Этот метод позволяет изутовить динамику протеина in vivo внутри intact центральная нервная система для того чтобы адресовать вопросы в neuroscience и иммунологии. Основными преимуществами этой процедуры являются отличная стабильность движения для получения изображения, краткое хирургическое время, снижение воздействия оператора на газозвуковой анестезии, а также недорогие настраиваемые backplates. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, как трудно удалить кости, не повреждая тесно основной ткани нервной системы во время ламинэктомии шаги процедуры.
Перед началом процедуры используйте программное обеспечение для проектирования с помощью 3D-компьютера для создания модели с указанными размерами. Итак, у нас есть объект, который является трехмерным объектом, это то, с чего мы можем начать. То, что я могу сделать, это мы можем поставить настройки на том, что для печатной версии.
Так что если я открою Редактировать это, перейдите в Расширенный, откройте окно, которое позволяет мне смотреть на все эти настройки. Установите температуру сопла до 205 градусов по Цельсию, температуру кровати до 45 градусов по Цельсию и скорость печати до 45 миллиметров в секунду на 3D-принтере. Используйте 0,4 миллиметра горячего сопла и высотой слоя 0,2 миллиметра для печати задних пластин.
Затем оцените напечатанные задние пластины визуально для их структурной целостности. Грубые структурные сбои указывают на дефекты печати. Когда задние пластины будут готовы, поместите голову 8-12-недельной обезболивающей мыши на тепловую прокладку между ушными прутьями хирургического удерщика и нанесите мазь на глаза животного.
После подтверждения отсутствия реакции на щепотку нося, используйте лезвие номер 11, чтобы сделать 1,5 сантиметра рострального каудального разреза средней линии над нижней грудной верхней поясничной области и отделить кожу от брюшной полости. Используйте типсы, чтобы очистить все оставшиеся прозрачные соединительной ткани под кожей, чтобы разоблачить поверхностные мускулатуры. Вытеснить мышцы с пеной хирургического копья вместе с оставшейся глубокой мышечной целевого позвонка.
Чтобы создать сиденье для задней пластины, очистить мышцы от заднего аспекта грудной 11 и передний аспект грудной 13. Использование миппов для удаления оставшейся мышцы из сухожилий по мере необходимости. Когда все мышцы были удалены, тщательно сократить сухожилия с типсами, пока достаточно места для визуализации и манипулирования спинного мозга достигается.
Подтвердите, что хорошо видна дурная матер межпозвонкового пространства, полупрозрачная ламинарная кость, центральный поверхностный кровеносный сосуд под костью и передняя излучающая артерия. Влажный регион с теплой искусственной спинномозговой жидкости и использовать микро-дрель для разжижения ламинарный кости с помощью прямых ударов параллельно длинной оси спинного мозга. Аккуратно хватая поверхностный спинной процесс типсами, поднимите позвонок.
Кость должна легко отойти. Используйте миппы номер четыре, чтобы очистить любые осколки костей, контролируя любое кровотечение хирургическим копьем и нежным устойчивым давлением по мере необходимости. Затем промойте ткань теплой искусственной спинномозговой жидкостью.
Для имплантации крышки стекла аккуратно нанесите трехмиллиметровое борозиликатное стекло крышки на открытый шнур. Используйте небольшой шпатель, чтобы применить 39 градусов по Цельсию нагревается 2%agarose к краю стекла и позволяют капиллярного действия, чтобы привлечь агарозу под поверхностью крышки стекла. Нанесите клей тканей на открытые костлявые суставные процессы нетронутого соседнего позвонка на грудном уровне 11 и 13 позвонков.
Нанесите дополнительный клей ткани в кольцо вокруг участка ламинэктомии над соседним сухожилием и поперечным процессом. Далее, используйте новый шпатель для применения зубного цемента, смешанного с ускорителем на клей слой ткани и поместите заднюю пластину на хирургическое поле по центру окна крышки стекла. Применение нескольких тонких слоев зубного цемента приводит к более сильной адгезии задней пластины, но не забудьте разместить заднюю пластину быстро, прежде чем зубной цемент начинает высыхать.
После разрешения зубного цемента для лечения в течение 10 минут, заполнить внутреннее основание и нижней части задней части места с дополнительным клеем. Применение зубного цемента в тонких слоях может помочь уменьшить риск распространения цемента на крышку стекла и агарозы, которые могут поставить под угрозу весь протокол. Когда зубной цемент высохнет, нанесите раздвоенный держатель задней пластины в соответствующее положение над окном и привинчивать заднюю пластину в держатель задней пластины.
Затем нанесите физраствор на заднюю пластину, чтобы проверить на утечку. Затем животное и хирургическая платформа могут быть перенесены на оптический стол из двух фотонные микроскопы для визуализации через окно крышки стекла. В этом репрезентативном эксперименте, EGFP положительный claudin-5 был визуализирован в флуоресцентно помечены жесткие соединения по всему сосудистому сплетению.
Четкое разграничение плотных структур соединения в проекции q указывает на то, что минимальное смещение изображения XY производится после успешной ламинэктомии, размещения окон и имплантации задней пластины. При попытке этой процедуры важно помнить, что эта микрохирургия является трудным и может занять некоторое время, чтобы освоить. Однако после освоения, эта операция может быть выполнена примерно в 30 минут.
После этой процедуры, другие методы, как две фотонные микроскопии и in vivo изображений, могут быть выполнены, чтобы ответить на дополнительные вопросы о нервно-сосудистых ремоделирования и других процессов заболевания, связанных со спинным мозгом.
