תצפית על פוטו-בהביור בכלמידומונס ריינהרדטי

שאלת המפתח ששיטה זו מתייחסת אליה היא, אם זן של כלמידומונס מעניין שומר על היכולת להתנהגויות צילום או לא. שיטה זו היא פשוטה, מהירה וקלה לבדיקה אם זן של מעניין מפגין התנהגויות צילום. שיטה זו יכולה לתרום לפוטו-ביולוגיה ולביולוגיה של התא של תנועתיות סילארית.

מי שידגים את ההליך יהיה אטסוקו איסו, טכנאי מעבדה מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, הוסיפו שניים עד שלושה מיליליטרים של תרחיף תא בצלחת פטרי של 3.5 ס"מ והניחו את התבשיל על קופסת אור. יש לנער את המנה בעדינות כדי להפיץ את התאים באופן אחיד ולרכוש תמונה לפני ההארה.

האירו את המנה מצד אחד באמצעות דיודה או נורית LED פולטת אור ירוק בחדר חשוך שולחני. השאירו את המנה כחמש דקות לפני שאתם רוכשים תמונות. לבדיקת פוטוטקסיס באמצעות טיפות תרבית תאים, הניחו 25 מיקרוליטרים של טיפות תרחיף תאים ישירות על צלחת פלסטיק לבנה באמצעות מיקרו פיפטה.

האירו את הטיפות מצד אחד עם נורית LED ירוקה בחדר חשוך שולחני והשאירו אותן למשך שלוש דקות לפני שאתם רוכשים תמונות. מניחים 30 מיקרוליטרים של מתלי תאים על מגלשת זכוכית ומניחים כיסוי בגודל 18 על 18 מילימטרים עם ספייסרים בצד. האירו את הדגימות מצד אחד של החלקת הכיסוי ללא ספייסר עם נורית LED ירוקה, והתבוננו בתאים מתחת למיקרוסקופ שדה כהה עם עדשת מטרה 10X תחת אור אדום עמום.

לאחר הדלקת האור, הקלט את תאורת התא למשך 20 שניות באמצעות מיקרוסקופ המצויד במצלמה. לצורך בדיקת תגובת הפוטשוק, הניחו 30 מיקרוליטרים של מתלי תאים על מגלשת זכוכית, והניחו מגלשת כיסוי עם ספייסרים על גבי המגלשה. התבוננו בתא תחת מיקרוסקופ עם אור אדום עמום.

החל את תאורת הפלאש באמצעות מבזק מצלמה בעת הקלטת תנועת התא. דוגמה מייצגת של פוטוטקסיס שלילי בכלמידומונס ריינהרדטי לאחר חמש דקות של תאורה צדדית מוצגת כאן. רוב התאים הצטברו בצד הנגדי של מקור האור.

בבדיקת התגובה של הפוטושוק, כמעט כל התאים הציגו את תגובת הפוטושוק. התאים שחו לאחור במשך תקופה קצרה והתאוששו בשחייה קדימה. כדי לבצע הליך זה, השתמש בתאי aridimigudolphase וחשוף אותם לאור האדום לפני הבדיקה.

אם לא ייחשפו לאור האדום, התאים יהפכו לחסרי רגישות לאור. טכניקה זו מבודדת מוטציות שונות עם פוטוטקסיס חריג של תגובות פוטושוק. בנוסף, זוהו גורמים תוך-תאיים וחוץ-תאיים שונים המשפיעים על התנהגויות צילום.