이 방법이 다루는 핵심 질문은 흥미로운 클라미도모나스의 변형이 사진 행동에 대한 능력을 유지하는지 여부입니다. 이 방법은 간단하고 빠르며 흥미로운 변형이 사진 행동을 나타내는지 테스트하기 쉽습니다. 이 방법은 섬모 운동성의 광생물학 및 세포 생물학에 기여할 수 있습니다.
절차를 시연하는 것은 내 실험실의 실험실 기술자 인 Atsuko Isu가 될 것입니다. 시작하려면 3.5 센티미터 페트리 접시에 두 ~ 3 밀리리터의 세포 현탁액을 넣고 접시를 라이트 박스에 놓습니다. 접시를 부드럽게 흔들어 세포를 균일하게 분배하고 조명 전에 사진을 얻으십시오.
데스크탑 어두운 방에서 녹색 발광 다이오드 또는 LED로 접시를 한쪽에서 비춥니다. 이미지를 얻기 전에 접시를 약 다섯 분 동안 그대로 두십시오. 세포 배양 액적을 사용한 광택시 분석의 경우, 마이크로 피펫을 사용하여 25 마이크로리터의 세포 현탁액 액적을 흰색 플라스틱 플레이트에 직접 놓습니다.
바탕 화면 어두운 방에서 녹색 LED로 한쪽의 물방울을 비추고 이미지를 얻기 전에 세 분 동안 그대로 두십시오. 30 마이크로 리터의 셀 현탁액을 유리 슬라이드에 놓고 측면에 스페이서가있는 18 x 18 밀리미터 커버 슬립을 놓습니다. 녹색 LED가 있는 스페이서 없이 커버 슬립의 한쪽 면에서 샘플을 비추고, 어두운 적색광 아래에서 10X 대물 렌즈로 암장 현미경으로 세포를 관찰합니다.
조명 후, 카메라가 장착된 현미경을 사용하여 20초 동안 셀 조명을 기록한다. 광충격 반응 분석의 경우, 30 마이크로리터의 세포 현탁액을 유리 슬라이드에 놓고 슬라이드 위에 스페이서가 있는 커버 슬립을 놓습니다. 희미한 붉은 빛으로 현미경으로 세포를 관찰하십시오.
셀 움직임을 기록하는 동안 카메라 플래시를 사용하여 플래시 조명을 적용합니다. 측면 조명의 다섯 분 후 클라미도모나스 reinhardtii에서 부정적인 광택시의 대표적인 예가 여기에 표시됩니다. 대부분의 세포는 광원의 반대편에 축적됩니다.
광충격 반응 분석에서, 거의 모든 세포는 광충격 반응을 나타내었다. 세포는 짧은 기간 동안 뒤로 헤엄쳐 나갔고 앞으로 수영을 회복했습니다. 이 절차를 수행하려면 aridimigudolphase 세포를 사용하여 분석 전에 적색광에 노출시킵니다.
적색광에 노출되지 않으면 세포는 빛에 둔감 해집니다. 이 기술은 광충격 반응의 비정상적인 광택시로 다양한 돌연변이를 분리합니다. 또한, 사진 거동에 영향을 미치는 다양한 세포 내 및 세포 외 요인이 확인되었습니다.
