטון להדמיה דרך חלון הזכוכית המכסה. בניסוי מייצג זה, EGFP חיובי claudin-5 היה דמיין בתוך צמתים הדוקים שכותרתו פלואורסצנטי ברחבי מקלעת כלי דם.
התיווח הברור של מבני הצומת ההדוקים בהקרנת Z מצביע על כך שתזוזת תמונה XY מינימלית מיוצרת לאחר כריתת למין מוצלחת, מיקום חלון והשתלת לוח אחורי. בעת ניסיון הליך זה חשוב לזכור כי מיקרוכירורגיה זו קשה ועשוי לקחת זמן לשלוט. עם זאת, לאחר השליטה, ניתוח זה יכול להתבצע כ 30 דקות.
בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כמו שני מיקרוסקופיית פוטון והדמיה של ויוו, כדי לענות על שאלות נוספות על שיפוץ כלי דם עצביים ותהליכי מחלה אחרים הקשורים לחוט השדרה.
