クラミドモナス・ラインハルティイにおける光挙動の観察

この方法が対処する重要な問題は、興味深いクラミドモナスの株が写真行動の能力を保持しているかどうかです。この方法は、興味のあるひずみが写真の動作を示すかどうかをテストするのは簡単で、迅速かつ簡単です。この方法は、毛様体運動性の光生物学および細胞生物学に寄与することができる。

手順を実演するのは、私の研究室のラボテクニシャンであるIsu敦子です。まず、3.5センチメートルのペトリ皿に2〜3ミリリットルの細胞懸濁液を加え、皿をライトボックスの上に置きます。皿を優しく振って細胞を均一に分布させ、照明前に画像を取得します。

デスクトップの暗い部屋では、緑色の発光ダイオードまたはLEDで皿を片側から照らします。画像を取得する前に、約5分間皿を離れてください。細胞培養液滴を用いたフォトタクシーアッセイでは、マイクロピペットを用いて25マイクロリットルの細胞懸濁液液滴を白色プラスチックプレート上に直接置きます。

デスクトップの暗い部屋で緑色のLEDで片側から液滴を照らし、3分間放置してから画像を取得します。30マイクロリットルの細胞懸濁液をスライドガラスの上に置き、側面にスペーサー付きの18 x 18ミリメートルのカバースリップを置きます。スペーサーなしでカバースリップの片側からサンプルを緑色のLEDで照らし、薄暗い赤色光の下で10倍の対物レンズを備えた暗視野顕微鏡で細胞を観察します。

光照射後、カメラ付き顕微鏡を用いて細胞照明を20秒間記録する。光ショック応答アッセイのために、30マイクロリットルの細胞懸濁液をスライドガラス上に置き、スライドの上にスペーサー付きのカバースリップを置く。薄暗い赤色光で顕微鏡下で細胞を観察します。

セルの動きを記録しながら、カメラのフラッシュを使用してフラッシュ照明を適用します。ここでは、5分間のサイド照明後のクラミドモナス・ラインハルティイにおけるネガティブフォトタクシーの代表例を示す。ほとんどの細胞は光源の反対側に蓄積した。

光ショック応答アッセイにおいて、ほとんどすべての細胞が光ショック応答を示した。細胞は短期間後方に泳ぎ、前方泳ぎを回復した。この手順を実行するには、aridimigudolphase細胞を使用し、アッセイ前に赤色光にさらします。

赤色光にさらされない場合、細胞は光に対して鈍感になります。この技術は、光ショック応答の異常な光タクシーを有する様々な変異体を単離する。さらに、写真行動に影響を与える様々な細胞内および細胞外因子が同定されている。