Bu yöntem, bozulmamış merkezi sinir sistemi içinde in vivo protein dinamiğinin incelenmesini sağlayarak nörobilim ve immünoloji alanındaki soruları ele alır. Bu prosedürün başlıca avantajları görüntü edinimi için mükemmel bir hareket stabilitesi, kısa cerrahi süre, gaz anestezi azaltılmış operatör maruz kalma ve ucuz özelleştirilebilir backplates vardır. Bu yöntemin görsel gösterimi, prosedürün laminektomi adımları sırasında altta yatan sinir sistemi dokusuna zarar vermeden kemiğin çıkarılması zor olduğu için önemlidir.
Yordamı başlamadan önce, belirtilen boyutlara bir model oluşturmak için 3B bilgisayar destekli tasarım yazılımı kullanın. Yani elimizde üç boyutlu bir nesne var, bununla başlayabiliriz. Daha sonra yapabileceğim şey, baskı sürümü için ayarları koyabiliyoruz.
Bu yüzden bunu edit'i açarsam, Advanced'e gidin ve tüm bu ayarlara bakmamı sağlayan bir pencere açın. Meme sıcaklığını 205 dereceye, yatak sıcaklığını 45 dereceye, yazdırma hızını ise 3D yazıcıda saniyede 45 milimetreye ayarlayın. Arka plakaları yazdırmak için 0,4 milimetresıcak ent nozul ve 0,2 milimetrelik katman yüksekliği kullanın.
Daha sonra yazdırılan arka plakaları yapısal bütünlükleri için görsel olarak değerlendirin. Brüt yapısal hatalar yazdırma hatalarını gösterir. Arka plakalar hazır olduğunda, sekiz ila 12 haftalık anestezili farenin başını cerrahi bir engelleyicinin kulak çubukları arasında bir ısı yastığına yerleştirin ve hayvanın gözlerine merhem uygulayın.
Parmak ucurmasına yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, alt torasik üst lomber bölge üzerinde kaudal orta hat kesisine 1,5 santimetrelik rostral yapmak ve cildi peritondan ayırmak için 11 numaralı bıçağı kullanın. Yüzeysel kas ortaya çıkarmak için deri altında kalan şeffaf bağ dokusu geri soymak için forceps kullanın. Hedef vertebra kalan derin kas ile birlikte bir köpük cerrahi mızrak ile kasları yerinden.
Arka plaka için bir koltuk oluşturmak için, torasik 11 ve torasik 13 ön yönü arka kısmından kas temizleyin. Gerekli tendondan kalan kas kaldırmak için forceps kullanarak. Tüm kas çıkarıldığında, dikkatle görselleştirme ve omurilik manipüle için yeterli alan elde edilene kadar forseps ile tendonu kesti.
İntervertebral uzayın dura mater, yarı saydam laminar kemik, kemik altında merkezi yüzeysel kan damarı, ve anterior yayılan arter açıkça görülebilir. Bölgeyi sıcak yapay serebral spinal sıvı ile ısıtın ve omuriliğin uzun eksenine paralel düz vuruşlar kullanarak laminar kemiği inceltmek için mikro matkap kullanın. Hafifçe forseps ile yüzeysel spinous süreci kavrayarak, vertebra kaldırın.
Kemik kolayca kaldırılmalıdır. Herhangi bir kemik kırıkları temizlemek için sayısı dört forceps kullanın, bir cerrahi mızrak ve gerektiği gibi nazik sabit basınç ile herhangi bir kanama kontrol. Sonra sıcak yapay beyin omurilik sıvısı ile doku durulayın.
Kapak camı implantasyonu için, açıktaki kabloya üç milimetrelik borosilikat kapakca hafifçe uygulayın. 39 derece Santigrat uygulamak için küçük bir spatula kullanın cam kenarına% 2 agarose ısıtılır ve kapak cam yüzeyinin altında agarose çizmek için kılcal eylem sağlar. Torasik düzey 11 ve 13 vertebra iktisadi sinde bozulmamış komşu vertebranın maruz kalan kemikli eklem süreçlerine doku yapıştırıcısı uygulayın.
Komşu tendon ve enine işlem üzerinde laminektomi siteetrafında bir halka ek doku yapıştırıcı uygulayın. Daha sonra, doku yapışkan tabakası üzerine hızlandırıcı ile karışık diş çimentosu uygulamak için yeni bir spatula kullanın ve kapak cam pencere üzerinde merkezli cerrahi alana bir arka plaka yerleştirin. Diş çimentosu birden fazla ince tabaka uygulanması daha güçlü bir arka plaka yapışmasonuçları, ancak diş çimentosu kurumaya başlamadan önce hızlı bir şekilde arka plaka yerleştirmek için emin olun.
Diş çimentosu 10 dakika tedavi için izin verdikten sonra, ek yapıştırıcı ile arka yerin iç tabanı ve alt doldurun. Diş çimentosu ince tabakalar halinde uygulanması, tüm protokolü tehlikeye sokabilir kapak cam ve agarose, çimento yayılması riskini azaltmaya yardımcı olabilir. Diş çimentosu kuruduğunda, çatallı arka plaka tutucuyu pencerenin üzerinde uygun konuma uygulayın ve arka plakayı arka plaka tutucuya vidalayın.
Daha sonra sızıntı yı test etmek için arka plakaya tuzlu uygulayın. Hayvan ve cerrahi platform daha sonra kapak cam pencereden görüntüleme için iki foton mikroskobun optik tabloya transfer edilebilir. Bu temsili deneyde, EGFP pozitif claudin-5 bir vasküler pleksus boyunca floresan etiketli sıkı kavşaklar içinde görselleştirilmiştir.
Z projeksiyonundaki sıkı kavşak yapılarının net bir şekilde tanımlaması, başarılı bir laminektomi, pencere yerleşimi ve arka plaka implantasyonundan sonra minimal XY görüntü deplasmanının üretildiğini gösterir. Bu prosedürü denerken bu mikrocerrahinin zor olduğunu ve ustalaşmanın zaman alabileceğini unutmamak önemlidir. Ancak bir kez hakim, bu ameliyat yaklaşık 30 dakika içinde yapılabilir.
Bu prosedürü takiben, diğer yöntemler, iki foton mikroskopi ve in vivo görüntüleme gibi, nörovasküler remodeling ve omurilik içeren diğer hastalık süreçleri hakkında ek sorulara cevap için yapılabilir.
