La question clé que cette méthode aborde est de savoir si une souche de Chlamydomonas intéressante conserve ou non la capacité de comportements photo. Cette méthode est simple, rapide et facile à tester si une souche intéressante présente des comportements photo. Cette méthode peut contribuer à la photobiologie et à la biologie cellulaire de la motilité ciliaire.
Atsuko Isu, une technicienne de laboratoire de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure. Pour commencer, ajoutez deux à trois millilitres de suspension cellulaire dans une boîte de Petri de 3,5 centimètres et placez le plat sur une boîte à lumière. Secouez doucement le plat pour répartir uniformément les cellules et acquérir une image avant l’éclairage.
Illuminez la parabole d’un côté avec une diode électroluminescente verte ou une LED dans une pièce sombre de bureau. Laissez le plat pendant environ cinq minutes avant d’acquérir des images. Pour le dosage de la phototaxie à l’aide de gouttelettes de culture cellulaire, placez 25 microlitres de gouttelettes de suspension cellulaire directement sur une plaque de plastique blanc à l’aide d’une micro pipette.
Illuminez les gouttelettes d’un côté avec une LED verte dans une pièce sombre de bureau et laissez-les pendant trois minutes avant d’acquérir des images. Placez 30 microlitres de suspension cellulaire sur une glissière en verre et placez un couvercle de 18 x 18 millimètres avec des entretoises sur le côté. Illuminez les échantillons d’un côté du couvercle sans espaceur avec une LED verte et observez les cellules sous un microscope à fond noir avec un objectif 10X sous une lumière rouge tamisée.
Après l’éclairage lumineux, enregistrez l’éclairage de la cellule pendant 20 secondes à l’aide d’un microscope équipé d’une caméra. Pour le test de réponse au photochoc, placez 30 microlitres de suspension cellulaire sur une glissière en verre et placez un couvercle avec des entretoises sur le dessus de la glissière. Observez la cellule au microscope avec une faible lumière rouge.
Appliquez un éclairage flash à l’aide d’un flash d’appareil photo tout en enregistrant le mouvement de la cellule. Un exemple représentatif de phototaxie négative chez Chlamydomonas reinhardtii après cinq minutes d’éclairage latéral est montré ici. La plupart des cellules se sont accumulées du côté opposé de la source lumineuse.
Dans le test de réponse au photochoc, presque toutes les cellules ont présenté la réponse au photochoc. Les cellules ont nagé vers l’arrière pendant une courte période et se sont rétablies en nageant vers l’avant. Pour effectuer cette procédure, utilisez des cellules aridimigudolphase et exposez-les à la lumière rouge avant le test.
Si elles ne sont pas exposées à la lumière rouge, les cellules deviendront insensibles à la lumière. Cette technique isole divers mutants avec une phototaxie anormale des réponses de photochoc. En outre, divers facteurs intracellulaires et extracellulaires qui influencent les comportements photographiques ont été identifiés.
