A pergunta chave que este método aborda é, se uma variedade de clamídias interessantes mantém a capacidade para comportamentos fotográficos ou não. Este método é simples, rápido e fácil de testar se uma variedade de comportamentos fotográficos interessantes exibe. Este método pode contribuir para a fotobiologia e biologia celular da motilidade ciliar.
Demonstrando o procedimento estará Atsuko Isu, um técnico de laboratório do meu laboratório. Para começar, adicione dois a três mililitros de suspensão celular em uma placa de Petri de 3,5 centímetros e coloque a placa em uma caixa de luz. Agite o prato suavemente para distribuir uniformemente as células e adquirir uma imagem antes da iluminação.
Ilumine o prato de um lado com um diodo verde emissor de luz ou LED em uma sala escura de desktop. Deixe o prato por aproximadamente cinco minutos antes de adquirir imagens. Para ensaio de fototaxis usando gotículas de cultura celular, coloque 25 microliters de gotículas de suspensão celular diretamente em uma placa de plástico branca usando uma micro pipeta.
Ilumine as gotículas de um lado com um LED verde em uma sala escura de desktop e deixe-as por três minutos antes de adquirir imagens. Coloque 30 microlitros de suspensão celular em um deslizamento de vidro e coloque um deslizamento de cobertura de 18 por 18 milímetros com espaçadores ao lado. Ilumine as amostras de um lado da tampa sem um espaçador com um LED verde, e observe as células sob um microscópio de campo escuro com uma lente objetiva de 10X sob luz vermelha fraca.
Após a iluminação da luz, registo a iluminação celular por 20 segundos usando um microscópio equipado com câmera. Para o ensaio de resposta ao choque de fotosh, coloque 30 microlitros de suspensão celular em um slide de vidro e coloque um deslizamento de tampa com espaçadores em cima do slide. Observe a célula sob um microscópio com luz vermelha fraca.
Aplique iluminação flash usando um flash da câmera durante a gravação do movimento do celular. Um exemplo representativo de fototaxis negativas em Clalamydomonas reinhardtii após cinco minutos de iluminação lateral é mostrado aqui. A maioria das células se acumulou no lado oposto da fonte de luz.
No ensaio de resposta ao photoshock, quase todas as células exibiam a resposta ao choque de fotoss. As células nadaram para trás por um curto período e se recuperaram na natação dianteira. Para realizar este procedimento, use células aridimigudolphase e exponha-as à luz vermelha antes do ensaio.
Se não forem expostas à luz vermelha, as células se tornarão insensíveis à luz. Esta técnica isola vários mutantes com fototáxis anormais de respostas de fotosquetas. Além disso, vários fatores intracelulares e extracelulares que influenciam comportamentos fotográficos foram identificados.
