이 방법은 신경 과학 및 면역학에 있는 질문을 해결하기 위하여 그대로 중앙 신경계 내의 생체 내의 단백질 역학의 검사를 가능하게 합니다. 이 절차의 주요 장점은 이미지 수집에 대한 우수한 모션 안정성, 짧은 수술 시간, 기체 마취에 대한 작업자 노출 감소, 저렴한 사용자 정의 백플레이트입니다. 이 방법의 시각적 데모는 절차의 라미네절제술 단계 동안 밀접하게 근본적인 신경계 조직을 손상시키지 않고 뼈를 제거하기 어렵기 때문에 중요합니다.
절차를 시작하기 전에 3D 컴퓨터 지원 설계 소프트웨어를 사용하여 표시된 차원에 대한 모델을 만듭니다. 그래서 우리는 3 차원 개체인 객체를 가지고 있으며, 이것이 우리가 시작할 수 있는 것입니다. 내가 할 수있는 것은 우리가 인쇄 버전에 대한 설정에 넣을 수 있다는 것입니다.
그래서 이 편집을 열면 Advanced로 이동하여 이러한 설정을 모두 볼 수 있는 창을 엽니다. 노즐 온도를 섭씨 205도, 침대 온도를 섭씨 45도로 설정하고 인쇄 속도를 3D 프린터에서 초당 45mm로 설정합니다. 0.4 밀리미터 의 뜨거운 엔트 노즐과 0.2 밀리미터 레이어 높이를 사용하여 뒷면 플레이트를 인쇄합니다.
그런 다음 인쇄된 백 플레이트를 시각적으로 평가하여 구조적 무결성을 위해 평가합니다. 총 구조적 고장은 인쇄 결함을 나타냅니다. 백 플레이트가 준비되면 수술 용 제지자의 이어 바 사이에 열 패드에 8 -12 주 된 마취 마우스의 머리를 놓고 동물의 눈에 연고를 적용하십시오.
발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 숫자 11 블레이드를 사용하여 하부 흉부 상부 요추 부위에 걸쳐 코달 미드 라인 절개에 1.5 센티미터 로스트랄을 만들고 피부와 배후로부터 피부를 분리하십시오. 집게를 사용하여 피부 아래에 남아있는 투명한 결합 조직을 벗겨 피상적 인 근육을 노출하십시오. 대상 척추의 나머지 깊은 근육과 함께 거품 수술 창으로 근육을 대체합니다.
백 플레이트에 대한 좌석을 만들려면 흉부 11의 후방 측면과 흉부 13의 전방 측면에서 근육을 제거하십시오. 필요에 따라 힘줄에서 나머지 근육을 제거하기 위해 집게를 사용하여. 모든 근육이 제거되면 척수를 시각화하고 조작하기에 충분한 공간이 될 때까지 힘줄을 집게로 조심스럽게 잘라냅니다.
추간판의 두라 메이트, 반투명 라미나르 뼈, 뼈 아래중앙 피상성 혈관, 전방 방사 동맥이 명확하게 볼 수 있는지 확인한다. 따뜻한 인공 뇌 척수액으로 부위를 적시고 미세 드릴을 사용하여 척수의 긴 축과 평행한 직선 스트로크를 사용하여 라미나르 뼈를 얇게 만듭니다. 집게로 피상적 인 가시 공정을 부드럽게 잡고 척추를 들어 올립니다.
뼈는 쉽게 들어 올려야합니다. 네 번의 집게를 사용하여 뼈 조각을 제거하고 수술 창으로 출혈을 제어하고 필요에 따라 부드러운 꾸준한 압력을 제어하십시오. 그런 다음 따뜻한 인공 뇌 척수액으로 조직을 헹구습니다.
커버 글래스 이식의 경우, 노출된 코드에 3mm 보로실리케이트 커버 글래스를 부드럽게 발라주세요. 작은 주걱을 사용하여 39도 따뜻하게 데운 아가로즈를 유리 가장자리에 적용하고 모세관 작용이 커버 유리 표면 아래에 아가로즈를 그릴 수 있도록 하십시오. 흉부 레벨 11 및 13 척추 척추에서 그대로 인접한 척추의 노출된 뼈 관절 과정에 조직 접착제를 적용합니다.
인접한 힘줄과 횡방향 과정을 통해 라미네절 절제술 부위 주변의 링에 추가 조직 접착제를 적용하십시오. 다음으로, 새로운 주걱을 사용하여 조직 접착제 층에 가속기와 혼합된 치과 시멘트를 적용하고 표지 유리 창을 중심으로 수술장에 백 플레이트를 놓습니다. 여러 개의 얇은 층의 치과 시멘트를 적용하면 백 플레이트 접착력이 강해지지만 치과 시멘트가 건조되기 전에 백 플레이트를 신속하게 배치해야합니다.
치과 시멘트가 10 분 동안 치료 할 수 있도록 한 후, 추가 접착제와 뒤의 장소의 내부 베이스와 밑면을 채웁니다. 얇은 층에 치과 시멘트를 적용하면 시멘트가 커버 유리와 아가로즈로 퍼지는 위험을 줄이는 데 도움이 될 수 있으며, 이는 전체 프로토콜을 손상시킬 수 있습니다. 치과 시멘트가 건조되면, 포크 백 플레이트 홀더를 창 위에 적절한 위치에 적용하고 백 플레이트를 백 플레이트 홀더에 나사로 넣습니다.
그런 다음 누설 을 테스트하기 위해 뒷면 플레이트에 식염수를 적용합니다. 동물과 수술 플랫폼은 표지 유리 창을 통해 이미징을 위한 2개의 광자 현미경의 광학 테이블로 옮겨질 수 있습니다. 본 대표적인 실험에서 EGFP 양성 클라이넥-5는 혈관 신경총 전체에 걸쳐 형광으로 부착된 단단한 접합 내에서 시각화되었다.
Z 프로젝션의 단단한 접합 구조물의 명확한 묘사는 성공적인 라미독, 창 배치 및 백 플레이트 이식 후에 최소한의 XY 이미지 변위가 생성된다는 것을 나타냅니다. 이 절차를 시도하는 동안이 미세 수술이 어렵고 마스터하는 데 시간이 걸릴 수 있음을 기억하는 것이 중요합니다. 그러나 일단 마스터되면,이 수술은 약 30 분 안에 수행 될 수 있습니다.
이 절차에 따라, 다른 방법, 두 광자 현미경 검사법과 생체 내 이미징 처럼, 신경 혈관 리모델링 및 척수와 관련 된 다른 질병 프로세스에 대 한 추가 질문에 대답 하기 위해 수행 될 수 있다.
